6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Группы крови человека

гены с и е, c и eS, С и е не продуцируют антиген f и другие перечисленные выше антигены – ce S, rhi, CE, cE и Ce S соответственно.

В свете современных представлений о системе Rh-Hr как двухгенной уровень экспрессии антигенов, объясняемый ранее положением цис и транс соответствующих генов, получил новую интерпретацию. Антигены C, с, Е и е на полипептиде Rh кодируются аллелями Ce, cE, ce и CE не только в разных сочетаниях, но и в различном количестве, а также качестве того или иного антигена.

Имеются данные (Giles, Bevan [305], Heiken, Giles [342]) о существовании независимо наследуемых генов-супрессоров, Xor и XQ, не связанных с локусом Rh, которые, однако, влияют на экспрессию антигенов резус, в частности инициируют появление слабовыраженных форм CDe-комплекса: (C)D(e), (c)D(e) и других, а также фенотипа Rhnull.

Мутации с позиций иммуносеролога

Задолго до установления молекулярных различий в структуре полипептидов Rh и кодирующих их генов иммуносерологи классифицировали мутации, дающие начало новым групповым признакам, по поведению тех или иных антигенов и антител в серологических реакциях.

Доссе [50] разделил мутации на 3 категории.

Мутации с полной автономностью. Примером такой мутации служили антигены С и С W в системе антигенов СС Wс, гены которых до последних лет считались аллельными (см. СW и СX). Антиген C Wполностью автономен по отношению к антигену С. Это проявляется в том, что люди СС, Сс и сс могут вырабатывать антитела анти-С W. Некоторые сыворотки анти-С содержат комбинированные антитела анти-С + С W в несепарируемой форме и не могут быть разделены на анти-С и анти-С W адсорбцией эритроцитами С и С W. Вместе с тем чистые анти-С W-антитела (без примеси анти-С) встречаются относительно часто.

Вначале предполагали, что антиген С W наследуется независимо от С и с, проявляя полную автономность. Однако вскоре выяснилось, что он чаще присутствует в эритроцитах С +, чем в эритроцитах С −.

Аналогичными автономными свойствами обладает антиген С X по отношению к антигенам С, с и С W, а также антиген E W по отношению к антигенам Е и е.

Мутации без автономности. Этот тип мутации отражается на количестве синтезируемого антигенного субстрата, не затрагивая его специфических свойств. Например, эритроциты Du агглютинируются не всеми сыворотками анти-D, которые в 100 % случаев реагируют с обычными эритроцитами D +. Du не имеет собственной антигенной специфичности, отличающейся от D, однако передается по наследству кодоминантно, как D и все другие групповые антигены. Антитела анти-D могут быть полностью удалены из сыворотки адсорбцией эритроцитами Du, но сыворотка анти-D не можетбыть разделена на анти-D и анти-Du дифференциальной адсорбцией. В совокупности все эти признаки свидетельствуют о существовании генной мутации или

171

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

модификации гена D, которая не является автономной и проявляется лишь в виде слабовыраженного антигенного вещества.

Можнопривестиидругиепримерымутацийбезавтономности:СиСu,ЕиЕu. Промежуточные мутации. Например, антиген сv, описанный Race и соавт.

[549], имеет признаки двух антитетичных антигенов – С и с, представляя собой некую промежуточную форму этих антигенов. Эритроциты сv агглютинируются полными и неполными анти-с-антителами с такой же интенсивностью, как эритроциты гомозигот с / с, а также реагируют с некоторыми сыворотками анти-С. Между тем специфические анти-сv-антитела в чистом виде не встречаются.

Промежуточные формы антигенов наследуются кодоминантно.

Согласно современным представлениям о молекулярной структуре антигенов Rh (см. Строение системы Rh) приведенная классификация мутаций на основе иммуносерологических особенностей эритроцитов может показаться несколько наивной, однако именно такого рода сопоставления побудили молекулярных биологов искать объяснение групповым различиям на молекулярногенетическом уровне.

Связь локуса RH с хромосомой 1

О том, что гены RH находятся на хромосоме 1, свидетельствовал ряд фактов. К началу 1970-х годов накопились данные о частичной сцепленности генов RH с генами наследственного эллиптоцитоза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

(G-6-PD), пептидазы-С (PepC) и фосфоглюкомутазы (PGM1).

