6 курс / Судебная медицина / Современные_аспекты_судебно_медицинской_экспертизы_и_криминалистики

К ВОПРОСУ СОХРАНЯЕМОСТИ СУМИ-АЛЬФА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

З.А. Юлдашев

Ташкентский фармацевтический институт

Актуальность исследования. Нередко на судебно-химический и хими- ко-токсикологический анализ направляются объекты, а также вещественные доказательства, в которых начались процессы гниения. В таких случаях необходимо знать о сохраняемости токсикологически важных веществ в биологическом материале, так как это позволяет правильно оценить результаты анализа. Также из объектов, подвергавшихся гнилостному разложению, экстракты получаются сильно загрязненными, что мешает проведению аналитических определений.

В литературе не встречались сведения, касающиеся изучения вопросов сохраняемости пестицида суми-альфа в биологических объектах и влияния на этот процесс различных факторов.

Учитывая широкое применение этого пестицида в сельском хозяйстве, его высокую токсичность, а также описанные в литературе случаи острого и хронического отравления людей и животных мы поставили перед собой задачу изучить вопросы сохраняемости суми-альфа в биологических объектах и влияние на этот процесс этилового спирта, применяемого в качестве консерванта.

Этиловый спирт, добавленный в качестве консерванта, несколько замедляет процессы гниения биологического объекта и способствует увеличению сроков сохраняемости исследуемых веществ.

Материалы и методы исследования. Для изучения вопросов сохраняе-

мости суми-альфа в ряд конических колб вместимостью 100 мл вносили по 10 г биологического объекта (печень человека, погибшего в результате других причин). К объектам добавляли определенное количество (400 мкг) сумиальфа. Готовые модельные объекты разделяли на две группы. Объекты первой группы оставляли без изменения с плотно закрытыми крышками при комнатной температуре. К объектам второй группы добавляли этиловый спирт до покрытия твердых частиц. Затем плотно закрывали крышки и оставляли в лабораторных условиях. Из этих объектов суми-альфа изолировали по разработанной методике – экстракцией бутанолом в различные сроки (1, 5, 10, 15, 30, 60 дней). Количественное содержание его определяли по разработанной методике газожидкостной хроматографии.

Результаты исследования. При обычных условиях хранения биологического объекта суми-альфа не обнаруживается к 30 дню хранения. Прибавление этилового спирта как консерванта замедляет процессы разложения, гниения и увеличивает сроки сохраняемости суми-альфа в биологическом объекте, что позволяет определить его в течение двух месяцев после отравления.

170

Выводы. При отравлении суми-альфа судебно-химический и химикотоксикологический анализ необходимо проводить в вышеуказанные сроки.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПИРИНОЛАКТОНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

М.И. Алиходжаева

Ташкентский фармацевтический институт

Актуальность исследования. Спиронолактон (верошпирон, альдактон) относится к калийсберегающим диуретикам, является конкурентным специфическим антагонистом альдостерона. Большинство диуретиков, в том числе и спиронолактон, входят в список лекарственных средств, которые наиболее часто вызывают острые отравления. В связи с этим изучение спиронолактона в химико-токсикологическом отношении является актуальной задачей.

Материалы и методы. Основываясь на результатах экспериментальных данных, полученных нами, при экстракции спиронолактона из водных растворов, для выделения его из биологических жидкостей (кровь, моча) в качестве экстрагента был выбран диэтиловый эфир. Спиронолактон из крови был выделен следующим образом: к 5 мл крови прибавляют 5 мл насыщенного раствора натрия хлорида и подщелачивают 0,1 н раствором натрия гидроксида до рН 8,0-9,0. Содержимое колбы перемешивают и прибавляют 10 мл диэтилового эфира. Экстрагируют трижды. Эфирные извлечения упаривают, и полученный сухой остаток растворяют в этаноле. С этаноловым раствором проводят качественный и количественный анализ. Для выделения спиронолактона из мочи поступают следующим образом: к модельной смеси биологической жидкости, содержащей определенное количество спиронолактона, прибавляют натрия хлорид до насыщения. Добавляют 0,1 н раствора натрия гидроксида для создания рН 8,0-9,0 и экстрагируют диэтиловым эфиром трижды. Эфирные извлечения объединяют и органический растворитель отгоняют. Сухой остаток растворяют в этаноле и проводят анализ.

