Глава 4. Оценка эффективности ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток эмбриональной печени в коррекции острого токсического повреждения печени 54

4.1.Течение острого токсического повреждения печени на фоне метаболической коррекции 54

4.1.1. Ход эксперимента 54

4.1.2. Летальность в экспериментальных группах 55

4.2. Динамика биохимических показателей при остром токсическом повреждении печени под влиянием ксенотрансплантации криоконсер-вированной культуры эмбриональных клеток печени 56

4.2.1. Уровень альбумина в сыворотке крови 60

4.2.2. Уровень холестерина 60

4.2.3. Уровень билирубина 62

4.2.4. Активность индикаторных ферментов 63

4.3. Динамические изменения некоторых показателей системы гемостаза 64

4.3.1. Уровень фибриногена в плазме крови 64

4.3.2. Вязкость крови 64

4.3.3. Гематокрит 67

4.3.4. Агрегация тромбоцитов 67

Резюме 68

Глава 5. Структурная оценка влияния ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени 69

5.1. Морфологическое исследование зоны трансплантации 69

5.2. Макроскопическая характеристика печени животных 70

5.3. Характеристика строения печени при световой микроскопии 72

5.4. Ультраструктура гепатоцитов при остром токсическом повреждении печени, корригированном ксенотрансплантацией культуры эмбриональных клеток печени 75

5.5. Содержание ДНК в ядрах гепатоцитов 82

Резюме 84

Заключение 86

Выводы 100

Практические рекомендации 102

Список использованной литературы 103

Введение

Актуальность работы

Острая печеночная недостаточность является тяжелым осложнением заболеваний печени. Эта проблема всегда находилась в центре внимания медицинских дисциплин. Однако эффективность предложенных методов консервативного и оперативного лечения ОПН невелика и поэтому летальность при возникновении тяжелых форм достигает 70-90% [13,130 ] .

Трансплантация гепатоцитов при острой печеночной недостаточности на протяжении последних десятилетий рассматривается в качестве перспективного метода коррекции [129,185,201,224], который предшествует ортотопической трансплантации печени [235] или даже составляет альтернативу хирургической процедуре в силу технической доступности, обратимости, возможности использования клеток одного донора для многих реципиентов [174].

Стандартными способами индукции ОПН в эксперименте для оценки эффективности трансплантации гепатоцитов являются субтотальная резекция печени [103,216], введение D-галактозамина [1984] или четыреххлористого углерода [68]; механизмы клеточного повреждения изучены в деталях [206,207 ].

Оценка эффективности методов экспериментальной коррекции ОПН базируется на сравнительном исследовании летальности, оценке биохимических показателей и системы гемостаза, динамическом контроле морфологии печени [154,216, 266].

Алло- и ксенотрансплантация гепатоцитов плода для коррекции ОПН апробирована в эксперименте и нашла применение в клинике [148, 154]. В последнее время внимание исследователей привлекли эмбриональные клетки, обладающие модулируемой пролиферативной активностью, низкой иммуногенностью, резистентностью к криоконсервации и ишемическим повреждениям [77,164].

До сих пор продолжается разработка технологии выделения гепатоцитов [145, 201,221], поиск оптимальных способов трансплантации [35, 78, 215, 258]. Нуждаются в дальнейшем исследовании морфо-функциональные аспекты регенерации печени при трансплантационной коррекции острого токсического повреждения печени. Значимость этой проблемы, нерешенные вопросы теоретического и прикладного свойства предопределили содержание настоящего исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: оценить эффективность коррекции острого токсического повреждения печени путем ксенотрансплантации криоконсервированной культуры эмбриональных клеток печени.

ЗАДАЧИ:

1. Усовершенствовать методику получения криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени.

2. Провести сравнительное исследование летальности у животных с острым токсическим повреждением печени под влиянием ксенотрансплантации криоконсервированной культуры эмбриональных клеток печени.

3. На основании биохимических тестов охарактеризовать белковосинтетическую функцию печени, выраженность синдромов цитолиза и холестаза в условиях острого токсического повреждения печени, корригированного ксенотрансплантацией культуры эмбриональных клеток печени.

4. Оценить изменения в системе гемостаза при острой печеночной недостаточности под влиянием ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени.

5. Выяснить закономерности изменения морфологической картины печени при остром токсическом повреждении в условиях ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени.

 

Научная новизна

Обоснованы оптимальные режимы выделения и культивирования эмбриональных клеток печени свиньи для криоконсервации.

На основании морфо-функциональной оценки установлена эффективность ксенотрансплантации криоконсервированной культуры эмбриональных клеток печени для коррекции острого токсического повреждения органа.

Получены новые данные о влиянии ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени на протекторные и репаративные процессы в печени при ее остром токсическом повреждении.

 

Практическая значимость работы

Усовершенствована методика выделения и криоконсервации культуры эмбриональных клеток печени, позволяющая получать материал с высокой степенью жизнеспособности после его длительного сохранения в замороженном состоянии. Предложена оригинальная среда для криоконсервации культуры эмбриональных клеток печени (заявка на изобретение "Среда для криоконсервации клеток печени"; приоритетная справка № 98117042\20 (018599) от 19.11.1998г.).

Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе кафедры госпитальной хирургии ИГМУ и института хирургии ВСНЦ СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Оптимизация режимов выделения и криоконсервации эмбриональных клеток печени свиньи позволяет получать культуру с высокой жизнеспособностью гепатоцитов, кооперированных с непаренхиматозными клетками.

2. Ксенотрансплантация криоконсервированной культуры эмбриональных клеток печени является эффективным способом коррекции нарушений гомеостаза при остром токсическом повреждении печени.

3. Введение культуры эмбриональных печеночных клеток вызывает защитный эффект при остром токсическом повреждении печени и стимулирует регенераторные процессы в печени реципиента.

 

Апробация основных положений работы

Материалы исследования представлены на Всероссийской Межвузовской научной конференции студентов и молодых исследователей (Москва, 1999), Всероссийской конференции "Реконструкция - основа современной хирургии" (Москва, 1999), Международной конференции молодых ученых и студентов "Актуальные проблемы современной медицины" (Минск, 1999), Международном съезде гастроэнтерологов "GASTRO-99" (Vancouver, Canada, 1999), 9-м Международном конгрессе гастрохирургов (Nagasaki, Japan, 1999).

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета Института хирургии ВСНЦ СО РАМН (январь, 1999), расширенного заседания кафедры физиологии биолого-почвенного факультета Иркутского государственного университета (март, 1999). Опубликовано 13 работ, в которых изложены основные положения диссертации.

 

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, трех глав собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы.

Текст изложен на 128 страницах машинописи, иллюстрирован 18 таблицами и 6 рисунками. Библиография включает 260 источников, из них 75 отечественных и 185 иностранных.