- •Имении.М.Сеченоваминздраварф
- •Насоисканиеученойстепеникандидатамедицинскихнаук
- •Глава1.Обзор литературных данных 11
- •Глава2.Материалыиметодыисследования 43
- •Глава3.Результатыисследования 64
- •Глава4.Обсуждениерезультатов 98
- •Списокиспользованныхсокращений
- •ВведениеАктуальностьтемы
- •Цельисследования:
- •Задачиисследования:
- •Научнаяновизна
- •Практическаязначимостьработыивнедрения:
- •Личныйвкладавтора
- •Основныеположения,выносимыеназащиту
- •Апробациядиссертации:
- •1.1.1.ОбщаяхарактеристикаиструктурасистемыAp-1
- •УчастиесистемыAp-1всинтезеинтерлейкинов
- •УчастиесистемыAp-1всинтезеколлагенаIтипа
- •РольтранскрипционныхфакторовАр-1впатогенезезаболеванийкожи
- •Патогенезсклеродермии
- •Сосудистаядисфункция
- •Аутоантителаприсклеродермии
- •Нарушениесинтезаколлагена.Цитокиныихемокины
- •Оксидантныйстресс
- •Клиникаочаговойсклеродермии
- •Фотография1.Бляшечнаяформасклеродермии,эритематозныйочаг
- •Фотография2.Пациенткасбуллезнойформойочаговойсклеродермии
- •Фотография3.Очаговаясклеродермия,генерализованнаяформа
- •Глава2.Материалыиметодыисследования
- •Общаяхарактеристикапациентов
- •Фотография4.Очаговаясклеродермия,бляшечнаяформа,прогрессирую-щаястадия
- •Фотография5.Бляшечнаясклеродермия.Индурациябляшки
- •Фотография6.Вариантгенерализованнойсклеродермииупациентки,от-мечаютсяобширныеочагиколичествомболее4впределах1анатомиче-скойобласти-туловища
- •Фотография7.Вариантгенерализованнойсклеродермииупациентки,от-мечаютсяобширныеочагивпределахнесколькиханатомическихобластей
- •Характеристикаисследуемойгруппыпациентов
- •Общаяхарактеристикаметодатерапии
- •Оценкакачестважизнибольных
- •ОпределениеуровняэкспрессиигеновсемействJun,Fra,FosиAtFврежимереальноговремени Взятиеипервичнаяобработкаисследуемогоматериала.
- •Анализэкспрессиигенов,кодирующихкомпонентовтранскрипционно-гофактораAp1вбиоптатахкожиизочаговсклеродермии.
- •Статистическаяобработкарезультатовисследования.
- •Глава3.Результатыисследования
- •ОсобенностиэкспрессиигеновсистемыAp-1упациентовсочаговойсклеродермией
- •Фотография9.Пациеткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойотмечалосьмаксимальнойснижениеэкспрессиигенаFra-1
- •Фотография10.Пациенткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойотмечалосьдостоверноеувеличениеэкспрессиигенаJunB
- •Фотография11.Пациенткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойдостоверноотмечалосьмаксимальноеувеличениеэкспрессиигенаFosb
- •Клиническаяэффективностьнаружнойтерапиипрепаратомтакроли-мус0,1%упациентовсочаговойсклеродермией
- •ДинамикаиндексаактивностиираспространенностипроцессаmLoSsi
- •Изменениепоказателейкачестважизниупациентовочаговойсклеро-дермиейнафоненаружнойтерапии
- •Терапевтическаяэффективностьметодовнаружноголеченияочаговойсклеродермии
- •Глава4.Обсуждениерезультатов
- •Перспективылекарственнойтерапииочаговойсклеродермии
- •Оценкаклиническойэффективностинаружногопримененияпрепара-татакролимус0,1%упациентовсочаговойсклеродермией
- •Практическиерекомендации
- •Списоклитературы
УчастиесистемыAp-1всинтезеинтерлейкинов
c-Fosсовместносc-JunиндуцируюттранскрипциюгеновцитокиновпутемвзаимодействиясядернымифакторамиактивацииT-лимфоцитов(NFAT)[Сhianetal.,1998;Macianetal.,2000].ПоследовательноесвязываниеNFATбелковсAP-1улучшаетвзаимодействиесДНКитранскрипционнуюактивность,инду-цируемуюAP-1иNFATфакторамипоотдельности.Врегуляторныхучасткахбольшинствагеновучастки,связывающиеAP-1,прилежатксвязующимучаст-камдругихтранскрипционныхфакторов,вчастностиNFAT.БелкисемействаядерныхфакторовактивированныхТ-лимфоцитовявляютсяобъектомпри-стальногоизучения,будучимишенямитакихиммуносупрессантов,какцикло-споринА.NFATбелки,экспрессируемыевбольшинствеклетокиммуннойси-стемы,играютключевуюрольвтранскрипциигеновцитокинов,атакжедругихгенов,необходимыхдляиммунногоответа.ВпромотерныхучасткахмногихгеновNFAT-связующийучастоксоседствуетсучасткомAP-1,расположенномнарасстояниив3базовыепары,формируякомбинированнуюрегуляторнуюпоследовательностьразмеромв15базовыхпар.СэтойпоследовательностьюсвязываетсямономерNFATиc-Jun:c-FosAP-1димер.Комбинированныерегу-
ляторныеэлементысосвязывающимиучасткамидляAP-1иNFATвстречаютсявпромотерахиинтронахгеновIL-2,IL-4,интерферона-γидругихцитокиновиихрецепторов[Chinenovetal.,2001].ПрисвязыванииантигенасмембраннымрецепторомсовместныйэффектNFATиAP1активируетданныегенывовремядифференцировкилимфоцитовимоноцитов[Macianetal.,2005].
