ГОУВПОПЕРВЫЙМОСКОВСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙМЕДИ-ЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ

Имении.М.Сеченоваминздраварф

Направахрукописи

ВавиловВладимирВладимирович

РАЗРАБОТКААЛГОРИТМОВЛЕЧЕНИЯПАЦИЕНТОВСОЧАГОВОЙСКЛЕРОДЕРМИЕЙНАОСНОВАНИИОСОБЕННОСТЕЙЭКСПРЕС-СИИГЕНОВСИСТЕМЫАР-1

14.01.10-Кожныеивенерическиеболезни

ДИССЕРТАЦИЯ

Насоисканиеученойстепеникандидатамедицинскихнаук

Научныйруководитель:доктормедицинскихнаук,

профессорПотекаевН.Н.

Москва–2014

Содержание

Списокиспользованныхсокращений 3

Введение 4

Глава1.Обзор литературных данных 11

1. ГенытранскрипционныхфакторовAP-1 11

   1. ОбщаяхарактеристикаиструктурасистемыAP-1 11

   2. УчастиесистемыAP-1всинтезеинтерлейкинов 13

   3. УчастиесистемыAP-1всинтезеколлагенаIтипа 14

   4. РольтранскрипционныхфакторовАР-1впатогенезезаболеванийкожи

15

2. Патогенезсклеродермии 17

   1. Сосудистаядисфункция 17

   2. Аутоантителаприсклеродермии 19

   3. Нарушениесинтезаколлагена.Цитокиныихемокины 22

   4. Оксидантныйстресс 28

1.3.Клиникаочаговойсклеродермии 29

Глава2.Материалыиметодыисследования 43

1. Общаяхарактеристикапациентов 43

2. Общаяхарактеристикаметодатерапии 52

3. ОпределениеуровняэкспрессиигеновсемействJun,Fra,FosиATFвре-жимереальноговремени 58

Глава3.Результатыисследования 64

1. ОсобенностиэкспрессиигеновсистемыAP-1упациентовсочаговойсклеродермией 64

2. Клиническаяэффективностьнаружнойтерапиипрепаратомтакролимус

0,1%упациентовсочаговойсклеродермией 83

Глава4.Обсуждениерезультатов 98

Выводы 118

Практическиерекомендации 119

Списокиспользованныхсокращений

TGF-β1-трансформирующийфакторростаβ1AP-1-белокактиватор-1

ATF-активирующийтранскрипционныйфакторMAPK-митогенактивируемаябелковаякиназаJNK-с-JunN-терминальнаякиназа

NFAT-нуклеарныйфакторТ-лимфоцитов

NF-κB-нуклеарныйфакторκB

MMP-матрикснаяметаллопротеиназа

PDGF-тромбоцитарныйфакторроста

mLoSSI-модифицированныйиндекстяжестиочаговойсклеродермии

IL-инерлейкин

bZIP-лейциноваямолнияосновногодоменаCOL1A2-генα-цепейколлагенапервоготипаTIMP-тканевойингибиторметаллопротеиназCTFG-тканевойфакторроста

ВведениеАктуальностьтемы

Склеродермия-хроническоезаболеваниенеизвестнойэтиологии,сопро-вождающеесянарушениямиклеточногоиммунитета,микроциркуляцииипо-вышеннымколлагенообразованием[БаткаевЭ.А.,2004].Насовременномэтапепатогенезсклеродермиирассматриваетсякаксложноевзаимодействиеповре-жденияидисфункцииэндотелиальныхклеток,воспаления,аутоиммунныхре-акцийиактивациифибробластов.Однакопричиныгиперпродукцииколлагенаприсклеродермиивнастоящеевремяостаютсядоконцанеизученными.Ре-зультатымногихисследованийпоказали,чтоключевуюрольвфенотипическихизмененияхприсклеродермиииграеттрансформирующийфакторростаβ[HigleyH.etal.,1994].Вобразцахкожи,полученныхизочаговпораженияпу-тембиопсии,выявленповышенныйсинтезTGF-β1.Такжечеткопоказаноуве-личение числарецепторовкфакторувобластиочаговсклеродермии,чтосвиде-тельствуетоповышеннойактивностиTGF-β1приданнойпатологии[Ihnetal.,2001].Крометоговисследованияхin-vitroбылавыявленакорреляциямеждуувеличениемчисларецепторовкфакторуиповышениемуровняматричнойРНКα-цепейколлагенаIтипа[Kuboetal.,2001].

Дляразработкиподходовкдиагностикеилечениюаутоиммуныхпатоло-гийнеобходимонаходитькритическиезвеньяпатологическогопроцесса.Учи-тываянарушениерегуляциигенетическогоаппаратаутакихпациентов,сэтойцельюперспективнымостаетсяприменениеметодовмолекулярнойбиологиисисследованиемгенов-кандидатовиихбелковыхпродуктов,участвующихвключевыхпатогенетическихмеханизмах.Вкачествегенов-кандидатовпринятовыбиратьтегены,уровеньэкспрессиикоторыхсущественноизменен,атакжететранскрипционныефакторыкоторыевлияютнаэкспрессиюбольшихгруппгенов.

