6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Группы крови человека

Ridgwell и соавт. [565] клонировали фрагменты кДНК, соответствующие Rh-связанному­ гликопротеину, и выделили кДНК полной длины из библиотеки кДНК костного мозга человека. Полученный Rh-гликопротеин содержал 409 аминокислот и имел, подобно полипептидам Rh, 12 мембранных доменов с внутриклеточными N- и С-концевыми участками. Аминокислотная последовательность Rh-гликопротеина­ и Rh-полипептида различалась. Сходство ограничивалось двумя аминокислотными остатками в первом и пя-

том домене: Glu 13 и Glu 146 – в гликопротеине Rh, Glu 21 и Glu 146 – в по-

липептиде Rh [565].

Структура генов RH

В 1972 г. Ruddle и соавт. [587] удалось определить, что генный локус системы резус расположен на хромосоме 1. Затем он был картирован на коротком плече хромосомы в участке 1p34.3–p36.13 [211, 453, 462].

Когда была получена кДНК, соответствующая Rh-полипептидам, ее можно было использовать в качестве зонда в Саузерн-блоте для исследования геномной ДНК, т. е. определения структуры генов RH.

Результаты этих исследований подтвердили, что локус RH включает 2 очень похожих гена (СЕ и D), а один из этих генов отсутствует в гДНК, выделенной у нескольких неродственных лиц D − [233]. Таким образом была установлена молекулярная основа общего для европеоидов фенотипа Rh −, который часто обусловлен делецией гена D.

Ген D включает 10 экзонов и имеет организацию, похожую на структуру гена СЕ, но не идентичную ей (см. рис. 4.7).

Гены D и CE различаются по интрону 4 [138]. В гене СЕ имеется делеция 650 пар нуклеотидов, начинающаяся в интроне 4 от нуклеотида 181 [146]. Интрон 4 гена СЕ имеет 1976 пар нуклеотидов. Нуклеотиды в положении 1–181 и 831–1076 примерно идентичны в генах D и СЕ. Интрон 5 генов D и СЕ включает 1636 пар нуклеотидов. Имеется 29 нуклеотидных различий между этими двумя генами (98,2 % гомологии).

Организация гена СЕ исследована Cherif-Zahar и соавт. [209]. В связи с тем что антиген D обусловлен геном, отсутствующим у людей Rh −, определение молекулярной структуры антигенов Сс и Ее упростилось.

Mouro и соавт. [496] экстрагировали матричную РНК людей с редким фенотипом СсЕе и использовали синтетические олигонуклеотидные праймеры в присутствии обратной транскриптазы для получения кДНК полной длины, соответствующей продукту гена СЕ.

Присутствие антигенов Е и е было обусловлено заменой пролина на аланин в позиции 226. Пролин в этой позиции придавал субстрату специфичность Е, аланин – специфичность е (см. рис. 4.5).

При сравнении кДНК лиц, содержащих антигены C и c, ситуация оказалась сложнее. Наблюдали 6 различий в нуклеотидах, одна часть из кото-

181

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

рых (Cys 16, Ile 60, Ser 68, Ser 103) коррелировала с экспрессией C, другая

(Trp 16, Leu 60, Asn 68, Pro 103) – с экспрессией с (hr') [496]. Эта находка была подтверждена амплификацией гДНК от людей с известным фенотипом: экзон 1 и 2 кодировал остатки, специфичные для антигенов Сс, а экзон 5 – специфичные для антигенов Ее.

Cherif-Zahar и соавт. [208] высказали предположение, что, хотя антигены Сс и Ее являются продуктами одного и того же гена и кодированы одним видом мРНК, возможен альтернативный сплайсинг, формирующий несколько белков. Полипептид полной длины кодирует экспрессию антигенов Ее, а не Сс; сплайсеоформа, в которой отсутствует экзон 5, кодирует экспрессию Сс, но не Ее. Гипотеза подтверждается тем фактом, что из препаратов мРНК людей Rh − могут быть выделены разные продукты гена СЕ.

По мнению Umenishi и соавт. [666], сплайсеоформы не являются производными гена СЕ; они могут также происходить от гена D. Некоторые сплайсеоформы выделены из незрелых эритробластов.

В экспериментах Smythe и соавт. [618] антигены с и Е были получены de novo на поверхности эритроидных клеток K562, в которые был введен ретровирус, комбинированный с кДНК, соответствующей сЕ-экспрессии. Поскольку использованная кДНК была полной длины, это отчетливо подтвердило, что антигены с и Е находятся на одном и том же полипептиде.