Для хроматографирования в тонком слое сорбента используют систему растворителей хлороформ-этилацетат-метанол (10:5:1) и проявители – ультрахемископ УФ при 254 нм и пары йода.

Для количественного определения спиронолактона, выделенного из биологической жидкости применяют УФ-спектрофотометрию. При этом рабочая длина волны 238 нм, где спиронолактон дает максимум светопоглощения. Раствором сравнения является этанол.

Результаты исследования. Предложенная методика изолирования спиронолактона из крови позволяет экстрагировать его в количестве 63,5%. Результаты, полученные при изолировании его из мочи показывают, что спиронолактон экстрагируется при этом в количестве 71,4%.

171

Выводы. Предлагаемые методы определения спиронолактона в биологических жидкостях (крови и мочи) могут быть использованы при судебнохимической экспертизе отравлений лекарственными препаратами, содержащими спиронолактон.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ И НАКОПЛЕНИЕ СУМИ-АЛЬФА ВО ВНУТРЕННИХ ОРГАНАХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

З.А. Юлдашев

Ташкентский фармацевтический институт

Актуальность. Суми-альфа – синтетический пиретроид, который широко применяется как высокоэффективный инсектицид против различных вредителей растений в сельском хозяйстве Республики Узбекистан. Он относится ко второму классу токсических веществ и, в известных случаях, может стать причиной отравления людей и животных. В этих случаях для установления факта отравления на судебно-химическое или химикотоксикологическое исследование направляются внутренние органы отравленных людей или животных. На эти исследования направляются те внутренние органы и биологические жидкости, в которых наблюдается наибольшее накопление отравляющего вещества, для чего необходимо знать закономерности его распределения и накопления.

Исследования, посвященные изучению вопросов распределения и накопления суми-альфа во внутренних органах животных, в литературе представлены недостаточны.

Целью настоящей работы является изучение распределения и накопления пестицида суми-альфа во внутренних органах лабораторных животных.

Материалы и методы. Опыты проводили на кроликах обоего пола, которым вводили растворы суми-альфа в растительном масле в желудок с помощью зонда. Концентрация масляных растворов составляла 1,2 г/кг. Симптомы отравления животных пестицидом суми-альфа наблюдались уже через 20-25 минут после введения пестицида и выражались в обильном слюнотечении, треморе конечностей, нарушении координации движений, беспорядочном прыгании. Некоторые животные погибали в течение первого часа после отравления. Оставшихся в живых кроликов забивали. У отравленных животных брали внутренние органы, биологические жидкости и измеряли их вес и объем. Изолирование суми-альфа из этих органов проводили разработанными нами методиками с помощью экстракции бутанолом. Количественное содержание суми-альфа определяли по разработанной нами методике газожидкостной хроматографии.

Результаты исследования. Проведенные экспериментальные работы показали, что наибольшее количество суми-альфа распределяется и накапливается в желудке (20-25%), тонком кишечнике (2-5%), крови, печени. В относительно небольшом количестве пестициды определяются в толстом кишеч-

172

нике, почках, селезенке. Большое содержание суми-альфа в желудке и тонком кишечнике может быть объяснено неполным всасыванием пестицида из этих органов до момента гибели животных.

Выводы. При отравлении пестицидом суми-альфа на химикотоксикологический и судебно-химический анализ необходимо направлять желудок и тонкий кишечник с содержимым, печень и кровь.