Результаты семейных исследований указывали на то, что перечисленные гены образуют взаимосвязанную группу близкорасположенных локусов и наследуются вместе независимо от пола. Из накопленных сведений можно было сделать только один вывод: гены RH не расположены на хромосомах X и Y. Вопрос, на какой хромосоме они располагаются, оставался открытым.

Сдвиг в этой области достигнут благодаря гибридизации ядерных клеток мыши и человека (Ruddle и соавт. [587]). При культивировании гибридных клеток, имеющих 2 набора хромосом (человека и мыши), человеческие хромосомы постепенно вытеснялись мышиными. Эта модель оказалась удобной для изучения продукции ферментов, в частности пептидазы С. Установлено, что утрата хромосомы 1 сопровождалась потерей­ способности культивируемых клеток продуцировать пептидазу-С, а поскольку гены PepC, G-6-PD, PGM1 и RH связаны, было сделано заключение,чтовсягруппагенов,втомчислегенRH,находитсянахромосоме1.

Дополнительные данные в поддержку этого заключения были получены Marsh и соавт. [462]. Авторы наблюдали больного миелофиброзом, у которого была кровяная химера: 7 % эритроцитов, циркулирующих в его кровотоке, были резус-положительными (CcDee), а остальные 93 % – резус-отрицательными (cde). Один из родителей больного имел фенотип CCDee, т. е. не содержал гаплотипа cde, который мог передать по наследству. Сам пациент передал гаплотип CDe своему сыну. Авторы предположили, что эритроциты CcDee пациента

172

происходили из ростка, в котором гаплотипы CDe и cde были функциональными, а эритроциты cde происходили из ростка, в котором гаплотип CDe являлся молчащим (cde/ − − −). При хромосомном анализе выявлена делеция короткого плеча хромосомы 1 в 95 % ядерных клеток крови пациента, на основании чего авторы заключили, что потеря небольшого участка короткого плеча хромосомы 1, очевидно, привела к потере функционального гаплотипа CDe. Поскольку пациент был гетерозиготен по локусу PGM1 и содержал оба типа этого фермента, авторы сделали вывод, что локус RH не только расположен на хромосоме 1, но и отстоит от центромеры хромосомы дальше, чем локус PGM1.

В 1975 г.Turner и соавт. (цит. по Issitt иAnstee [374]) обследовали семью аме-

риканских индейцев, в которой одни из членов были гомозиготны по гаплотипу −D −, другие – гетерозиготны, а третьи не имели этого гаплотипа. У гомозигот была обнаружена делеция короткого плеча обеих хромосом 1, у гетерозигот – делеция короткого плеча одной хромосомы, а у родственников, не имевших гаплотипа −D −, делеции не было.

Хромосомный анализ лиц Rhnull и −D − не выявил корреляций, подобных описанным выше. Хромосомные аберрации (делеции и транслокации) не во всех случаях можно выявить существующими цитологическими методами исследования. Обнаружение корреляции серологических и кариологических признаков большая редкость. В литературе имеются сообщения о пациентах с кровяными химерами, содержащими 2 популяции эритроцитов, различающиеся по антигенам Rh. Однако эритроцитарные химеры, так же как и снижение экспрессии антигенов в период обострения болезни, наблюдают редко, и их трудно связать с изменениями в хромосоме 1, которые чаще всего отсутствуют.

Лишь с появлением методов молекулярной биологии, гибридизации in situ кДНК было достоверно установлено Cherif-Zahar и соавт. [211] место расположения локуса RH на коротком плече хромосомы 1, а именно в районе 1р34.3– 1р.36.13. Локусы групп крови Fy (Duffy), Sc (Scianna), Cr (DAF, Cromer), Kn (CR1, Knops) и Rd (Radin) также расположены на хромосоме 1.

Строение системы Rh

Химия антигенов Rh

Долгое время химическая структура антигенов Rh оставалась загадкой. Многочисленные попытки выделить этот антиген в чистом виде и проверить его серологические свойства резус-антителами были безуспешными. Высказывалось суждение о том, что этот антиген в серологически активном виде не может существовать вне клеточной мембраны и, будучи выделенным из нее, тотчас инактивируется. Такое мнение поддерживалось сведениями о том, что нагревание и высушивание эритроцитов снижают серологическую активность антигенов Rh.