Аминокислотная замена, определяющая Е- и е-специфичность [Pro 226 (антиген Е), Ala 226 (антиген е)], находится в четвертой внеклеточной петле полипептида СЕ. Эта локализация полностью соответствует серологическим различиям антигенов Е и е. Однако антигенные различия обусловлены не только аминокислотной заменой, но и соответствующим молекулярным окружением. Полипептид D также имеет остаток аланина в положении 226, но не несет е-антигенности.

Структура антигенов С и с сложнее, потому что полипептиды СЕ имеют 4 аминокислоты для антигена С и 4 – для антигена с, одна из которых [Ser 103 (антиген С) или Pro 103 (антиген с)] расположена на второй внеклеточной петле полипептида.

Три из четырех аминокислот (Ile 60, Ser 68, Ser 103), которые отличают С-активный полипептид от с-активного, обнаружены также в D-полипептиде. Эти 3 аминокислоты кодируются экзоном 2 гена СЕ и экзоном 2 гена D. Не исключено, что именно благодаря этому подобию антигенов D и C антитела анти-D могут содержать анти-С-специфичность даже в тех случаях, когда эритроциты, послужившие антигенным стимулом, не имели серологически выявляемого антигена С, т. е. это был «чистый D». Во многом идентичная топология полипептидов, кодируемых генами D и CE, лежит в основе перекрестных реакций антигенов и антител системы резус.

Считается, что гены RH синтезируют полипептиды, несущие Rh-антигены­ , не используя субстанций-предшественников.

182

Антиген D и его варианты

Антиген D (резус-антиген, резус-фактор, стандартный резус-антиген) после групповых антигенов А и В имеет наибольшее значение в трансфу­зиологии и акушерстве. Он присутствует у лиц с генотипом D / D и D / d. Как и другие Rhантигены, антиген D содержится в мембране эритроцитов. Со слюной он не выделяется и в других жидкостях и тканях организма не представлен. Лица, не содержащие антигена D, естественных антител против­ него, подобных групповым изогемагглютининам, не имеют.

Формирование эпитопов D кодируется экзонами 4 и 5 гена RHD. Avent и соавт. [143], Huang [355] считают, что конверсия генов в этих экзонах обусловливает крайне низкую экспрессию D-антигена.

Убольшинства людей D − имеется полная делеция гена RHD [138, 233, 368, 418, 616]. Соответствующего генетического эквивалента в виде d / d у них не найдено.

Вредких случаях у людей D − наблюдали частичную делецию гена RHD [146, 368, 512], особенно среди лиц с фенотипом Cde, cdE, имевших экзоны RHD-гена, которые не были функциональными.

Описаны лица D– с генотипом Cde / Cde, имеющие практически сохранен-

ный RHD-ген [137, 146]. У одного из этих лиц (рис. 4.8, строка Rо Har) полномерный ген RHD имел одну точку мутации С → Т в нуклеотиде 121, превращающую кодон глицина 41 в стоп-кодон [146]. Три другие мутации были обнаружены в RHD-транскриптах этого пробанда: в кодоне 215 – ТТС → СТС

(Phe → Leu), в кодоне 216 – TTG → CTG (Leu → Leu) и в кодоне 330 – TAC → CAC (Tyr → His).

Удругого человека было выпадение 4 нуклеотидов в секторе экзона 4 [137], что, как полагают авторы, могло привести к повреждению считывания нормального гена, в результате чего ген не проявлял себя фенотипически.

Иммунодоминантные протеины D + и D − отличаются 36 аминокислотными заменами, из которых 8 расположены на внеклеточных гидрофильных­ петлях протеина в позиции 169, 170, 172, 233, 238, 350, 353, 354. Эти замены с их моле-

кулярным окружением, по-видимому, и являются D-несущими­ детерминантами, способными связываться с анти-D-антителами.

Green [319], Le Van Kim и соавт. [418], Schmitz и соавт. [600] полагали, что экспрессию антигенов D, C и с обусловливает цистеиновый остаток, расположенный экзофациально в позиции 285.

Suyama и соавт. [646] не разделяли эту точку зрения, предположив, что Cys 285 не является определяющим в экспрессии антигена D.

Smythe и соавт. [618] применили трансфекцию генов RH в клетки K562, чтобы экспрессировать антигены Rh. В некоторые клетки К562 вводили мутантный ген D, кодирующий в позиции 285 аланин вместо цистеина. Трансфектные клетки экспрессировали одно и то же количество D-анти­гена независимо от того, что кодировала вживляемая кДНК в позиции 285 – цистеин или аланин.

