39. Длительность кровотечения из мочки ушной раковины при пурпуре

С помощью скарификатора производят прокол в области мочки ушной раковины и фиксируют длительность кровотечения, свидетельствующую о степени тромбопении. В норме кровотечение длится около 3 мин.

40. Исследование микроэлементов

На современном этапе развития учения о заболеваниях кожи определение содержания микроэлементов носит научный и практический характер. Существует несколько методов; в практике чаще используют колориметрический, спектрографический и гистохимический. Материалом для исследования служат биопсированная ткань, кровь, моча, кал, сыворотка, которые предварительно высушивают и озоляют в муфельной печи. Золу используют для колориметрического и спектрографического исследований. Для гистохимического исследования биоптат кожи закрепляют обычными или специальными фиксаторами и готовят гистологические препараты по определенным методикам в зависимости от цели исследования.

Количество микроэлементов определяют чаще методом эмиссионного спектрального анализа. Кровь для исследования берут из локтевой вены утром натощак в количестве 10 мл (у женщин не ранее чем через 6 дней после окончания очередной менструации). Шприц предварительно 2 раза промывают дистиллированной водой. Накануне взятия крови пробирки обрабатывают хромовой смесью, многократно прополаскивают проточной водопроводной, а затем бидистиллированной водой и помещают в сушильный шкаф.

Кровь помещают в химически чистые фарфоровые тигли (обработанные таким же способом, как и пробирки) и высушивают в сушильном шкафу при температуре 80 °С, а затем озоляют в платиновых или фарфоровых чашках, обработанных концентрированной хлористоводородной кислотой, промытых проточной водопроводной и бидистиллированной водой. Озоление производят в муфельной печи при температуре от 400 до 450 °С.

Для определения содержания меди, марганца, кремния, алюминия, титана и железа в крови пользуются одним из наиболее точных и чувствительных методов — эмиссионным спектральным анализом, при котором мало расходуется исследуемого вещества и можно одновременно определить количество нескольких микроэлементов.

Для получения спектра элементов исследуемых проб пользуются отечественным спектрографом ИСП-22 с генератором переменного тока, смонтированным по схеме Г. А. Бабенко и К. В. Милославского (1961).

Схема этого генератора отличается от обычной схемы активизированной дуги переменного тока следующими особенностями.

1. Введением в схему балластного сопротивления и в цепь генератора стабилизирующего сопротивления, что значительно повышает стойкость горения дуги.

2. Использованием более мощного трансформатора и трехискровых разрядников, что увеличивает мощность генератора до 500 Вт.

3. При спектрографии можно пользоваться только дуговым режимом,

По заключению авторов схемы и нашим собственным наблюдениям, использование описанного генератора активизированной дуги переменного тока повышает чувствительность на 1—1,5 порядка, наряду с этим, вследствие отсутствия блуждающего катодного пятна, лучше видны результаты.

Свет от вольтовой дуги через собирательную линзу переходит в щель спектрографа, ширина которой равна 0,008 мм. Проникнув в щель, луч света попадает на кварцевую призму и разлагается на спектр, который попадает на фотопластинку и дает на ней фотографическое изображение линий элементов, входящих в состав спектра. Фотопластинку помещают в кассету размером 9x24 см с разворотом 5,25 см.

Сжигание испытуемых проб перед щелью спектрографа производят на угольных электродах, специально очищенных для целей спектрального анализа. В таких электродах не содержится никаких минеральных веществ, кроме следов бора, от присутствия которого освободиться очень трудно.

Золу испытуемой пробы помещают в кратер нижнего электрода, изготовленного по методу, предложенному Г. А. Бабенко (1961). Электроды изготавливают с помощью фрезы — металлического стержня с валиком-ограничителем, который отделяет рабочую часть фрезы от рукоятки. Длина рабочей части фрезы 10 мм. Головка фрезы диаметром 3,5 мм заканчивается иглой диаметром 0,5 мм и длиной 2 мм. В спектрально чистых угольных стержнях длиной 10 мм фрезой высверливают проходной канал разного диаметра в соответствии с формой фрезы. Полученный таким образом угольный электрод представляет собой полый цилиндр, на противоположных концах которого отверстия имеют диаметр 3,5 и 0,5 мм. В отверстие большего диаметра электрода помещают навеску (10 мг) золы используемых проб, предварительно смешанную с порошком спектрально чистого угля в соотношении 1 : 1, и уплотняют угольным стержнем соответствующего диаметра. После этого электрод с пробой отверстием большего диаметра закрепляют на стержне соответствующего диаметра, изготовленном из спектрально чистого угля.

Верхний угольный электрод затачивают на конус. Во время работы спектрографа температура между угольными электродами выше 4000°С. По мере горения электродуги отверстие малого диаметра 8 нижнем электроде, через которое испаряется проба из кратера, постепенно увеличивается. Порошок из спектрально чистого угля, который служит основой кратера такого закрытого электрода, предупреждает возможность сплавления пробы. Таким образом, обеспечивается полное сжигание пробы без потери анализируемого вещества.