ОБНАРУЖЕНИЕ КОНТЕМНОЛА В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ

М.М.Шахитов, М.М.Ибрагимова, Л.Т.Икрамов

Ташкентское городское бюро СМЭ

Актуальность. В последнее время в практике судебных медиков участились случаи отравлений лекарственным препаратом контемнолом, преимущественно с целью суицида. Основными показаниями к применению препарата являются маниакальные состояния различного генеза, профилактика и лечение психозов, эпилепсии, аффективных нарушений у больных хроническим алкоголизмом. Контемнол (лития карбонат) – белый щелочной порошок, трудно растворимый в воде, нерастворимый в спирте. Отсутствие каких-либо научно-обоснованных методик обнаружения контемнола в трупном материале говорит о несомненной актуальности этой проблемы.

Цель исследования: разработка методики обнаружения контемнола в трупном материале в связи с отсутствием таковой и участившимися случаями преднамеренного отравления с целью суицида.

Материалы и методы исследования. Объектом настоящего исследо-

вания послужили внутренние органы (почка, печень, желудок) трупов, отравленных данным препаратом, а также таблетки контемнола, обнаруженные в содержимом желудка (среда в желудке сильно щелочная).

Обнаружение контемнола в трупном материале проводили на основе идентификации отдельных компонентов, входящих в состав лекарственного препарата.

1. Исследование таблеток, обнаруженных в желудке, проводили следующим образом: одну таблетку измельчили и растворили в 5 мл дистиллированной воды. Данный раствор для полноты растворения нагревали при периодическом перемешивании, затем фильтровали через бумажный фильтр. Полученный фильтрат выпаривали на водяной бане до сухого остатка, который затем растворили в 10 каплях дистиллированной воды. Полученный раствор исследовали микрокристаллическими реакциями на катионы лития следующим образом: 1) на предметное стекло поместили каплю исследуемого раствора, которую смешали сначала с каплей 15% раствора уротропина, затем с каплей 15% раствора ферроцианида калия (правильно сформированные блестящие желтые октаэдры); 2) к капле нейтрализованного раствора прибавляли каплю 5% раствора двухзамещенного фосфата натрия и дали высохнуть (кристаллы в виде сферолитов); 3) введенная в каплю исследуемого

173

раствора крупинка фторида аммония осадила фторид лития в виде кристал- лов-розеток из прямоугольников и кубов; 4) в каплю исследуемого раствора ввели кристаллик гидрокарбоната натрия, через некоторое время образовался осадок лития карбоната, кристаллизовавшийся в виде шариков, покрытых шипами и розеток из игл. Параллельно с исследуемым раствором провели эти реакции с контрольной пробой, состоящей из карбоната лития, результаты были аналогичны.

2.Исследование таблеток и жидкости, находившихся в желудке, на наличие аниона карбоната проводили следующим образом: измельченную таблетку и 2 мл желудочной жидкости поместили в разные пробирки и залили по 5 мл дистиллированной водой, несколько минут периодически перемешивали для полноты растворения, затем отфильтровали через бумажный фильтр. Содержимое каждой пробирки разделили на 2 части и провели реакции осаждения и разложения карбоната: 1) к ½ части содержимого каждой пробирки добавляли по несколько крупинок хлорида бария – появлялся белый хлопьевидный осадок характерный для карбоната бария; 2) оставшиеся части содержимого каждой пробирки подкисляли 10% раствором серной кислоты, при этом наблюдали бурное выделение пузырьков углекислого газа.

3.Открытие катионов лития в биологическом материале проводили следующим образом: по 0,5 г средней пробы желудка, печени, почки измельчили, разрушили в колбе Къельдаля смесью, состоящей из 7,5 мл концентрированной азотной, 15 мл серной, 165 мл хлорной кислот, до полного окисления органических веществ, денитрацию провели с помощью формалина. Минерализат охладили, количественно перенесли с помощью дистиллированной воды в градуированную пробирку, объем раствора довели до 15 мл. Полученный минерализат довели до нейтральной реакции аммиаком, после чего выпарили на водяной бане. К сухому остатку после выпаривания добавили несколько капель дистиллированной воды и провели исследование вышеуказанными микрокристаллическими реакциями. Все проведенные реакции показали наличие катионов лития в биологическом материале.