183

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 4.8. Гибридные гены парциальных антигенов D. Темные прямоугольники – экзоны гена RHD, светлые прямоугольники – экзоны гена RHCE. Буквами справа обозначен антигенный комплекс, кодируемый данным геном.

Экспрессия антигена D

Выраженность антигена D на эритроцитах не является константной величиной и меняется в широких пределах: от очень сильной до очень слабой, с трудом выявляемой. Во многом она зависит от сочетания факторов Rh, имеющихся у человека.

Считается, что отсутствие одних антигенов Rh сопровождается повышенным синтезом других, чтобы обеспечить формирование полноценной клеточной мембраны. Так, в отсутствие полипептидов, несущих антигены Сс, ген RHD производит дополнительное число полипептидов D, восполняя таким образом нехватку структурных элементов в мембране клетки. Высказывалось предположение, что сильный D-антиген на таких клетках обусловлен отсутствием конкуренции генов Сс и Ее в освоении общей для них и гена D субстанциипредшественника. При делеции гена D компенсаторную функцию берут на себя гены RHCE, нарабатывая большее, чем обычно, количество СЕ-полипептидов.

184

Имеются и другие предположения относительно неодинаковой экспрессии антигена D у разных индивидов, например CDe и cDE. В частности, полипептиды Се и се, переплетающиеся в оболочке эритроцита с полипептидами D, затрудняют доступ анти-D-антител к участкам D-антигена, в результате чего создается видимость слабого реагирования эритроцитов D + с анти-D- сыворотками. При отсутствии полипептидов Се и се в оболочке эритроцитов связыванию D-антигенов с анти-D-антителами ничто не мешает, и реакция выглядит более сильной, хотя на тех и на других эритроцитах могло присутствовать одинаковое количество антигенных детерминант. Полипептиды­ сЕ в меньшей степени блокируют доступ антител к D-антигену, чем белки, несущие Сеантигены, вследствие чего антиген D выражен сильнее, когда он находится в комбинации с антигеном сЕ, и менее выражен – в комбинации с антигеном Се.

Следует также иметь в виду, что антигенные участки подсчитывают по количеству связавшихся с ними антител и это не всегда отражает истинное их число. Скрытые от доступа антител участки, расположенные в толще мембраны, а возможно, и на эндоцеллюлярной ее части, могут оставаться не учтенными.

На выраженность антигена D влияет ген С, ингибирующий в положении транс продукцию полипептидов D (см. Du). Ингибирующий эффект гена С на ген D проявляется и в положении цис. Так, по данным Rochna и Huges-Jones [568], эритроциты лиц CDe / cde содержат меньше антигенных участков D, чем эритроциты лиц cDE / cde, у которых ген С отсутствует.

Первое место по количеству серологически активных D-антигенных участков на поверхности клетки (до 200 тыс. на 1 клетку) занимают эритроциты гомозигот −D −/ −D − и *D*/*D* (табл. 4.10). Антиген D на этих клетках выражен столь сильно, что многие сыворотки анти-D с неполными антителами агглютинируют эти эритроциты в солевой среде подобно полным агглютининам. По силе реакции эти эритроциты напоминают клетки, обработанные протеолитическими ферментами. Последние удаляют с эритроцитов белки, препятствующие взаимодействию Rh-антигенов с неполными антителами. Эритроциты гетерозигот  −D −/СDе и *D*/СDе реагируют с неполными антителами слабее. Не все сыворотки, агглютинирующие эритроциты гомозигот, способны агглютинировать эритроциты гетерозигот. Эритроциты с другими генотипами, представленными на рис. 4.9, не агглютинируются неполными антителами в солевой среде.

У лиц (C)D(e), имеющих сниженную экспрессию (С) и (е), содержится меньше серологически активного D-антигена, чем у лиц −D − и *D*, однако существенно больше, чем у гомозигот сDE / cDE. Далее в соответствии с рис. 4.9 выраженность D-антигена на эритроцитах убывает в последовательности: cDE / CDe > cDe / cde > CDe / CDe > cDE / cde > CDe / cde > Cde / cDe. Последний ге-

нотип, Cde / cDe, в котором C и D находятся в позиции транс, нередко представляет собой Cde / cDue, продуцирующий слабый антиген Du. Эритроциты Du могут нести менее 500 D-антигенных участков, что находится на грани выявления даже такой чувствительной методикой, как непрямая проба Кумбса.

