6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Группы крови человека

В-специфического донорского субстрата (Romano и соавт., цит. по Issitt иAnstee [122]). Н-дефицитные клетки Oh (Бомбей) такой конверсии не поддавались.

Реципрокные количественные соотношения вещества Н с А и В наблюдают при исследовании секретов лиц выделителей. Исключение составляли выделители с фенотипом пара-Бомбей, секретирующие А или В, но не Н, а также индивидыAint (см.Aint), у которых реципрокность А, В и Н нарушена.

Ослабление антигена А у лиц АВ

У лиц, имеющих генотип А1 / В, А- и В-специфические трансферазы обладают одинаковой активностью в отношении присоединения соответствующих иммунодоминантных группировок.

При генотипе А2В, А3 / В и Ах / В активность А-трансфераз снижена, и они менее успешно конкурируют с В-трансферазой в освоении Н-участков. Таким образом, гликозилирование Н-цепей у лиц А2В осуществляется в основном галактозой (В-специфичность), а для присоединения глюкозамина (А-специфичность) свободных Н-участков остается мало.

При генотипе А2 / О к доступным для гликозилирования Н-цепям присоединяется большее число иммунодоминантных группировок, экспрессия антигена А выше. Таким образом, эритроциты А2 несут больше антигенных эпитопов А по сравнению с эритроцитами А2В и соответственно сильнее реагируют с анти-А-антителами.

Известны случаи, когда мужчины А2В имели детей А1. Казалось бы – отцовство следовало исключить. Однако при изучении активности трансфераз установлено, что мужчины имели генотип А1В, несмотря на фенотипическую принадлежность к подгруппе А2В.

Другие варианты слабого антигена А

Существенно реже по сравнению с подгруппой А2 встречаются другие варианты антигена А, которые отличаются друг от друга убыванием вещества А и уменьшением соотношения последнего с веществом Н (табл. 3.9).

У одного и того же индивида со слабым вариантом антигена А часть эритроцитов может содержать бóльшее количество А-эпитопов, а другая часть эритроцитов – существенно меньшее. В связи с этим одни эритроциты агглютинируются сильнее, другие слабее или вовсе не агглютинируются. В наличии двух популяций эритроцитов (несущей и не несущей А-антигены) легко убедиться при использовании метода иммунофлюоресценции. Эритроциты, адсорбировавшие бóльшее количество анти-А-сыворотки, меченной флюоресцеином, дают сильное свечение, а эритроциты, слабо реагирующие с сывороткой, дают слабое свечение. При этом наблюдают мелкие интенсивно светящиеся агглютинаты на фоне свободно лежащих слегка флюоресцеирующих эритроцитов.

91

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Таблица 3.9

Серологическая характеристика подгрупп А

Возникновение 2 или более популяций эритроцитов, несущих различное количество А-эпитопов, обусловлено А-трансферазами, модифицироваными вирусами или сформировавшимися под влиянием атипичных АВО-аллелей.

Агглютинационные свойства эритроцитов различных подгрупп А, а также число А-эпитопов весьма вариабельны (табл. 3.10).

Таблица 3.10

Агглютинабельность эритроцитов подгрупп А и число антигенных сайтов на 1 эритроцит

Варианты антигена А получили индивидуальные названия, однако это не означает, что каждый их них представляет независимую генетически детерминированную подгруппу. Они скорее являются исключением из правил нормального формирования группового вещества.

92

Aint

Вариант Aint (intermediate) занимает промежуточное положение между А1 и А2. Эритроциты Aint реагируют с антителами анти-Н сильнее, чем эритроциты А2, но существенно слабее, чем эритроциты А1. ВариантAint распространенсреди негроидов.

