129. Реакция Прауснитца — Кюстнера

Применяется в основном для научно-исследовательских целей. 0,5 мл сыворотки крови больного аллергическим дерматозом (атонический дерматит, экзема, почесуха, крапивница и др.), полученной из стерильно взятой цефибринированной крови, вводят подкожно здоровому человеку (реципиенту). Через 24—48 ч в то же место впрыскивают 0,02 мл раствора подозреваемого аллергена. Реакцию учитывают через 20— 40 мин. При положительном результате на месте введения аллергена образуется волдырь с зоной эритемы в окружности. Реакцию применяют редко, так как имеется опасность заражения реципиента различными инфекциями. Поэтому больного необходимо тщательно обследовать с целью исключения сифилиса, вирусного гепатита, малярии и др.

130. Реакция связывания комплемента, применяемая для диагностики токсоплазмоза

Токсоплазмоз — зоонозное инфекционное заболевание. В практике врача-дерматолога может встречаться тифоподобная, или экзантемоподобная, форма. Она характеризуется пятнисто-папулезной сыпью, которая локализуется на туловище и конечностях. Могут увеличиться лимфатические узлы. Высыпаниям предшествуют, как правило, высокая температура тела, боль в суставах, головная боль. С целью диагностики широко используют реакцию связывания комплемента, которую проводят в серологических лабораториях кожно-венерологических диспансеров.

Необходимые ингредиенты для проведения реакции: свежеприготовленная 2.5 % взвесь трижды отмытых изотоническим раствором натрия хлорида эритроцитов барана; гемолитическая сыворотка — сыворотка кроликов, иммунизированных эритроцитами барана, разведенная в 3 раза меньше титра (тройной титр).

Предварительно 2,5 % взвесь эритроцитов барана и гемолитическую сыворотку, разведенную по тройному титру, смешивают в разных объемах и смесь ставят в термостат при температуре 37 °С (на 30 мин) для сенсибилизации эритроцитов. Требуется комплемент в разведении 1 : 10. В качестве комплемента используют сыворотку крови гвинейских свинок, отделенную от сгустков через сутки после взятия крови. Можно применять сухой комплемент. Антиген готовят из перитонеального экссудата зараженных токсоплазмозом белых мышей, берут в рабочей дозе. Для проведения реакции необходимы: нормальная кроличья сыворотка в рабочем разведении; гипериммунная токсоплазменная сыворотка в рабочем разведении; исследуемая сыворотка, инактивированная подогреванием при температуре 56 °С в течение 30 мин и разведенная в соотношении 1 : 5.

Реакцию проводят по следующим этапам: 1) титрование чистого комплемента в присутствии антигена в объеме 1,25 мл; 2) проведение основной реакции в объеме 1,25 мл. Реакцию считают положительной при задержке гемолиза не менее чем на ++ в титре 1 : 5. В этом случае ставят количественные пробы, то есть титруют положительные сыворотки в разведениях 1 :5,1 : 10 : 1 :20, 1 :40,1 :80, 1 : 160 и 1 :320.

В практической деятельности врача чаще применяется капельная методика проведения реакции связывания комплемента. Ингредиенты вносят в лунки полистироловой пластинки туберкулиновым шприцем (без поршня), на который надета прямосрезанная игла длиной 2 см. При этом нужно стараться, чтобы капли были одинаковой величины.

С целью разведения всех комплементов применяют вероналовый буфер, рабочий раствор которого готовят перед проведением реакции в соотношении: 1 часть буфера и 4 части дистиллированной воды. Для проведения реакции используют 0,4 % взвесь эритроцитов барана в вероналовом буфере. Гемолитическую систему готовят непосредственно перед проведением реакции. В реакции используют сухой комплемент и гемолизин в разведении соответственно 1 : 75 и 1 : 500.

В каждую лунку полистироловой пластинки вносят по 1 капле сыворотки, разведенной вероналовым буфером (разведения 1:5, 1:10 и т. д.), добавляют 1 каплю антигена и 1 каплю комплемента, разведенных в рабочей дозе. В лунку с контрольной сывороткой прибавляют 1 каплю буфера. При проведении реакции используют пипетки отдельно для каждого ингредиента, в случае работы одной пипеткой ее промывают буфером после добавления каждого реактива.

С целью предупреждения высыхания капель полистироловую пластинку накрывают такой же пластинкой и помещают в камеру на 16— 18ч при температуре 40 °С. После инкубирования в каждую лунку добавляют по 2 капли сенсибилизированной гемолитической системы и пластинки помещают в термостат на 2 ч при температуре 37 °С. По истечении этого времени их снова помещают в камеру на 15 мин при температуре 40 °С, затем учитывают результаты.

В качестве контроля используют положительную и отрицательную сыворотки. Антиген: 1 капля буфера + 1 капля антигена + 1 капля комплемента; комплемент: 2 капли буфера + 1 капля комплемента.

При оценке результатов лишь контрольная положительная сыворотка должна показать определенный титр. Реакцию считают положительной при задержке гемолиза не менее чем на ++ в титре 1 :5.

Для проведения реакции связывания комплемента при серологической диагностике токсоплазмоза чаще используют сухой антиген,