185

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Примечание. нд – нет данных. Для сравнения:

количествоА-антигенныхучастковнаэритроцитахA(II)–810–1170тыс.ау / эр, В-антигенных участков на эритроцитах В(III) – 810–1170 тыс. ау / эр, K-антигенных участков на эритроцитах K / K – 6 тыс. ау / эр, K-антигенных участков на эритроцитах K / k – 3 тыс. ау / эр, Fy a-антигенных участков на эритроцитах Fy a – 12 тыс. ау / эр.

−D−/−D− 200000 *D*/*D*

(C)D(e)

сDE/cDE cDE / CDe cDe/cde

CDe/CDe

cDE/cde

CDe/cde

Cde/cDe

R N

R  Har 450

Doel

+

Рис. 4.9. Количество антигенных участков D

у лиц с различным сочетанием антигенов Rh-Hr.

Меньше всего антиген D выражен на эритроцитах с парциальными D-анти­ генами у лиц R N, Ro Har, а также на эритроцитах Del, где антиген D выявляют только с помощью адсорбции – элюции при использовании особо активных­ сывороток анти-D. В то же время эритроциты с парциальным антигеном­ категории D IV реагируют сильнее с сыворотками анти-D, чем обычные­ клетки D +, несмотря на то, что они не содержат многих D-эпитопов.

186

Количество антигенов Rh у гомо- и гетерозигот

Можно ожидать, что эритроциты людей с генотипом cDE / cDE будут нести больше антигенных участков с и Е, чем эритроциты с генотипом Cde / cDE, потому что человек cDE / cDE имеет 2 гаплотипа, кодирующих продукцию этих антигенов, а человек Cde / cDE – только один. Точно также лица CDe / CDe должны иметь в эритроцитах больше антигена С, чем лица CDe / cDe.

Разницу в количестве антигена иногда можно обнаружить титрованием сыворотки анти-с, анти-Е или анти-С с соответствующими эритроцитами. При этом сыворотки нередко имеют более высокий титр с клетками, несущими двойную дозу антигена, и агглютинация с ними может быть выражена сильнее. Однако такой метод установления гомоили гетерозиготности­ неточен из-за значительной вариабельности числа реагирующих антигенных участков на эритроцитах людей с, казалось бы, одинаковым генотипом. Кроме того, далеко не со всеми сыворотками выявляют дозозависимый эффект.

Измерение количества того или иного антигена Rh у близких родственников позволило получить более точные результаты, так как имелась возможность с помощью серологических проб установить, кто из членов семьи гомо-, а кто гетерозиготен по гену D, и замерить с помощью подобранных сывороток количество антигена у этих лиц в сравнительном аспекте. Ген D в одной или двух копиях у детей в пределах одной семьи очень точно дозирует одинарную и двойную порцию антигена [393, 576].

Lewis и соавт. [438], Chown, Lewis [218] предложили способ определения гомо- и гетерозиготного варианта гена D по скорости реакции эритроцитов со специально стандартизированными для этой цели сыворотками анти-D. Другие исследователи [463] различали гомо- и гетерозигот по количеству анти- D-антител, адсорбированных на их эритроцитах, используя для этого антиглобулиновые сыворотки, меченные ферритином. Такие методы в достаточной степени приемлемы для идентификации гомо- и гетерозиготного варианта гена D у членов одной семьи, но дают весьма противоречивые результаты при определении зиготности гена D у людей, не связанных родством.

Установление гомо- и гетерозиготности гена D и других генов групп крови имеет значение для прогнозирования ГБН у женщин, имеющих аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (как правило, анти-D) и ранее родивших детей с ГБН. В таких случаях важно выяснить, является ли муж гомоили гетерозиготным по гену D. В случае, если он гетерозиготен, например CDe / cde, а предыдущая беременность женщины закончилась рождением ребенка Rh +, то с вероятностью 75 % можно прогнозировать, что при следующей беременности плод будет Rh −. Если при второй беременности, вопреки ожиданиям, снова родился ребенок Rh +, то возможность рождения ребенка Rh − в третий раз возрастает до 90 %. В том случае, когда муж гомозиготен по гену D, все дети будут резусположительными­ и родить здорового ребенка в такой семье будет проблематично, если вовремя не предпринять соответствующие меры: патронаж с ранних

187

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

сроков беременности, наблюдение за динамикой антител, досрочное родоразрешение кесаревым сечением.

В последние годы разработаны более надежные методы определения зиготности в супружеских парах, а также методы определения резус-принад­ лежности плода на ранних стадиях беременности по ДНК амниоцитов.