А3

Friedenreich в 1936 г. описал слабый вариант антигена А – А3. Посемейное исследование позволило установить, что аллель А3 передается по наследству. Особенностью эритроцитов А3 является то, что они неодинаково реагируют с антителами анти-А и анти-А,В (Young и соавт. [247]). С помощью метода иммунофлюоресценции удалось показать, что эритроциты А3 представлены двумя субпопуляциями. Одна из них содержит относительно большое количество антигена А, в то время как на другой он представлен в следовых количествах (Reed [185]). Агглютинация таких эритроцитов напоминает кровяную химеру (мелкие агглютинаты на фоне неагглютинированных эритроцитов). Антитела анти-АВ агглютинируют обе популяции эритроцитов, и химера не прослеживается.

Marsh и соавт. [151] считают, что эритроциты А3 в отличие от варианта Amos не являются смесью эритроцитов А2 и О. Антитела анти-А практически не агглютинируют эритроциты А3, но адсорбируются на них и могут быть элюированы (Reed [185]). При изучении различных образцов крови указанной подгруппы установлены вариации в активности А- и Н-трансфераз. Как уже отмечено выше, моноклональные антитела анти-А дают с эритроцитами подгруппы А3 отчетливо положительные реакции. Таким образом, нет оснований полагать, что антиген А3, экспрессированный на эритроцитах А3, качественно отличается от А1 и А2. В слюне выделителей, имеющих подгруппу А3, присутствуют субстанции А и Н.

Лица, имеющие подгруппу А3, встречаются с частотой менее 0,01 %. Сыворотки некоторых из них содержат экстраагглютинины α1.

Ах

Вариант Ах включает в себя подгруппы, которые ранее обозначали как А4, А5, А6, Az, Ao по мере убывания антигена. Различия указанных фенотипов имеют в основном количественный характер и улавливаются лишь при тонком количественном измерении адсорбции – элюции антител эритроцитами и оценке нейтрализации антител слюной (Н.В. Минеева и др. [44], П. Проданов [54, 55], Mohn и соавт. [158], Stamps и соавт. [203], Vos [219], Wylie и соавт. [235]).

Серологические особенности подгруппы Ах сводятся к следующему: ––эритроциты Ах не агглютинируются большинством сывороток лиц группы В, однако реагируют с антителами анти-А,В лиц группы О, агглютинация не носит смешанного характера; ––эритроциты Ах специфически адсорбируют анти-А-антитела, и последние могут быть элюированы;

93

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

––сывороткикровилицАх обычносодержатэкстраагглютининыα1 ииногдаα2; ––помимо субстанции Н в слюне выделителей, имеющих подгруппу Ах, содержатся следы группового вещества А.

Как уже отмечалось, большинство антител анти-А лиц группы В не агглютинирует эритроциты Ах. Сыворотки крови лиц В, иммунизированных групповым веществом А, напротив, обладают такой способностью. Моноклональные реагенты анти-А выявляют подгруппу Ах, однако в некоторых случаях эти тестсистемы взаимодействуют также и с антигеном В.

Эритроциты Ах очень редки – 1 : 40 000–77 000 (Reid, Lomas-Francis [186]).

Специфическая А-трансфераза обычно отсутствует в сыворотках крови и на эритроцитах лиц подгруппы Ах, активность Н-трансферазы снижена.

Результаты посемейных исследований противоречивы. В некоторых семьях удавалось проследить наследование подгруппы Ах как фенотипического проявления редкого аллеля Ах. В других семьях пробанды Ах имели ро-

дителей О (Beckers и соавт. [73], Valdes и соавт. [214], Van Loghem и соавт. [215]). Ducos и соавт. [93] наблюдали детей Ах в семьях, где один из родителей имел группу А2В.

Дифференцировать подгруппы А2 / В и Ах / В можно по отсутствию в сыворотке крови лиц Ах / В А-специфической трансферазы.

Как отмечают Issitt и Anstee [122], некоторые производители моноклональных антител предъявляют повышенные требования к своим реактивам и используют для оценки их качества эритроцитыAx.

Amos

Выявлены лица группы А, эритроциты которых проявляли мозаичный (mosaic – отсюда и обозначение) характер агглютинации со специфическими антителами. Эритроциты Amos, будучи смешанными с реагентами анти-А, отличались от А3 и Ах тем, что процент неагглютинированных клеток был постоянным и не зависел от активности анти-А-антител в тест-системе. Эритроциты, не вовлеченные в агглютинацию, не обладали способностью адсорбировать анти- А-антитела. Активность сывороточных А-трансфераз у лицAmos снижена.