УчастиесистемыAp-1всинтезеколлагенаIтипа
Белок-активатор-1-ключевойбелок,регулирующийсинтезколлагенаIтипа,индуцируемыйTGF-β1.CемействоTGFβвключаетпримерно40цитоки-нов,вовлеченныхвомногиефизиологическиепроцессыирегулирующиекле-точнуюпролиферацию,дифференцировку,апоптозимиграцию.Какотмечалосьвыше,сигнальныйпутьTGF-β1играетключевуюрольваномальнойаккумуля-цииколлагенаIиIIIтипаприсклеродермии.Присвязываниисосвоимилиган-дамирецепторыTGFβформируютдимерныетрансмембранныекомплексы,со-стоящиеизрецепторовIиIIтипов,обладающихактивностьютирозиновыхки-наз.СовместносSmadбелкамирецепторыTGFβрегулируютдеятельностьси-стемыAP-1cпомощьюMAPкиназ.Важноотметить,чтоSmadбелкиобладаютнизкойаффинностьюкДНК,иихсвязываниесрегуляторнымиучасткамигеновтребуетвзаимодействиясдругимитранскрипционнымифакторами,вчастностиcJunиATF-2[Leasketal.,2004].Транскрипция,индуцируемаяTGFβ,регулиру-етсяcFos/cJun-комплексомсовместносбелкамиSmad3иSmad4путемфизиче-скогоифункциональноговзаимодействия.SmadбелкимогутизменятьTGFβ-индуцированнуютранскрипциюбезc-Junиc-Fos,новосновномонисвязыва-ютсясдоступнымиAP-1белкамизасчетSmad3-c-Junвзаимодействия.Этотполипротеинныйкомплексявляетсяболеестабильнымитранскрипционнобо-лееактивен[Zhangetal.,1998].SmadбелкивовлеченыврегуляциюэкспрессиигеновcJun,JunBиколлагеназы1[TenDijkeP.etal.2004].
29bpпоследовательность,расположеннаямежду+292и+670-bpучастка-мипервогоинтроначеловеческогогенаколлагенаIтипаCOL1A2,содержитучасток,связывающийAP1[Liskaetal.,1990;Slacketal.,1995].AP-1-однаиз
сигнальныхмолекулпути,запускаемогоTGF-β,играющаяважнуюрольврегу-ляциитранскрипциигенаколлагенаIтипа.Установлено,чтотранскрипцион-ныйфакторAP-1связываетсяссегментомпромотераCOL1A2,расположеннымвпределах участка взаимодействиясTGF-β.Исследованияпоказали,чтоTGF-βявляетсяпотенциальнымактиваторомэкспрессииjunBвфибробластах[Mauvieletal.,1993].МутациявучасткеAP-1приводиткзначительномуснижениюба-зовойактивностиипрактическиполнойпотереответанавоздействиетранс-формирующегофакторароста.Этоподтверждает,чтоAP-1связывающийуча-стокиграетключевуюрольвсигнальномпутиTGF.Важноотметить,чтопро-дуктытранскрипциигеновc-junиjun-BантагонистическивоздействуютнаэкспрессиюгенаколлагеназызасчетAP-1контролируемойтрансактивациипромотера.Повышеннаяэкспрессияc-junснижалабазовуюактивностьпромо-тераCOL1A2на60%иполностьюблокировалаответнавоздействиеTGF-β.ТакимобразомAp-1/c-JunиграетважнуюрольврегуляциибазовойактивностипромотераCOL1A2,аповышенная экспрессияc-jun,стимулируемаяTNF-α,возникаетвответнаповышенныйсинтезколлагенаинеобходимадляегорегу-ляции[Сhungetal.,1995].
ТакжеAP-1стимулируетпрогрессиюклеточногоциклазасчетмодуляцииактиваторовклеточногоцикла-циклинаD1ициклинаЕ.Досихпоростаетсянепонятным,участвуютлитранскрипционныефакторыAP-1впролиферациифибробластовприсклеродермии.ТрансфекцияAP-1химерногодезоксинуклео-тидаблокироваласинтезколлагенаIтипавфибробластахприсклеродермии,такжеотмечалосьдвукратноеснижениеуровняпролиферациифибробластовзасчетизменениярегуляцииуровняциклинаЕ.