Спектрография испытуемых проб производится в следующем порядке: шкала, железо, испытуемые пробы, стандарты, железо, шкала. Экспозиция для шкалы и железа равняется 20 с, для испытуемых проб и стандарта — 2 мин. Испытуемые пробы подвергают спектрографии 2—3 раза, при расчетах пользуются средними данными. Спектры снимают на спектрографические фотопластинки для научных целей размером 9x12 см2, типа II, светочувствительность—11 единиц по ГОСТ 2814-50. После окончания съемки фотопластинку проявляют и закрепляют обычными методами (в качестве проявителя используют метол-гидрохинон, в качестве закрепителя — гипосульфит). В результате технической обработки на фотопластинке получают спектральные линии элементов, располагающихся в интервале длин волн 228,3— 500,0 нм. Полученные спектры расшифровывают путем сопоставления положения спектральных линий в испытуемых спектрограммах с положением линий известных длин волн в спектрограммах железа. Для облегчения расшифровки спектрограмм пользуются атласом дуговых спектров элементов С. К. Калинина с соавторами (1959). Определение линий испытуемых микроэлементов производят по характерным длинам волн всей серии, а фотометрию — по следующим: марганец — 280,1 нм, кремний—288,2 нм, алюминий — 308,2 нм, титан — 323,7 нм, медь — 327,4 нм. На этих длинах волн спектральные линии изучаемых элементов получаются наиболее интенсивными и удобными для исследования. Качественное определение микроэлементов производят с помощью спектрального микроскопа МИР-20 и спектроскопа ПС-18. Для количественного определения микроэлементов в испытуемых пробах готовят серию стандартов с содержанием испытуемых элементов в количествах 1, 0,1, 0,01,0,001 %.

Стандарты готовят на искусственной солевой основе, близкой по составу микроэлементов к испытуемой среде. Приготовление солевой основы и прибавление к ней различных элементов необходимо потому, что, по данным многих авторов, интенсивность спектральных линий зависит от сопутствующих элементов.

Состав солевой основы рассчитывают из среднего содержания микроэлементов в крови животных. Для приготовления 100 г солевой основы стандарта для крови берут: NaCl — 45,1 г, КН₂РО₄ — 52,5 г, СаО — 2 г, MgO — 0,4 г. Смесь тщательно растирают в агатовой ступке. После прибавления к солевой основе солей микроэлементов в соответствующих количествах стандарты также тщательно растирают в агатовой ступке и сохраняют в биксах с притертой пробкой. Все соли, предназначенные для приготовления стандартов, проверяют спектрально на чистоту и при наличии в их составе даже ничтожных примесей посторонних элементов считают непригодными. Количественное содержание микроэлементов в испытуемых пробах определяют по методу Питчи путем сравнения в микрофотометре МФ-2 интенсивности зачернения соответствующих линий в спектрограммах стандартов.

По результатам фотометрии строят градуированный график. При его построении на оси ординат откладывают показания микрофотометра либо логарифм относительной интенсивности линии анализируемого элемента, а на оси абсцисс — логарифм из чисел, указывающих на процентное содержание анализируемого элемента в стандартах. По графику определяют процентное содержание микроэлементов в пробе. При спектрографических методах исследования микроэлементов в биологических материалах С. Г. Богмиолов с соавторами (1958), Г. Д. Литовченко и С. А. Щипицин (1958) допускают среднюю относительную ошибку до 15 %, а Б. Е. Гордон (1962) —от 3 до 15 %. М. М. Ищенко (1961) при определении концентрации меди отмечает среднюю ошибку в пределах от 7,4 до 14,98 %. По нашим данным, относительная ошибка методики для марганца— 6,2 °/о, меди — 7%, титана —9%, алюминия— 11% и кремния—12%. Аналогично приготавливают исследуемую золу и стандарты для других биологических сред (кожа, сыворотка крови, моча, кал).

Колориметрический метод, предложенный Г. А. Бабенко, позволяет в одной пробе биологической среды определить четыре биоэлемента (медь, цинк, кобальт, железо). Расчет ведут на сырое вещество или золу. Этот метод более громоздкий, но более точный и используется чаще в научных целях.

Гистохимическое исследование микроэлементов проводится чаще всего G целью определения гистотопографии биоэлемента в очаге поражения и окружающей его ткани. Этот метод также используется в научных целях.

Важная роль микроэлементов в жизнедеятельности организма общеизвестна и доказана. Определенное значение микроэлементы также имеют, в поддержании нормального состояния кожи и ее придатков. Например, медь участвует в процессах ороговения, пигментообразования; количество кремния повышается при старении кожи; недостаточность цинка отмечена при трофических язвах, опухолях кожи; при отравлении свинцом изменяется цвет кожи, повышается ее фоточувствительность. Доказано нарушение содержания микроэлементов в коже при вульгарной пузырчатке, коллагенозах, алопеции, псориазе, экземе, нейродермите, почесухе и других дерматозах.