Разработка адекватных методов исследования гидрофобных структур мембраны эритроцитов дала существенный сдвиг в этой области. Появились

173

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

сообщения Green [316] о том, что экспрессия антигенов D и С на эритроцитах связана с тиоловыми группами, и, следовательно, эти антигены по своей природе относятся к белкам, а не к полисахаридам, как считали раньше по аналогии с полисахаридами А и В.

Использование глутатионмалеимидмембранных зондов также указывало на причастность экзофациальных тиоловых групп к D-специфичности. Однако значение свободных тиоловых групп в формировании антигенов Rh было поставлено под сомнение Suyama и соавт. [646].

Далее было показано (Green [315]), что липидные фракции, экстрагиро­ ванные из стромы эритроцитов n-бутанолом, а также получаемый при этом нерастворимый белковый осадок не обладают серологической активностью по отдельности, но при объединении этих фракций специфическая D-актив­ность субстрата вновь проявляется. Таким образом, стала проясняться белковолипидная природа субстанции Rh.

Hughes-Jones и соавт. [366] подтвердили, что основными компонентами, необходимыми для экспрессии антигена D, являются фосфолипиды, поскольку обработка мембран эритроцитов фосфолипазами А2 и С инактивировала антигены D, Сс и Ее. Интересная деталь: как было установлено Hughes-Jones и соавт. [366], Green и соавт. [320], анти-D-антитела, адсорбированные на эритроцитах D +, предотвращали инактивацию антигена D фосфолипазой А2, что указывало на специфичность воздействия этого фермента именно на структуруноситель антигена D.

Попытки выделить и идентифицировать белок Rh, предпринятые до 1980-х годов, позволили составить общую физико-химическую характеристику антигенов Rh. Предварительно установлено, что белок D имеет мол. массу 7–10 кДа. Другие исследователи сообщили, что антигены Rh расположены на анионном транспортном белке в полосе 3 [678]. Полоса 3, как теперь известно, соответствует антигенам Diego. Впоследствии полученные результаты были объяснены излишним протеолизом полипептидов D при очистке, а также тем фактом, что оба белка одинаково гидрофобны и мигрируют вместе в процессе выделения из мембраны эритроцитов.

Прорыв в исследовании антигенов Rh произошел в начале 1980-х годов, когда появились методы выделения растворимых комплексов «D-анти-D» иммунопреципитацией антигенов специфическими антителами, меченными радиоактивным йодом (Moore и соавт. [483], Ridgwell и соавт. [564]). Вскоре были идентифицированы полипептиды с мол. массой 32–34 кДа, несущие серологическую активность D, Cс и Eе, и отсутствовашие на эритроцитах Rhnull. Каждый полипептид содержал экзофациальные тиоловые группы [564].

Далее выяснилось, что антигены е и Е расположены на одном полипеп­ тиде, а антиген D – на другом.

Картирование Rh-полипептидов, проведенное Bloy и соавт. [172], Blanchard и соавт. [168], показало, что фракции, иммунопреципитированные

174

сыворотками анти-с и анти-Е, практически идентичны, а фракции, иммунопреципитированные сыворотками анти-D, существенно от них отличаются.

Hughes-Jones и соавт. [363] не наблюдали конкурентного подавления связывания анти-с-антител антителами анти-Е и анти-D, а также ингибиции связывания анти-Е-антител антителами анти-с и анти-D, что свидетельствовало о размещении антигенов D, с и Е на разных участках полипептидов. При картировании установлено, что полипептид D имеет отличительные участки, не характерные для полипептидовсиЕ,иэтополностьюсовпалосрезультатамииммунопреципитации.

Gahmberg [295] отметил, что полипептид D не содержит углеводов в отличие от других белков, расположенных на внеклеточной поверхности мембраны эритроцитов. Такое заключение было основано на невозможности пометить полипептид D галактозоксидазой и перийодатом, неспособностью очищенного полипептида связываться в лектиновых колонках, а также неэффективностью обработки эндо-N-ацетилглютаминазой Н и эндо-β-галактозидазой­ .

Гликозилирование как обычная составляющая синтеза мембранных элементов не характерно для белка Rh. Он собирается в виде комплекса, включающего готовые полипептиды Rh и гликопротеины Rh, причем полипептиды Rh являются продуктом одного гена, расположенного на хромосоме 1, а гликопротеины Rh – продуктом другого гена, расположенного на хромосоме 6. Точно так же собираются антигены системы Kell: белок Kx ковалентно связывается с гликозилированным гликопротеином Kell, но оба субстрата являются продуктами разных генов, один из которых расположен на аутосоме, другой (Kx – на хромосоме Х.)