Возникновение варианта Amos связывают с соматическими мутациями в отдельных клонах гемопоэтических клеток (Marsh и соавт. [151]), в результате чего наряду с эритроцитами, содержащими антиген А, продуцируются эритроциты, лишенные этого антигена.

Am

Фенотип Am, описаный Gammerlgaard в 1942 г., сначала был обозначен им как Ах, но, поскольку найденный вариант отличался от Ах, вновь открытую подгруппу переименовали вAm. ЭритроцитыAm реагируют очень слабо и не со всеми образцами антител анти-А и анти-А,В. Присутствие антигена А в эритроцитах устанавливают с помощью адсорбции – элюции. У лиц Am выделителей

94

количество вещества А и Н в секретах приближается к норме. Сыворотки их крови, как правило, не содержат антител анти-А1. При посемейных исследованиях установлено, что ген Am передается по наследству как редкий аллель АВО. Среди французов данный фенотип встречался с частотой 1 на 150 тыс. (Darnborough и соавт. [88]), среди китайцев Тайваня – 1 на 400 тыс. (Daniels [87], Darnborough и соавт. [88]). Несмотря на редкость фенотипа Am, удалось идентифицировать 2 его разновидности с помощью детального анализа свойств сывороточных α-1,3-N-галактозаминилтрансфераз. Активность этих ферментов отличалась по кинетическим характеристикам при определенных значениях рН. В целом активность А-трансфераз у лиц подгруппы Am ниже, чем у лиц А2. Найдены лица группы AmB. Посемейные исследования не позволили установить наследственную передачуAm-фенотипа.

Ау

Подгруппа Ау напоминаетAm, однако имеет отличия:

––элюаты анти-А-антител, снятые с эритроцитов Ау, менее активны по сравнению с элюатами, снятыми с эритроцитов Аm;

––слюна лиц Ау выделителей содержит существенно меньше вещества А по сравнению с лицами Аm;

––сывороткакровилюдейАусодержитследовоеколичествоА-трансферазы, а у индивидов Аm этот фермент отчетливо выявляют (Drozda и соавт. [92], Issitt,Anstee [122], Reid, Lomas-Francis [186]).

Полагают, что фенотип Ау не передается по наследству, а возникает в результате мутации зародышевых клеточных линий в пределах одной и той же семьи.

Ael

Подгруппа Ael (elution) названа так по методу, с помощью которого удается обнаружить присутствие антигена А на эритроцитах. Антитела анти-А и анти- А,В не агглютигнируют эритроциты Ael, однако адсорбируются на их поверхности, что подтверждают методом адсорбции – элюции. В сыворотках крови лицAel А-трансфераза не выявляется, содержание Н-трансферазы снижено.

ФенотипAel встречается редко: 1 на 100 тыс обследованных, преимущественно среди монголоидов (Solomon и соавт. [197], Sturgeon и соавт. [208]). Посемейными исследованиямипоказанапередачагенаAel какредкогоаллелялокусаАВО.

Aend (Afinn,Abantu)

Эти варианты антигена А отличаются крайне слабой экспрессией (Mohn и

соавт. [157], Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon и соавт. [208]), поэтому и обо-

значены как «end».

Антиген Aend практически не реагирует с антителами анти-А,В лиц группы О, не взаимодействует с антителами анти-А лиц группы В. Некоторое количество группового вещества А выявляют в слюне.

