- •Часть I
- •Содержание
- •Аминокислоты
- •Ионные формы аминокислот
- •Химические свойства аминокислот
- •Реакции аминокислот, обусловленные одновременным присутствием карбоксильных и аминогрупп:
- •Реакции аминокислот, обусловленные присутствием карбоксильных групп:
- •Реакции аминокислот, связанные с присутствием аминогрупп:
- •Методы разделения и идентификации аминокислот
- •Пептиды
- •Тема I.
- •Химические свойства аминокислот.
- •Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге.
- •Тема II.
- •Качественные реакции на аминокислоты.
- •Реакция с формальдегидом
- •Реакция Адамкевича
- •Реакция Гопкинса-Коле
- •Качественные реакции на пептиды и белки.
- •Физико-химические свойства белков
- •Определение изоэлектрической точки белков
- •Реакции осаждения белков
- •Фракционное осаждение белков методом высаливания
- •Сложные белки
- •Гемопротеиды
- •Гемоглобин
- •Выделение гемоглобина
- •Качественная реакция на гемовую группу. Бензидиновая проба
- •Фосфопротеиды
- •Выделение казеина
- •Определение фосфорной кислоты в казеине
- •Методы количественного определения белка
- •Абсорбционная спектроскопия
- •Тема I. Методы выделения белков в гомогенном состоянии
- •Тема II. Методы количественного определения белка
- •Построение калибровочных графиков Биуретовый метод Таблица 1
- •Метод Лоури Таблица 2
- •Метод Брэдфорд Таблица 3
- •Приложение Строение и номенклатура аминокислот
- •Протеиногенные аминокислоты
- •Практикум по общей и экологической биохимии
- •Часть I
- •220009 Минск
Реакция с формальдегидом
В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.
В обе пробирки добавляют по 2 капли раствора формалина.
Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H2SO4 (конц.), следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивались.
Наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.
Реакция Адамкевича
В первую пробирку вносят 5 капель 0.01% раствора триптофана, во вторую – 5 капель 1% раствора белка.
В обе пробирки добавляют по 2 мл концентрированной CH3COOH.
В случае выпадения осадка пробирки осторожно нагревают до его растворения, после чего охлаждают.
Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H2SO4 (конц.), следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивалась.
Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.
Реакция Гопкинса-Коле
В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.
В обе пробирки добавляют по 1 мл глиоксалевой кислоты и по 10 капель 0.04 М раствора сульфата меди (II).
Далее в обе пробирки приливают небольшими порциями (по несколько капель) 2 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку каждый раз в ванночке со льдом.
Оставляют на 10 мин при комнатной температуре и ставят на 5 мин в кипящую водяную баню.
Отмечают появление окраски.
Реакция с 5-(оксиметил)фурфуролом (реакция Шульце-Распайля)
В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.
В обе пробирки добавляют по 4 капли сахарозы.
Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H2SO4 (конц.), следя, чтобы жидкости не перемешивалась.
Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.
Качественная реакция на пролин (нингидриновая реакция)
В пробирку к 3 мл 0.01% раствора пролина добавляют 5 капель 1% раствора нингидрина в 95% ацетоне.
Содержимое пробирки перемешивают и нагревают на водяной бане при 70°С в течение 5 мин.
Отмечают появление окраски и ее отличие от типичной окраски нингидриновой реакции.
Качественная реакция на тирозин (реакция Миллона)
В пробирку к нескольким кристаллам тирозина добавляют 5 мл 2.5% раствора серной кислоты и перемешивают до полного растворения.
Приливают 1 мл реактива Миллона, встряхивают и оставляют при комнатной температуре (для ускорения реакции раствор можно слегка прогреть).
Отмечают появление окраски.
Качественная реакция на аргинин (реакция Сакагучи)
В пробирку наливают 2 мл 0.01% раствора аргинина, добавляют 2 мл 10% раствора NaOH и 5 капель 0.2% спиртового раствора -нафтола.
Содержимое пробирки хорошо перемешивают, приливают 0.5 мл раствора гипобромита (NaBrO) и вновь перемешивают.
Немедленно добавляют 1 мл 40% раствора мочевины (для стабилизации окраски).
Отмечают появление окраски.
Качественная ракция на гистидин (реакция Паули)
К 1 мл 1% раствора сульфаниловой кислоты в 5% растворе соляной кислоты добавляют 2 мл 0.5% раствора нитрита калия (натрия).
Пробирку сильно встряхивают и немедленно добавляют сначала 2 мл 0.01% раствора гистидина
Затем после перемешивания содержимого пробирки приливают 6 мл 10% раствора карбоната натрия.
Отмечают появление окраски.
Качественная реакция на метионин (по Мак-Карти и Салливану)
К 5 мл 0.02% раствора метионина прибавляют (при помешивании) сначала 1 мл 14.3М раствора NaOH, а затем 0.3 мл 10% раствора нитропруссида Na.
Смесь нагревают в течение 10 мин на водяной бане при температуре 35-400С.
Затем смесь охлаждают 2 мин в ледяной воде и добавляют при помешивании 5 мл смеси соляной и фосфорной кислот.
Смесь взбалтывают 1 мин и охлаждают водой комнатной температуры в течение 10 мин.
Отмечают появление окраски.
Качественная ракция на глицин (реакция Циммермана)
К 2 мл 0.01% раствора глицина (рН 8.0) приливают 0.5 мл водного раствора о-фталевого диальдегида.
Отмечают появление окраски и выпадение осадка.