После того как полипептиды Rh были идентифицированы, несколько групп исследователей попытались изучить их аминокислотную последовательность, а также создать олигонуклеотидные зонды и выделить ДНК, кодирующую Rh. Наиболее эффективными оказались методы препаративной иммунопреципитации (Avent и соавт. [147], Bloy и соавт. [172] с использованием мышиных и человеческих моноклональных антител. Другие исследователи (Saboori и соавт. [590]) использовали для очистки белков неиммунологические методы, в частности хроматографию в гидроксиапатите кальция (Saboori и соавт. [589]). Очищенные полипептиды метили радиоактивным йодом и расщепляли химотрипсином.

Исследования показали, что полипептид Rh, преципитированный анти-D- антителами, имел ту же N-концевую последовательность (до остатка 13), что и полипептид Rh, преципитированный мышиными моноклональными антителами серии R6A [147]. Однако, поскольку антитела R6A реагировали с эритроцитами D −−, следовал вывод, что антиген D находится на другом полипептиде, реагирующем с анти-D-антителами, и что анти-D-антитела человека и моноклональные антитела R6A мыши определяют 2 разных, но тесно связанных полипептида. Исследование аминокислотной последовательности белков, выделенных хроматографией в гидроксиапатите­ из клеток D + и D −, подтвердило их сходство [172, 590].

175

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Предположение о том, что полипептиды Rh могут быть связаны в мембране эритроцитов с гликозилированным компонентом (гликопротеин Rh), было впервые высказано Gahmberg [295]. Далее было установлено, что гликопротеин Rh, преципитированный анти-D-антителами вместе с полипептидом Rh, имеет мол. массу 45–70 кДа, а полипептид Rh – 30 кДа.

Когда стало ясно, что полипептиды Rh связаны в клеточной мембране с гликопротеинами Rh, появились высказывания, что одни антигены Rh могут быть экспрессированы на полипептиде, а другие – на гликопротеине. Не исключали и третий вариант: некоторые антигены Rh представляют собой комплекс, состоящий из участков полипептида и гликопротеина. Присутствуя порознь, эти участки полипептида и гликопротеина не являются иммуногенными, а когда присутствуют одновременно, их комплекс приобретает иммуногенность.

Однако в последующих работах было установлено, что белковые последовательности, определяющие специфичность антигенов Rh, расположены на полипептидах, а не на гликопротеинах.

Структура полипептидов Rh

Антигенные детерминанты Rh расположены на негликозилированных нефосфорилированных полипептидах с мол. массой 30–32 кДа [129, 295, 483]. Полипептиды RhD и RhcE представляют собой цепь из 12 связанных со скелетом мембраны доменов [348], пересекающих мембрану эритроцита от эндодо экзоцеллюлярного уровня (рис. 4.5 и 4.6). Основная часть полипептида размещена в фосфолипидном бислое. На внешней стороне клетки домены соединены 6 выступающими над поверхностью мембраны петлями, на которых также могут располагаться серологически выявляемые Rh-антигены. N- и C-концевые участки полипептида погружены внутрь клетки [196]. Полипептид RhD, полученный искусственно в трансфектных клетках с помощью олигонуклеотидных праймеров и соответствующих кДНК людей Rh +, состоит из 417 аминокислот [147, 172, 590]. Из такого же числа аминокислот состоит полипептид RhcE, полученный таким же способом с использованием кДНК людей Rh − [138, 390, 418].

Рис. 4.5. Топология мембранных доменов Rh-Hr по Schenkel-Brunner [597].

176

Полипептид сЕ имеет 6 цистеиновых остатков, 5 из которых расположены в цитоплазматических петлях. Шестой цистеин (Цис-285) находится в 5-й внеклеточной петле [564]. Цистеин в позиции 311 полипептида RhcE замещен на тирозин в полипептиде RhD. Отдельные последовательности (мотивы), например Cys – His – Leu – Ile–Proвположении285–289,являютсяобщимидлявсехэпитопов:D,CcиEe.

Высокая степень гомологии между генами RHD и RHCE способствует генной конверсии, неравновесному кроссинговеру и образованию в результате этого гибридных генов, кодирующих продукцию новых антигенов Rh [597].