Наиболее надежным методом измерения количества антигенов Rh на эритроцитах как членов одной семьи, так и неродственных лиц является проточная цитометрия с использованием МКА [339].

Для подсчета числа антигенных участков на эритроцитах ряд исследователей использовали радиоактивно меченные сыворотки с различной Rh-спе­ цифичностью, а также меченные радиоактивной меткой или ферритином антиглобулиновые сыворотки против IgG человека [189, 364, 464, 568, 635]. О числе участков судили по количеству меченого субстрата, связавшегося с эритроцитами. Результаты многих исследований в основном совпадали: гомозиготы содержали больше антигенных участков, чем гетерозиготы. Таким образом, эффект дозы в Rh-системе существует, хотя и не проявляет себя в 100 % случаев, что еще раз свидетельствует о полиморфизме системы.

Количество антигенных участков на 1 эритроцит (тыс. ау / эр) для каждого антигена различно (см. табл. 4.10). У гомозигот D / D – 14–33 тыс. ау / эр, у гетерозигот D / d их количество меньше – 10–20 тыс. ау / эр. Причем у гомозигот CDe / CDe число D-антигенных участков на один эритроцит меньше (до 19 тыс. ау / эр), чем у гомозигот cDE / cDE (до 33 тыс. ау / эр), что обусловлено, как указано выше, позицией транс гена С. Лица с генотипом –D– / –D– имеют наибольшее количество D-антигена (до 200 тыс. ау / эр), что, по-видимому, связано с отсутствием супрессирующего влияния на ген D других генов RH или же неясным пока компенсаторным механизмом, направленным на замещение недостающих в мембране структурных элементов.

У гомо- и гетерозигот (СС и Сс, ЕЕ и Ее) прослеживается такая же зависимость: гомозиготы продуцируют больше антигена, чем гетерозиготы.

По количеству занимаемых участков антигены Rh-Hr распределяются в следующей последовательности: с > C > D > E > e > Fy a > G. Если сравнить эту последовательность со шкалой иммуногенности антигенов Rh и других трансфузионно опасных антигенов (D > K > Е > с> С w > e > C > Fy a), то станет ясно, что количество антигенных участков на эритроцитах не определяет степень иммуногенности того или иного антигена, по крайней мере, в рассматриваемой антигенной системе. Антиген с (hr'), имеющий максимальное число антигенных участков на 1 эритроцит (до 85 тыс.), занимает четвертое место по степени своей иммуногенности после антигенов D (Rhо), K (KEL1) и E (rh"), имеющих значительно меньше (от 3 тыс. до 33 тыс.) антигенных участков. В то же время антиген K, имеющий 3,5 тыс. ау / эр, стоит на втором месте после наиболее иммуногенного факто- ра–D.АнтигенC (rh'),представленный56 тыс.ау / эр, занимаетлишь седьмоеместо в шкале иммуногенности, а антиген Fy a отстоит от антигена K на 6 позиций,

188

хотя число антигенных участков антигена Fy a (12 тыс.), значительно болше, чем антигена K (3–6 тыс. ау / эр).

Итак, степень иммуногенности того или иного субстрата обусловлена в первую очередь качественным составом. Однако нельзя полностью исключить возможную зависимость иммуногенности от количества антигена, например отсутствуют данные о степени иммуногенности эритроцитов сс и сС, имеющих соответственно 85 и 37 тыс. ау / эр, для реципиентов СС. Можно предположить, что в большой выборке сравнительных наблюдений иммуногенность эритроцитов сс окажется большей, чем эритроцитов сС, а иммуногенность эритроцитов DD лиц сDE / cDE – большей, чем эритроцитов Dd лиц CDe / cde.

Фенотип Du (слабая форма антигена D)

Фенотип D u описан Stratton в 1946 г. [631] как новый вариант антигена системы резус, слабо реагирующий с сыворотками анти-D. Частота D u у европеоидов около 0,1 %. Находку подтвердили многие авторы [202, 218, 266, 329, 339, 429, 561]. Вскоре выяснилось, что различия между антигеном D

иD u имеют количественный, а не качественный характер [548, 578, 635]. Эритроциты D u адсорбировали анти-D-антитела в меньшей степени, чем обычные эритроциты D+, однако снятый с них элюат не проявлял какой-либо особой анти-D u-специфичности.

