7.1.2. Технология получения грибных энтомопатогенных

препаратов

Энтомопатогенные препараты на основе микроскопических гри­бов способны поражать большое количество насекомых-вредителей, вы­зывая у них заболевание - микоз. По сравнению с бактериями и вируса­ми грибы обладают рядом особенностей: а) поражение происходит не через пищеварительный тракт, а непосредственно через поверхностные ткани; б) насекомые поражаются в фазе развития куколки, что не наблюдается при воздействии на них микробных препаратов; в) грибы характеризуются относительно большой скоростью роста и огромной репродуктивной способностью; в виде спор могут длительное время находиться в природных условиях без заметного снижения энтомопато- генной активности.

Воздействие грибного препарата на насекомое начинается с про­никновения споры гриба в полость его тела через кожные покровы. По­пав в тело насекомого, грибная спора прорастает в гифу, затем разраста­ется в мицелий, от которого отчленяются гифальные тельца - конидии, составляющие инфекционную единицу энтомопатогенных грибов. Как правило, гибель наступает от большого количества токсинов, выделяю­щихся грибами. Если же токсинов недостаточно либо насекомое не чув­ствительно к ним, гибель наступает после того, как нитевидный мице­лий заполняет все тело насекомого, поражая прежде всего мышечную ткань. В зависимости от размеров насекомого гибель наступает в пери­од от двух до восьми дней.

В России производится грибной препарат боверин на основе гри­ба рода Beauveria. Этот препарат применяют для уничтожения около 60- ти видов насекомых-вредителей, преимущественно жуков. Он безвреден для теплокровных животных и человека, не вызывает ожогов у расте­ний.

Получают боверин с помощью как глубинного, так и поверхност­ного культивирования промышленного штамма гриба.

Получение боверина методом глубинного культивирования

Получение боверина этим методом осуществляют в строго асеп­тических условиях. В состав питательной среды входят следующие компоненты (в %): дрожжи кормовые - 2; крахмал - 1; хлорид натрия - 0,2; хлорид марганца - 0,01; хлорид кальция - 0,05. Продолжительность культивирования составляет трое-четверо суток при температуре 25-28 ^оС. Выращивание гриба проводят в условиях постоянного пере­мешивания и принудительной аэрации. В ходе глубинного культивиро­вания гриба в течение первых суток-полтора кормовые дрожжи полно­стью лизируются, а гриб за это время проходит все фазы своего роста. К концу полного созревания гриба выделяется максимальное количество ферментов, что ведет к лизису мицелия и способствует накоплению ко­нидий. Готовую культуральную жидкость подвергают сепарации или фильтрации. После фильтрования получают пасту влажностью 70-80 %, которую направляют на распылительную сушилку. Высушенные споры представляют собой мелкодисперсный порошок влажностью 10 %. По­лученный порошок стандартизуют необходимым количеством каолина, иногда в качестве добавок в готовый препарат вводят смачиватель и прилипатель.

Технология получения боверина методом поверхностного культивирования гриба

Этот способ более длителен и трудоемок, поэтому имеет ограни­ченное применение.

Поверхностное культивирование гриба проводят как в жидкой пи­тательной среде, так и на полутвердых, на этих средах гриб обладает хорошей скоростью роста. Его микробиологическое производство за­вершается на стадии получения спороносной пленки, которую впослед­ствии снимают, высушивают, измельчают и при необходимости стан­дартизуют соответствующим количеством наполнителя. Среди возмож­ных приемов, используемых в производстве боверина поверхностным культивированием, различают: а) культивирование гриба на жидких средах без автоклавирования, перемешивания и аэрации; б) культивиро­вание на твердых автоклавированных средах без перемешивания и аэрации. Эти приемы основаны на том, что гриб хорошо растет на раз­личных растительных субстратах - отходах сельскохозяйственной про­дукции.

Культивирование гриба на жидких средах без автоклавирования, перемешивания и аэрации проводят без предварительной стерилизации среды, ее просто нагревают до кипения, разливают в деревянные карка­сы, покрытые изнутри полиэтиленовой пленкой. Среду, охлажденную до 30-40 ^оС, засевают сухими спорами. Сверху каркасы накрывают по­лиэтиленовой пленкой, которую после образования спороносной пленки гриба снимают. В качестве сред используют всевозможные отвары, например: из сахарной свеклы, картофеля, тыквы, зерна, муки.

В процессе культивирования гриба на твердых автоклавирован- ных средах без перемешивания и аэрации предусматривается стерили­зация размещенных по отдельным емкостям питательных сред (сусло- агар, картофель, морковь, кукуруза, корки арбуза) в течение сорока ми­нут при 110 ^оС. В стерильный субстрат вносят сухие споры, емкости с субстратом встряхивают до однородного распределения посевного ма­териала и оставляют стоять при температуре окружающего воздуха 18­23 ^оС. Образование конидиоспор завершается к концу 12-15 суток. Культуру гриба с остатками субстрата извлекают из емкостей и высу­шивают на стеллажах при 25-28 ^оС. Получение готового препарата за­вершают размолом материала до мелкодисперсного порошка.