Rh-протеины высокогидрофобны и весьма прочно соединены с другими гидрофобными белками мембраны [336]. Обнаружена определенная связь Rh-полипептидов с гликофорином В, антигенами LW, гликопротеином, несу­ щим антигены Duffy, гликопротеином CD47 и так называемым Rh-ассоцииро­ ванным гликопротеином.

Rh-антигены устойчивы к воздействию протеолитических ферментов [295]. Антигены D и c (hr') разрушаются под воздействием N-этилмалеини­мида, хлормеркурибензоната и 2-нитробензойной кислоты. Это послужило для исследователей основанием полагать, что Rh-субстанция содержит тиоловые группы

[316, 319, 600, 646].

Рис. 4.6. Предполагаемая трехмерная структура доменов Rh-полипептида и Rhассоциированногогликопротеинавмембранеэритроцита(поAvent[141]).Светлыеитем- ныецилиндрыпредставляютдоменыRh-полипептидовDиСЕсN-иC-терминальными группами. На заднем плане условно представлен Rh-ассоциированный гликопротеин. Указаны участки разрывов при действии трипсина, папаина или бромелина, место расположения эпитопов D3, D4 и D9, экзо- и эндоцеллюлярные петли Rh-полипептида.

Как отмечали Dahr и соавт. [242], серологическая активность D-антигена утрачивалась под действием цистеиновых реагентов. После обработки эритроцитов дитионитробензойной кислотой (ДТНБК) антиген D инактивировался­ , однако активность его вновь восстанавливалась под действием дитиоэритритола. В то же время под действием глютатиона активность D-антигена­ не

177

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

восстанавливалась. Обработка эритроцитов хлормеркурифенилсульфониковой кислотой приводила практически к полной потере активности­ антигена D, которая не восстанавливалась дитиоэритритолом.

Йодацетамид не инактивировал D-антиген – это согласовывалось с предположением Dahr и соавт. о том, что цистеиновые остатки являются непосредственной составной частью D-антигена. Авторы пришли к выводу, что цистеиновая модификация Rh-протеина, в частности Cys 285 в 5-й внеклеточной петле, приводит к модификации антигена Rh.

Серологическая активность Rh-антигенов, как показал Green [317, 318], во многом зависела от содержания липидов в мембране эритроцитов. После вытяжки липидов из стромы n-бутанолом Rh-активность утрачивалась, а после инкубации стромы с липидным экстрактом она полностью восстанавливалась. Как указывает Schenkel-Brunner [597], липиды необходимы для оптимальной пространственной ориентации других структурных молекул в мембране эритроцита.

Обработка эритроцитов фосфолипазой, расщепляющей жирные кислоты, лектином, фосфатидилэтаноламином или фосфатидилсерином выраженно ингибировала активность антигенов c, D и e [320, 3366, 530].

На серологическую активность Rh-антигенов влияло обезвоживание мембраны эритроцитов [154, 181, 609]. Высокий уровень холестерола (соотношение холестерола и фосфолипидов 1,55) совпадал с повышенной вязкостью мембраны и большей выраженностью D-антигена. Низкий уровень холестерола (соотношение холестерола и фосфолипидов 0,55) сопровождался меньшей вязкостью мембраны и менее активным реагированием D-антигена [597].

Отсутствие Rh-полипептидов у людей с фенотипом Rhnull сопряжено с изменениями в структурной организации липидного слоя мембраны и нарушением водно-ионного транспорта в клетке.

Из ранних работ (до 1960 г.) известно, что резус-антиген термолабилен и слабеет при высушивании (П.Н. Косяков [69]). Сыворотки антирезус снижали свою активность при смешивании со стрептомицином, дериватами рибонуклеиновой кислоты, некоторыми сахарами и другими химическими веществами, из чего авторы делали предположения о возможной химической природе резус-антигена.

Наличие в эритроцитах Rh + Rh-ассоциированного гликопротеина, повидимому, вводило в заблуждение исследователей, полагавших, что антигены резус имеют полисахаридную природу.

Молекулярно-биологические исследования

Целью молекулярно-биологических исследований было ответить на вопрос: находятся ли антигенные детерминанты D, С / с и Е / е на разных белковых структурах или же они присутствуют на одном и том же полипептиде? Другой целью этих исследований было установить молекулярную структуру вариантов Rh-антигенов и кодирующих их генов.