95

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ПодгруппаAend найдена всего дважды среди 150 тыс. французских доноров. Другой, несколько отличающийся от Aend, вариант был описан у финнов, в связи с чем и получил обозначение Afinn. Его находили с частотой 1 на 1000– 6000 обследованных в различных районах Финляндии (Mohn и соавт. [157]). Агглютинация эритроцитов Afinn с антителами анти-А и анти-А,В различима лишь при микроскопировании. В одном поле зрения насчитывают от 2 до 10 агглютинатов, каждый из которых состоит из 4–6 эритроцитов (Mohn и соавт. [157]). Слюна выделителей содержит вещество Н, вещество А отсутствует. Экстраагглютинины анти-А1 выявлены в сыворотках крови всех лиц Afinn. Этим подгруппа Afinn отличается от других вариантов Aend. Issitt и Anstee [122] считают выделение подгруппы Afinn в качестве самостоятльной недостаточно

обоснованным.

Еще один вариант Aend, получивший обозначение Abantu, выявлен в Южной Африке у негроидов банту с частотой 4–8 % (Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon

и соавт. [208]). ЭритроцитыAbantu реагируют с антителами анти-А несколько ин-

тенсивнее, чем Aend. Сыворотки крови некоторых лиц Abantu содержали экстраагглютинины анти-А1. Посемейные исследования подтвердили, что аллель Abantu

передается по наследству. Высказано предположение, что в негроидной популяции этот ген появился сравнительно недавно вследствие миграции населения Африки в южном направлении. Он практически отсутствует среди негроидов Западной Африки и их потомков, проживающих в настоящее время в Америке.

Alae

Название антигена «lae» происходит от аббревиатуры слов «лектин», «адсорбция», «элюция».

ВариантAlae описан Schuh, Vyas, Fudenberg в 1972 г. у 9 членов одной французской семьи. Присутствие антигена А в эритроцитахAlae было установлено с помо- щьюадсорбциииэлюциилектинаанти-А1 изDolichosbiflorus.Вслюнесубстанция Аотсутствовала.СывороткикровилицAlae реагировалисэритроцитамиА1,А2 иВ.

Считается, что указанный фенотип это результат действия редкого гена в локусе АВО.

Вариант Alae является, по-видимому, первым промежуточным субстратом между антигенами О и А. Об этом свидетельствует тот факт, что эритроциты OCad +, так же как Alae, способны, хотя и в меньшей степени, адсорбировать лектин Dolichos biflorus.

Apae

Обозначение «рае» также представляет собой аббревиатуру: p – лектин из белковых желез улитки Helix pomatia, с помощью которого антиген А выявляют на эритроцитах, ае – метод детекции: адсорбция, элюция.

ПодгруппаApae была обнаружена в 1987 г. Stemps и соавт. сразу в 3 семьях. Предполагают, что фенотип Арае является вариантом подгруппы Ах иAlae.

96

Практическое значение подгрупп А

Известный иммуносеролог Peter Issitt в 4-м издании своей книги «Applied Blood Group Serology» (стр. 209) приводит каламбур: Aend и Afinn – end и finish –

означает, что пора остановиться в поиске вариантов с более слабым антигеном А. Их сложно дифференцировать, но в этом и нет необходимости. Реагенты анти-А, используемые в настоящее время в учреждениях службы крови, выявляют практически все трансфузионно опасные варианты антигена А.

Ранее, вплоть до 2000-х годов, вариантам антигена А особого значения в трансфузиологии не придавали. Исследованиями, проведенными в начале 1940- х годов Н.В. Поповым, Н.И. Блиновым и Р.М. Уринсон, было показано, что различия иммуногенов А1 и А2 в серологическом и клиническомаспектах носятколичественный, а не качественный характер. Вместе с тем обращалось внимание трансфузиологов на то, что подгруппу А2 иногда трудно выявить вследствие замедленной агглютинации эритроцитов, поэтому она может служить причиной ошибок при определении группы крови (Р.М. Уринсон [61]). В частности, у лиц А2 и А2В группа крови может быть определена как О и В. Это положение, несомненно, было справедливо для того периода, когда в учреждениях службы крови использовали недостаточно стандартизированные изогемагглютинирующие сыворотки. В настоящее время оно утратило актуальность. Стандартизация изогемагглютинирующих сывороток по эритроцитам А2, внедренная Р.М. Уринсон в работу СПК СССР в 1940-х годах, решила проблему. Система заготовки крови, предусматривающая определение группы крови у доноров перекрестным методом, позволила исключить ошибки, обусловленные слабыми А-антигенами (Р.М. Уринсон [61]).