Эритроциты D u не реагируют в реакции солевой агглютинации с полными IgM анти-D-антителами, но реагируют с неполными IgG анти-D-антителами в коллоидных тестах, непрямой антиглобулиновой пробе. В ферментных методах они реагируют слабее (Stratton [632]). В отдельных случаях, при очень слабой выраженности антигена D u, его выявляют только непрямой антиглобулиновой пробой. Третьим элементом, отличающим фенотип D u от D, является присутствие в этих эритроцитах примерно в 98 % случаев сильновыраженного антигена С.

Первоначальное обозначение D u, данное Stratton, в настоящее время заменено общим понятием «слабый D-антиген», или «слабый D-фенотип». Современные моноклональные реагенты анти-D агглютинируют большинство образцов крови, которые раньше при использовании поликлональных сывороток были бы отнесены к слабому D-типу.

Эксперименты с поли- и моноклональными анти-D-антителами показали, что эритроциты D+ лиц CDe / cde и cDE / cDE несут соответственно около 10 тыс.

и30 тыс. участков антигена D на 1 эритроцит [364, 568]. На эритроцитах лиц Cde / сD ue сослабымD-антигеномчислоантигенныхучастковсниженодо300[648].

Beckers и соавт. [159] исследовали 6 человек со слабым D-антигеном и установили, что число участков антигена D у них составило от 500 до 1000 на одну клетку; 4 обследованных имели фенотип D+C+c+E–e+, 2 – D+C–c+E+e+, т. е. не содержали антигена С. Все 6 человек имели ген RHD, который был абсолютно нормальным при исследовании в Саузерн-блоте и ПЦР. Авторы не пришли к какому-либо определенному выводу относительно механизма низкой

189

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

экспрессии антигена D на эритроцитах исследованных людей. Возможно, это связано с неэффективной транскрипцией или трансляцией участков нормального гена или другими механизмами, обусловливающими подавление продукции антигена.

По данным разных авторов, в среднем число антигенных участков на эритроцитах со слабым D, снижено до 5–10 % от нормального уровня [157, 187, 648].

В литературе обсуждаются 3 возможных механизма появления слабого фенотипа D.

Первый механизм обусловлен позицией транс генов C и D. В 1952 г. появилось сообщение Ceppellini и соавт. [204] о том, что у некоторых людей гаплотип Cde снижает продуктивность гена D, расположенного на другой хромосоме, т. е. находящегося по отношению к гену С в позиции транс. Слабый D-фенотип часто обнаруживают у лиц с генотипом CDe / Cde и cDe / Cde [218, 329, 339, 429].

Феномен ингибиции гена D, расположенного на одной хромосоме, генным комплексом Cde гомологичной хромосомы подтвержден другими авторами

[202, 470].

Гаплотип CdE в положении транс, как считают McGee и соавт. [470], так же как и гаплотип Cde, вызывает уменьшение продукции D-антигена.

То, что слабый D-антиген формируется в результате супрессирующего влияния гена С, стало ясно из семейных исследований. Ген D родителей, имевших слабый D-фенотип, кодировал у детей продукцию нормального D-антигена, когда передавался им по наследству с геном C в позиции цис. Наследование гена С в позиции транс сочеталось со слабым D-фенотипом.

Еще одно подтверждение высказанного положения: известно, что эритроциты лиц cDE / cDE, лишенные гена С, несут от 16 000 до 33 000 участков антигена D на одну клетку, а лица CDe / CDe – меньшее число антигенных участков – от

14 000 до 19 000.

Таким образом, существование слабого D-фенотипа у лиц, имеющих нормальный ген RHD, объясняется тем, что на экспрессию антигена D влияет ген С другого гаплотипа RH. Однако это правило не является абсолютным. Некоторые лица Cde / сDe имели слабый D-антиген, а на эритроцитах других людей с таким же генотипом D-антиген был выражен нормально [218, 612].

Второй механизм появления слабого D, серологически неотличимого от формы D u, обусловлен отсутствием на полипептиде Rh некоторых эпитопов D. Необходимо отметить, что отсутствие одного или даже нескольких эпитопов не всегда проявляет себя как слабый D-фенотип. Большая часть эритроцитов с парциальными D-антигенами реагирует с анти-D-сыворотками так же активно, как если бы на веществе Rh присутствовали все эпитопы D [660, 661].

Третий механизм формирования слабого D связан с функцией редкого, с частотой менее 0,1 %, аллеля RHD, который кодирует продукцию всех эпитопов­ D, новменьшемколичестве,чемобычнодолжнобытьпредставленонаэритроцитах D+. Такой тип слабого D хорошо прослеживается при семейных исследованиях,

190