178

Эксперименты с использованием трансфекции фрагментов ДНК [196, 496, 618] показали, что детерминанты С / с и Е / е расположены на одном полипептидном продукте, а D – на другом. Дополнительные доказательства того, что антигены Сс и Ее могут находиться на одном и том же полипептиде, полученыAvent и соавт. [145] в исследованиях с сыворотками анти-С, анти-с, анти-Е и анти-е, которые, как выяснилось, реагируют с разными участками одного и того же полипептида Rh.

Антигенные детерминанты Rh кодируются двумя похожими по структуре генами (Colin и соавт. [233], Arce и соавт. [138]). Один из них (RHD) определяет наличие трансмембранного белка, придающего эритроцитам D-актив­ ность. У лиц Rh + этот ген представлен одной или двумя копиями. Как уже упоминалось, у большинства лиц Rh − ген, кодирующий субстрат D, отсутствует. Находящийся в прилежащем локусе ген RHCE определяет экспрессию антигенов С, с, Е и е.

Гены RH в каждом гаплотипе с большой точностью контролируют количество вырабатываемого антигенного вещества. У разных членов одной и той же семьи гаплотип RH кодировал продукцию одинакового количества каждого присутствующего в фенотипе антигена (Rosenfield, Kochwa [393, 576]).

Принцип идентификации генов, ответственных за продукцию Rh-антиге­нов, сводится к следующему:

1)выделение несущего Rh-активность белка с помощью преципитации специфическими антителами;

2)расшифровка аминокислотной последовательности иммунодоминантного белка, приготовление комплементарных молекулярных зондов и конструкций для идентификации кодирующей ДНК (кДНК);

3)вживление (трансфекция) кДНК в клетки или плазмиды, не производящие аналогичного иммунодоминантного продукта;

4)идентификация геномного продукта трансфектных клеток или плазмид;

5)идентификация геномной ДНК (гДНК), представляющей собой собственно ген с кодовой записью иммунодоминантного продукта.

Клонирование Rh-полипептидов

В 1990-х годах 2 лаборатории независимо друг от друга получили совершенно одинаковые клоны кДНК полипептидов RhcЕ (Cherif-Zahar и соавт. [208], Avent и соавт. [148]).

Выделение кДНК, соответствующей полипептиду D, было осуществлено независимо 3 исследовательскими группами (Le Van Kim и соавт. [418],Arce и соавт. [138], Kajii и соавт. [390]). Последовательность аминокислот в белках, полученных при помощи кДНК RhD, отличалась от аминокислотной последовательности полипептида RhсЕ по 34–36 аминокислотным остаткам из 417 последовательностей (рис. 4.7).

179

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 4.7. Аминокислотная последовательность транскриптов гена D и cE по

Mouro и соавт. [496] и Schenkel-Brunner [597]. Пунктир означает одинаковую аминокислотную последовательность сравниваемых полипептидов.

Полипептиды D и сЕ имеют высокую степень гомологии: клон полипептида D, выделенныйArce и соавт. [138], был на 96 % идентичен клону полипептида сЕ по последовательности нуклеотидов кДНК и на 92 % идентичен по структуре белка.

Le Van Kim и соавт. [418] показали, что полученные ими клоны кДНК являются продуктом гена D, поскольку фрагменты геномной ДНК, с которыми совпадали эти клоны, были получены от людей с фенотипом D +.

В то же время Kajii и соавт. [390] установили, что полученные ими клоны не были продуктом гена D, поскольку кДНК была идентифицирована у человека с фенотипом D −C +c + E +e + [390, 665, 666].

Данные о том, что у некоторых людей фенотип D − обусловлен делецией гена D, были получены Colin и соавт. [233] в экспериментах с использованием метода Саузерн-блот.

Клонирование Rh-гликопротеинов

Moore и Green [481] обнаружили, что в процессе иммунной преципитации полипептидов D и сЕ специфическими антителами одновременно с по­ липептидами преципитируются N-гликозилированные белки, получившие название RhAG (Rh-ассоциированные гликопротеины), или Rh-гликопротеины­ . Компоненты этих белков, сопровождающие полипептиды D и еС, имели несколько отличающуюся мол. массу, но одинаковую N-концевую­ аминокислотную последовательность [147].

180