Следует упомянуть еще два обстоятельства, свиделельствующие о том, что проблемаподгруппкровинестольостра,какеепредставляютнекоторыеспециалисты.

Ошибка при определении подгруппы крови у реципиента, ожидающего трансфузию эритроцитов, как правило, себя не проявляет и часто остается незамеченной. Посттрансфузионное осложнение не развивается, поскольку отобранные для трансфузии эритроциты донора О совместимы с кровью реципиента А2, а эритроциты донора В совместимы с кровью реципиента А2В.

Таким образом, подгруппы А для реципиента, т. е. в сфере клинической трансфузиологии, значения не имеют.

Подгруппы А имеют значение, и то весьма относительное, в сфере производственной трансфузиологии, при заготовке эритроцитов, а именно при определении групповой принадлежности доноров. Однако и в этом случае нет необходимости определять подгруппы крови, о них достаточно помнить. Если эритроциты доноров А2 и А2В ошибочно маркированы как О и В, то реципиенту О могут перелить эритроциты А2, а реципиенту В – эритроциты А2В. Проба на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента позволит выполнить такую трансфузию, так как в ряде случаев результат этой пробы будет отрицательным.

97

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

По мнению классиков клинической трансфузиологии (Mollison и соавт. [159]), гемолитические посттрансфузионные реакции в таких случаях могут иметь место, но их выраженность невелика по сравнению с другими иногруппными трансфузиями, и они легко купируются. Эритроциты А2, несущие небольшое количество А-эпитопов, менее чувствительны к повреждающему действию специфических антител. Клинически значимый гемолиз in vivo развивается лишь в тех случаях, когда анти-А-антитела в сыворотке крови реципиента имеют высокую активность и титр (1 : 1000 и выше), что встречается редко.

С начала 2000-х годов некоторые специалисты службы крови поднимают вопрос о необходимости учета подгрупп А при переливании эритроцитсодержащих компонентов крови. Распространяются реагенты для идентификации подгрупп и рекомендации переливать лицам А2 только эритроциты А2, а лицам А2В – эритроциты А2В. Указанные рекомендации не имеют научного обоснования.

За последние 50 лет в Российской Федерации выполнено не менее 30 млн трансфузий эритроцитов группы А реципиентам группы А, из которых 12 % (согласно статистике) имели подгруппу А2. Ни одного случая посттрансфузионного осложнения, обусловленного различием донора и реципиента по подгруппе А, не зафиксировано.

Подгруппы антигена В

Слабые варианты антигена В встречаются реже, чем А, преимущественно в монголоидных популяциях (Bhatia и соавт. [78], Lin-Chu и соавт. [144], Marsh и

соавт. [150], Simmons и соавт. [196], Yamamoto [238], Yokoyama и соавт. [240], Yoshida и соавт. [246], Yu и соавт. [248]). Слабые варианты В труднее поддаются систематизации. Salmon (1976) предложил подразделять варианты В на В3, Вх и Bm. Другие специалисты считают такую номенклатуру неудачной, поскольку она формально повторяет классификацию подгрупп А (А3, Ах, Am), но на практике ей не соответствует. Другой подход, основанный на подсчете процента агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов, предложили Lopez и соавт. в 1973 г. Авторы подразделили варианты В на В60, В20 и В0.

Экспрессия антигена В выше у негроидов, чем у лиц белой расы.

В3

Вариант В3 описали Wiener и Cioffi (цит. по Daniels [87]). Эритроциты пробанда показывали смешанный характер агглютинации с антителами анти-В и анти-А,В. В слюне присутствовало вещество В. Фенотип В3 зафиксирован у французов с частотой 1 на 10 000, у китайцев – 1 на 900 среди лиц группы В и 1 на 1800 среди лиц группы АВ, в последнем случае фенотип соответствовал А1В3 (Lin-Chu и соавт. [144]). Посемейные исследования подтвердили наследственную передачу признака В3 как продукта редкого аллеля АВО-локуса. У лиц подгруппы В3 В-трансфераза присутствовала в сыворотке крови, на эритроцитах ее не выявили (Lin-Chu и соавт. [144]).