Протеинысемействабелкаактиватора-1(AP-1),связывающиеДНКпромо-терныхучастковгеновирегулирующиеихэкспрессию,играютключевуюрольврегуляциисинтезаколлагенаIтипа,инициируемогоTGF-β.Установлено,что

сегментпромотерагенаколлагенаIтипа,скоторымсвязываетсятранскрипци-онныйфакторAP-1,расположенвпределахучасткасвязыванияTGF-β[Liskaetal.,1990;Slacketal.,1995].Индуцированнаямутацияданногоучасткапромоте-раприводилакпрактическиполнойпотереответанавоздействиетрансформи-рующегофакторароста[Chungetal.,1995].Также,повсейвероятностисистемаAP-1участвуетвпролиферациифибробластовприсклеродермиизасчетизме-нениярегуляцииуровняциклинаE[Shaulianetal.,2001].ТранскрипционныйфакторATF(Activatingtranscriptionfactor)являетсяоднимизобразующихком-понентовтранскрипционногокомплексаAP-1(Activatingprotein1),которыйво-влеченврядважнейшихпроцессоввклетках.Исследованияпоказали,чтоATFучаствуетврегуляцииTGF-β-зависимойэкспрессиигеновсинтезакомпонентовмежклеточногоматрикса,приэтомактивацияATF-2осуществяетсядвумяпу-тями:прямым-путемнепосредственногосвязыванияSmad3ипутемфосфори-лированияTGF-β-активированнойкиназой-1(ТАК-1киназой)[Sanoetal.,1995].КрометогоATF-4являетсяоднимизключевыхфакторов,участвующихвклеточномответенаоксидантныйстресс,составляющийодноиззвеньевпато-генезасклеродермическогопроцесса,путембиосинтезаглутатиона[Rutkowskietal.,2003].

ГеныAP-1задействованыввоспалениииконтролеклеточногоцикла,опо-средованноучаствуютвпроцессахпролиферации,морфогенеза,апоптозаидифференцировкиклеток.МногиеAP-1-зависимыегеныкодируютдругиетранскрипционныефакторы,цитокины,ихрецепторыиферменты,ответствен-ныезаметаболизммежклеточныхсигнальныхмолекул.Данныесвойстваси-стемыAP-1позволилирассмотретьеегенывкачествегенов-кандидатов,участ-вующихвразличныхзаболеванияхкожи,чтобылопродемонстрированоупа-циентовспсориазом[Hessetal.,2004;ПирузянЭ.С.,2007].Придетальномизу-чениисигнальныхпутей,запускаемыхпровоспалительнымицитокинами,быловыявленообщееувеличениеэкспрессиигенов,активирующихсяразличнымипутями,послесвязываниярецепторацитокинаиеголиганда,вчастностиAP-1.Такжеприсравненииэкспрессиигеноввочагахпораженияиобразцахздоро-

войкожибылоустановленоувеличениеэкспрессиис-Fos,c-JunиJunBв10-20развбиоптатахбляшеквсравненииснепораженнымиучасткамикожи[Пиру-зянидр.,2007].УпациентовссистемнымсклерозомбыловыявленоусилениеэкспрессиигеновJunDиFra-2,анокаутированиефибробластовподаннымге-намприводилокрезкомуснижениюсинтезаколлагенанабазовомуровнеинафонестимуляцииTGF-β[Palumboetal.,2011;Reichetal.,2009].

Такимобразом,рассматриваясистемуAP-1каккомпонентрегуляциисин-тезаколлагенанагенномуровне,можносделатьпредположениеоеенепосред-ственномучастиивпатогенезесклеродермическогопроцесса.Всвязисэтимособуюактуальностьприобретаетоценкаэкспрессиигеноввбляшкахупаци-ентовсочаговойсклеродермией.Результатомизучениягенетическихособенно-стейрегуляцииколлагенообразованияможетстатьуглублениепредставленийоформированииипрогрессированиисклеродермиисвозможнымвдальнейшемрасширениемвозможностейегопатогенетическиобоснованноголечения.

ВэтомпланетеоретическиепредпосылкидляпримененияприОСимеют-сяупрепарататакролимус,которыйявляетсямакроциклическимлактоном[Kroftetal.,2009].Такролимусингибируетфосфотазукальцинейрина,MAPки-назыJNKиp38,итакимобразомпрепятствуетзадержкеT-клетоквG0фазезасчетактивацииядерныхтранскрипционныхфакторовNFATиAP-1,вызываяиммуносупрессивныйэффект[Barbarinoetal.,2013].Приэтомвмировойлите-ратуреимеютсялишьединичныесведенияоприменениитакролимусаприле-чениибольныхограниченнойсклеродермией.Всевышеперечисленноеопреде-лилоцельизадачинастоящегоисследования.