1.2. Способы коррекции острой печеночной недостаточности в эксперименте

1.2.1. Моделирование острой печеночной недостаточности

Наиболее изученными моделями ОПН на мелких лабораторных животных является субтотальная резекция печени [98, 104, 129, 185, 216] и введение гепатотропных ядов, таких как ЧХУ [62, 129, 146, 155, 256 ] или D-галактозамин [84, 133, 235].

Рассмотрим патогенез ОПН при воздействии ЧХУ - вещества, нашедшего широкое промышленное применение [20].

1.2.2. Механизмы острого токсического повреждения печени при введении сСl4

Процесс повреждения клеток при воздействии этого гепатотоксина изучен в деталях [206,207], его ключевыми событиями являются восстановительная дегалогенизация при участии специфического цитохрома Р-450 с массой 52 kDa, последующее образование трихлорметилперокси радикала, инициирующего перекисное окисление липидов ЭР с одновременной потерей системы цитохрома Р-450, глюкозо-6-фосфатазы и прогрессирующим снижением спосбности ЭР к секвестрации Са²⁺. Это событие рассматривают в качестве ключевого в дальнейшем патогенезе деструкции ГЦ, поскольку прогессирующее нарастание концентрации Са²⁺ в цитозоле в комплексе с активацией ПОЛ вызывает активацию фосфолипазы А₂ и необратимое повреждение клеточной мембраны ГЦ [206].

Морфологическим эквивалентом являются выраженные изменения ультрастркутры ГЦ: редукция гранулярной эндоплазматической сети, увеличение размеров (набухание) митохондрий [57].

На светооптическом уровне определяется потеря базофилии, пикноз ядер и кариолизис (12-24 часа после введения ЧХУ), эозинофилия и гомогенность цитоплазмы. Очаги некроза оказываются в первые сутки резко очерченными. В дальнейшем структурные нарушения сводятся к полнокровию междольковых сосудов, расширению просвета центральных вен, периваскулярному отеку и расширению пространств Диссе, выраженным дистрофическим изменениям ГЦ [62].

Развитие массивных некрозов, характерное для острого токсического повреждения печени ССl₄ [60] сменяется жировой дегенерацией ткани, обусловленной аккумуляцией жиронакапливающих клеток в некротических участках с усилением их коллагенсинтетической функции [19].

Определены смертельные концентрации ЧХУ при ингаляционном, энтеральном и парэнтеральном введении; так, для белых мышей летальной концентрацией оказывается 65-70 мг вещества в 1 л воздуха при 2-часовой экспозиции, у белых крыс и морских свинок – 80 мг/л; ЛК₅₀= 46 мг/л при экспозиции 6 часов. Для человека смертельной может оказаться концентрация 50 мг/л при вдыхании в течение 1 ч, либо прием внутрь 30-50 мл [20].

При введении под кожу взрослым крысам Вистар ЧХУ в дозе 0,5 мл/100 г массы тела летальность к 4 суткам эксперимента составляет 90-100% [68, 89].

Причиной ОПН в этой модели является острое токсическое повреждение (поражение) печени – термин, более точно отражающий существо патологического процесса с преобладанием некротического компонента, чем определение “острый токсический гепатит” [60, 62].

1.2.3.Критерии эффективности метаболической клеточной коррекции опн

Прямые методы оценки эффективности при экспериментальной коррекции ОПН касаются сравнительного исследования летальности, оценки биохимических показателей под воздействием экзогенных факторов, исследования морфологии печени в динамике.

Косвенным подтверждением позитивного эффекта можно считать определение метаболитов перенесенных клеток с применением генетических маркеров, либо изучение маршрутов меченных трансплантированных клеток [127].

Рассмотрим эти критерии.

Летальность

Медицинская значимость проблемы ОПН определяется высокой опасностью для жизни [84, 199], поэтому в эксперименте основным критерием эффективности методов коррекции ОПН является снижение летальности [78, 84, 105, 250].

Показано снижение летальности с применением искусственных биоподдерживающих систем, содержащих живые ГЦ [108, 187, 199, 214, 265 ] и при ТГЦ в различных вариантах [155, 235].

Упомянем в качестве использованного критерия определение спонтанной и исследовательской активности у крыс с клеточной метаболической поддержкой на фоне печеночной энцефалопатии [211].

В то же время для сравнительной оценки эффективности методов наиболее информативны показатели, характеризующие степень нарушений гомеостаза при ОПН в условиях лечебного воздействия.

Биохимические критерии

К ним традиционно относят уровень альбумина [138, 182, 189], а также содержание общего билирубина и его фракций, аммиака, мочевины, холестерина, аминотрансфераз [118, 121, 126, 200] .

Эти показатели оценивают как в экспериментальных [111, 139, 258, 264 ] , так и в клинических работах [208].

Показатели гемостаза

Поскольку большинство прокоагулянтов синтезируются в печени, изменения системы гемостаза при ОПН сводятся к снижению содержания витамин К-связанных факторов гемостаза – протромбина, факторов VII, IX, X; протеинов C и S [173].

В результате повышается протромбиновое время и активированное парциальное тромбопластиновое время [163, 196, 229], снижается уровень фибриногена [86], что инициирует гипокоагуляцию в комплексе с тромбоцитопенией и функциональной недостаточностью кровяных пластинок [173].

Следовательно, критериями эффективности клеточной метаболической коррекции ОПН является нормализация названных показателей, показанная на собаках, белых мышах [47] и свиньях [209] .

Морфология регенерации печени при лечебном воздействии в условиях ОТП

Для оценки изменений печени при ОТП на макроскопическом уровне принято оценивать изменения цвета и массы печени, отечности, полнокровия органа [38, 40, 266].

После ксенотрансплантации клеток печени при морфологическом исследовании отмечают уменьшение резких структурных изменений в печени характерных для ОТП. Восстанавливается балочное строение долек, снижается жировая инфильтрация печени, повышается содержание гликогена. Исчезает полнокровие междольковых сосудов и расширение просвета центральных вен, периваскулярный отек [63, 73, 94, 118, 190].

Важным критерием является содержание ДНК в ядрах гепатоцитов в условиях ОТП под влиянием ксенотрансплантации клеток печени [129, 139, 228]