98

Вх

Для эритроцитов Вх характерны слабые реакции с антителами анти-В и анти- А,В. Сыворотка крови лиц Вх содержит слабые антитела анти-В, в секретах выделителей имеется небольшое количество вещества В. Посемейными исследованиями показана передача гена В х по наследству как редкого аллеля АВО- локуса. В-трансфераза в сыворотках крови людей подгруппы Вх не выявлена.

Bm

Эритроциты этой подгруппы не агглютинируются антителами анти-В и анти-А,В. Антиген В выявляют методом адсорбции – элюции. В сыворотке крови лиц Bm анти-В-антитела обычно отсутствуют. Содержание В-трансферазы в сыворотке крови сниженно, на эритроцитах – в следовом количестве (Gundolf и

соавт. [114]).

Bel

Эритроциты Bel не агглютинируются антителами анти-В и анти-А,В; вещество В в секретах отсутствует, сыворотки крови иногда содержат антитела анти-В. В-трансфераза не выявлена ни в сыворотке крови, ни на эритроцитах. Прослежена наследственная передача гена Bel.

Bw

Фенотип нескольких лиц, имевших эритроциты со слабой экспрессией антигена В, названный Bw, не удалось идентифицировать серологическими методами. Различия с другими вариантами В выявлены только молекулярногенетическими методами.

Категории слабого антигена В

Race и Sanger [184] предложили разделить подгруппы В на три категории

(табл. 3.11).

99

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Категория 1

Эритроциты лиц этой категории В слабо агглютинируются антителами анти-В и анти-А,В. Наряду с агглютининами анти-А сыворотка содержит анти- В-антитела. В секретах выделителей содержатся субстанции В и Н. В одном сообщении этот фенотип был обозначен как Bm H. Как полагают авторы, он возник в результате супрессорного воздействия со стороны генов, независимых от локуса АВО, поскольку у других членов семьи ген В функционировал нормально

(Marsh et el., цит. по Issitt,Anstee [122]).

Категория 2

Эритроциты этой категории слабо агглютинируются антителами анти-В и анти-А,В. Секреты выделителей содержат субстанцию Н, а вещество В сниженно или в следовом количестве. Сыворотки крови антител анти-В не содержат. В одном случае эритроциты В категории 2 были перелиты реципиенту с группой О. Какой-либо реакции гемотрансфузия не вызвала.

Категория 3

Эритроциты В категории 3 не агглютинируются антителами анти-В и анти- А,В или дают с ними очень слабые реакции. Слюна содержит следовое количество веществ Н и В. Иногда вещество В в секретах отсутствует. Антител анти-В сыворотка крови лиц В категории 3 не содержит.

Другие подгруппы В

Эритроциты В, слабо реагировавшие со специфическими антителами, были названы В2 по аналогии с А2. Для другого варианта, обозначенного Bv, характерно отсутствие реакции с аллогенными анти-В-реагентами. Эти эритроциты несли В-подобный антиген, напоминающий нефукозилированный парциальный В-антиген эритроцитов кролика. Сыворотка крови содержала особую форму антител анти-В, В-трансфераза в ней отсутствовала. Установлено, что ген, контролирующий фенотип Bv , передавался по наследству. При обследовании 567 210 доноров г. Гонконга найдено 46 лиц Bv и 8 АBv (Lin-Chu и соавт. [144]).

Bmos

Эритроциты Bmos, как и Amos, представляют собой 2 популяции клеток. Одна популяция реагирует, а другая не реагирует с анти-В-реагентами. Продуктивность сывороточных В-трансфераз у лиц Bmos нарушена вследствие соматических мутаций (Marsh и соавт. [151]).

Фенотипы В(А) и А(В)

Сообщения о выявлении фенотипов В(А) и А(В) стали появляться по мере получения соответствующих моноклональных антител анти-А и анти-В.

100