Результаты исследования. Обнаружение контемнола складывается из микрокристаллоскопических и осадительных реакций, доказывающих наличие катиона лития и аниона карбоната.

Выводы: разработана и рекомендована методика обнаружения контемнола как в таблетках, так и после изолирования его из внутренних органов.

ОБНАРУЖЕНИЕ ФИНЛЕПСИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

М.М.Шахитов, М.М.Ибрагимова, Л.Т.Икрамов

Ташкентское городское бюро СМЭ

Актуальность. Широкое применение препарата финлепсин, применяемого при лечении эпилепсии и невралгии тройничного нерва, иногда ста-

174

новится причиной острых отравлений, так как, несмотря на то, что препарат хорошо переносится, при длительном и неправильном применении он может быть токсичным.

Цель исследования: обнаружение препарата финлепсина во внутренних органах трупа при судебно-химическом исследовании.

Материалы и методы. Финлепсин – белое кристаллическое вещество, не растворимое в воде и хорошо растворимое в этиловом спирте, хлороформе и ацетоне.

Изолирование финлепсина проводили следующим образом: 100 г мелкоизмельченного органа заливали 200 мл дистиллированной воды, подкисляли насыщенным раствором щавелевой кислоты до рН 2 по универсальному индикатору и настаивали при комнатной температуре в течение 2 ч при периодическом перемешивании. Водное извлечение отделяли от твердой части объекта, процеживали через двойной слой марли. Полученное кислое водное извлечение экстрагировали хлороформом трижды по 15 мл. Экстракты объединяли и испаряли до объема 5 мл и исследовали следующими реакциями: 1) при испарении нескольких капель хлороформного экстракта на предметном стекле наблюдали микрокристаллы в виде палочек и иголок (чувствительность реакции 0,1 мкг); 2) к остатку, полученному после испарения десяти капель хлороформного экстракта, добавляли 10 капель концентрированной азотной кислоты и выпаривали досуха на кипящей водяной бане. Остаток еще 3 раза обрабатывали концентрированной азотной кислотой порциями по 10 капель и вновь выпаривали на бане досуха. К охлажденному остатку прибавляли 2 капли 10% спиртового раствора едкого натра, при этом образовывалось фиолетовое окрашивание (чувствительность реакции 3 мкг); 3) тонкослойную хроматографию проводили на пластинках размерами 9×12 см, с закрепленным слоем силикагеля КСК. Система растворителей: хлороформ – ацетон (9:1). При проявлении реактивом Драгендорфа в модификации Мунье, проявлялись красно-коричневые пятна. При последующем опрыскивании хроматограммы 10% раствором хлорида окисного желез окраска проявленного пятна усиливалась и переходила в буровато-коричневую. Чувствительность реакции обнаружения реактивом Драгендорфа 8 мкг, а реактивом Драгендорфа с последующим опрыскиванием раствором хлорного железа – 0,5 мкг в пятне; 4) масс-спектрометрические исследования проводили с помощью модифицированного статического магнитного масс-спектрометра МХ1320, модернизированного для поверхностно-ионизационных (ПИ) исследований. В качестве термоэмиттера применили окисленную текстурированную вольфрамовую ленту с размерами 1×12×0,02 мм3. Условия массспектрометрического исследования: температура эмиттера 1050 К (Тэ), ускоряющее напряжение 2,6 Кэв (Vуск), температура ячейки 55 0С (Тяч). Анализируемый поток вещества на термоэмиттер формировали путем непосредственного испарения из кварцевой кнудсеновской ячейки. Для исследования использовали некоторое количество исследуемого хлороформного раствора. В масс-спектре ПИ наблюдали линии ионов, являющиеся квазимолекулярными фрагментами молекулы финлепсина – 236, 234, 192. Ион с массой 192,

175

соответствующий дибензоазотропилиевому иону, образующемуся при десорбции дибензоазепина, является базовым в масс-спектре ПИ.

