- •Часть I
- •Содержание
- •Аминокислоты
- •Ионные формы аминокислот
- •Химические свойства аминокислот
- •Реакции аминокислот, обусловленные одновременным присутствием карбоксильных и аминогрупп:
- •Реакции аминокислот, обусловленные присутствием карбоксильных групп:
- •Реакции аминокислот, связанные с присутствием аминогрупп:
- •Методы разделения и идентификации аминокислот
- •Пептиды
- •Тема I.
- •Химические свойства аминокислот.
- •Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге.
- •Тема II.
- •Качественные реакции на аминокислоты.
- •Реакция с формальдегидом
- •Реакция Адамкевича
- •Реакция Гопкинса-Коле
- •Качественные реакции на пептиды и белки.
- •Физико-химические свойства белков
- •Определение изоэлектрической точки белков
- •Реакции осаждения белков
- •Фракционное осаждение белков методом высаливания
- •Сложные белки
- •Гемопротеиды
- •Гемоглобин
- •Выделение гемоглобина
- •Качественная реакция на гемовую группу. Бензидиновая проба
- •Фосфопротеиды
- •Выделение казеина
- •Определение фосфорной кислоты в казеине
- •Методы количественного определения белка
- •Абсорбционная спектроскопия
- •Тема I. Методы выделения белков в гомогенном состоянии
- •Тема II. Методы количественного определения белка
- •Построение калибровочных графиков Биуретовый метод Таблица 1
- •Метод Лоури Таблица 2
- •Метод Брэдфорд Таблица 3
- •Приложение Строение и номенклатура аминокислот
- •Протеиногенные аминокислоты
- •Практикум по общей и экологической биохимии
- •Часть I
- •220009 Минск
Определение изоэлектрической точки белков
Определение изоэлектрической точки желатина по минимуму набухания
В три пробирки вносят по 0.2 г порошка желатина.
В первую пробирку наливают 1 мл буферного раствора с рН 1.0, во вторую – с рН 4.7, а в третью – с рН 9.0.
Пробирки осторожно встряхивают и оставляют на 1 ч.
Затем определяют высоту геля в пробирках.
Зарисовывают результаты, делают вывод о численном значении изоэлектрической точки желатина.
Определение изоэлектрической точки желатина по мутности (по коагуляции)
В три пробирки наливают по 0.5 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.
Затем в пробирки добавляют по 0.5 мл 0.5% раствора желатина.
Далее во все пробирки приливают по 1 мл этилового спирта.
Наблюдают коагуляцию желатина (образование мутности) в одной из пробирок.
Записывают и объясняют результаты.
Определение изоэлектрической точки казеина по мутности (по коагуляции)
В три пробирки наливают по 1 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.
Затем в пробирки добавляют по 1 мл золя казеина.
Через 10 мин наблюдают максимальную коагуляцию казеина (наибольшее помутнение) в одной из пробирок.
Сравнивают полученные результаты с изоэлектрической точкой желатина.
Делают вывод о факторах, обеспечивающих устойчивость казеина.
Реакции осаждения белков
Осаждение белков при нагревании
В пять пробирок наливают по 2 мл 1% раствора яичного белка.
Содержимое 1-ой пробирки нагревают.
Во 2-ую пробирку добавляют каплю 1% CH3COOH и нагревают.
В 3-ю пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH3COOH и нагревают.
В 4-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH3COOH, несколько капель насыщенного раствора NaCl и нагревают.
В 5-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% раствора NaOH и нагревают.
Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
В три сухие пробирки наливают по 2 мл концентрированных азотной, соляной и серной кислот.
Наклонив каждую пробирку, осторожно по стенке приливают в нее по 0,5 мл 1% раствора яичного белка так, чтобы он не смешивался с кислотой.
Наблюдают появление белого аморфного осадка на границе двух жидкостей.
Все пробирки встряхивают.
Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
Осаждение белков органическими кислотами
В пробирку наливают 2 мл раствора белка и добавляют несколько капель 5% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ).
Наблюдают, записывают и объясняют результат.
Осаждение белков спиртом
В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют 2 мл C2H5OH и взбалтывают.
Наблюдают, записывают и объясняют результат.
Осаждение белков ацетоном
В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют осторожно по стенке пробирки 0.5 мл ацетона.
Наблюдают, записывают и объясняют результат.
Осаждение белков фенолом и формалином
В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
Далее в первую пробирку добавляют 1 мл насыщенного водного раствора фенола, а во вторую – 1 мл формалина.
Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
Осаждение белков солями тяжелых металлов
В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
Далее в первую пробирку медленно, по каплям при встряхивании добавляют раствор сульфата меди, а во вторую – раствор ацетата свинца.
Наблюдают появление осадков.
Затем в каждую пробирку добавляют соответствующий раствор в избытке.
Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
Осаждение белков реактивами на алкалоиды
В три пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
Растворы подкисляют 2 каплями 1% раствора уксусной кислоты (в каждую пробирку).
В первую пробирку добавляют 5 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты.
Во вторую – 5 капли 10% раствора таннина.
В третью – 3 капли 5% раствора HCl, а затем 5 капель 5% раствора гексацианоферриата калия, взбалтывая после добавления каждой капли.