Результаты исследования. Обнаружение финлепсина методом ПИ/МС позволяет анализировать его в экстрактах с высокой чувствительностью по сравнению с традиционными методами приблизительно в 100 раз.

Выводы. Использование вышеуказанных методов позволяет легко и безошибочно обнаруживать финлепсин в биообъектах, что повышает доказательную ценность судебно-химических исследований при диагностике отравлений данным препаратом.

ОБ ИЗОЛИРОВАНИИ ТОКСИНОВ ГРИБОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Р.М.Слесарева, М.М.Шахитов

Ташкентское городское бюро СМЭ

Актуальность. Неспадающая в последние годы частота пищевых отравлений грибами, и отсутствие научно-обоснованных методов выделения грибных токсинов пр судебно-химическом исследовании делают эту проблему актуальной не только для судебных химиков, но и для химиков пищевых лабораторий и лабораторий санитарно-эпидемиологических станций.

Цель исследования: разработка методов изолирования грибных токсинов из биологических объектов и их идентификация.

Материалы и методы исследования. Ядовитость грибов по отноше-

нию к организму человека и теплокровных животных объясняется наличием

вних разнообразных токсинов, которые относятся к различным классам химических соединений. Так, например, аманитины и фаллоидины, псилоцибин и псилоцин, являясь производными индола с различными функциональными группами, имеют определенную температуру плавления, хорошо растворимы

вводе, этиловом спирте, органических растворителях (хлороформе), а также гемолизин, являясь производным фенолкарбоновой кислоты, обладает такой же растворимостью. Учитывая литературные данные о физико-химических

свойствах токсинов грибов, мы пришли к выводу, что целесообразно проводить извлечение либо 960 этанолом, либо смесью вода-этанол (1:1) с последующей экстракцией хлороформом.

Изолирование грибных ядов из биологического объекта проводили

следующим образом: 100 г мелкоизмельченного желудка с содержимым заливали 960 этанолом до полного покрытия объекта. Смесь оставляли на 2 ч при частом перемешивании, фильтровали. Фильтрат переносили в делительную воронку, к которому добавляли такое же количество воды, после чего экстрагировали хлороформом (50 мл). Хлороформный слой отделяли и к нему добавляли 2 мл концентрированной соляной кислоты. Полученную смесь выпаривали на водяной бане до сухого остатка, который затем растворяли в 20 мл дистиллированной воды и фильтровали. Фильтрат переносили в дели-

176

тельную воронку и экстрагировали равным количеством смеси хлороформэтанол (4:1). Слой органического растворителя отделяли и упаривали при комнатной температуре до объема 5 мл и исследовали качественными реакциями.

Образцы сравнения (стандарты) для идентификации токсинов грибов приготавливали следующим образом: по 5 г измельченных частей трех разновидностей грибов заливали 50 мл этанола каждую, растирали в ступке и жидкую часть отфильтровывали. Фильтраты упаривали при комнатной температуре до объема 5 мл и исследовали качественными реакциями.

Для идентификации токсинов грибов использовали реакции окрашивания и метод тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Результаты исследования. Изложенный метод изолирования токсинов из грибов и биологических объектов при отравлениях грибами является доступным и результативным для судебно-химического анализа, а также положительно влияет на обнаружение их вышеуказанными качественными реакциями.

Выводы: на практике целесообразнее использовать предложенный метод изолирования токсинов грибов из биологического объекта, основанный на настаивании его этиловым спиртом без подкисления.

177

IX. НЕКОТОРЫЕ ВОПРОСЫ ТЕОРИИ И ПРАКТИКИ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ

СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКАЯ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ПЛАНКТОН ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕСТА И ПРИЖИЗНЕННОСТИ УТОПЛЕНИЯ

Ш.Э.Юнусова, А.И.Искандаров

Ташкентский педиатрический медицинский институт

Актуальность. В последние годы возрос интерес к исследованиям «ложа» или места нахождения трупа в связи со сложностями при решении вопроса о первичном местонахождении трупа. В практической деятельности судебно-медицинского эксперта нередко встречается необходимость исследовать труп, извлечённый из водоёма или найденный вблизи водоёма. В таких случаях на разрешение судебно-медицинской экспертизы ставят вопросы определения не только прижизненности утопления, но и места первичного нахождения трупа, т.е. где конкретно, в каком водоёме произошло утопление.

При известных обстоятельствах дела, и если труп не подвергся гнилостным изменениям, решение вопроса о прижизненности утопления не представляет затруднения. В других случаях, когда обстоятельства исчезновения человека неизвестны и труп находят вблизи какого-либо водоёма в состоянии гнилостного разложения, решение этих вопросов без применения специальных исследований оказывается очень сложным, а подчас – невозможным.

Научные исследования последних лет позволили углубить изыскания в этом направлении и применить метод дифференцированного обнаружения диатомового планктона во внутренних органах и образцах воды.

Целью настоящего исследования является изучение планктонового состава водоёмов г. Ташкента в различные периоды года и выявление закономерностей изменения морфологического состава планктона во внутренних органах при утоплении.

Материалы и методы. Материалами для исследования послужили 82 случая утопления и образцы воды из 4-х водоёмов г. Ташкента в различные периоды года.

Определение планктона проводили по общепринятой в судебной медицине методике. Ход развития диатомовых водорослей был прослежен в ве- сенне-летний и осенне-зимний периоды в следующих водоёмах: река Чирчик, речка Бозсув, озёра Рохат и Бахт.

Результаты исследования. Наши исследования образцов воды из различных водоёмов показали, что морфологический состав диатомового планктона в разных водоёмах и в различные периоды года имеет свои определённые закономерности. Кроме того, состав планктона в образцах воды различен

– эти отличия обусловлены местом и глубиной взятия образца воды.

178

Так, почти во всех водоёмах в толще воды присутствовали обычно пустые створки диатомей, причём в образцах воды, взятых на глубине, состав их был более разнообразен, по сравнению с образцами, взятыми с поверхности водоёмов. Всего, во всех образцах, было обнаружено 13 видов планктоновых диатомовых водорослей, из которых к числу массовых и часто встречающих-

ся видов мы отнесли следующие: Naviculla, Tabellaria, Surirella, Cymbella, Pinnularia, Melosira, Gyrastigma.

Общая численность диатомовых водорослей менялась в зависимости как от загрязнённости водоёмов, так и от времён года. Массовое развитие диатомовых приходится на весенне-летние периоды года. Осенью и зимой отмечалось наименьшее их количество. Морфологический состав диатомовых водорослей в различных водоёмах был достаточно сходен, изменялось, в основном, их соотношение.

Вторым этапом нашей работы было определение (по верифицированным случаям утопления) конкретных видов диатомей во внутренних органах и сопоставление их с образцами воды, доставленными на судебномедицинскую экспертизу с места обнаружения трупов.

С целью проверки сохранности диатомовых водорослей, после их выделения с помощью концентрированных кислот и кипячения, сначала получали минерализат. Параллельно брали пробы, содержание известные количество и состав диатомовых водорослей наших водоёмов. В этих пробах учитывалась численность каждого вида. Приготовленные препараты микроскопировали через сутки, затем через двое суток, а также после кипячения, через сутки и через двое суток. В пробах после каждого опыта учитывали количество водорослей и их видовой состав. Полученные результаты показали, что некоторые виды диатомей, в частности A.Islandia, Nitzdua acicularis и виды рода Stefanodiscus полностью разрушаются уже после первых суток содержания их в кислотах. Поэтому следует анализировать только те группы диатомей, которые были выбраны и отмечены выше, в представленных из водоёмов образцах воды.

Выводы. Таким образом, при проведении судебно-медицинской экспертизы внутренних органов трупов лиц, обнаруженных в воде или вблизи водоёмов, необходимо сопоставлять полученные данные с результатами су- дебно-гистологического исследования образцов воды, представленных на экспертизу. Только таким образом можно решить вопросы о времени и месте утопления.

179