5.4. Ультраструктура гепатоцитов при остром токсическом повреждении печени, корригированном ксенотрансплантацией культуры эмбриональных клеток печени

Электронная микроскопия образцов печени крыс основной и контрольных групп на 2 сутки исследования демонстрировала однотипную картину. Данные морфометрического исследования ультраструктуры ГЦ представлены в табл. 5.3. Как следует из таблицы, среднее значение площади ядра достоверно увеличивается по сравнению с нормой (30,0±0,4) и составляет соответственно 35,0±2,4 у.е., 34,0±2,2 у.е.,35,4±1,7 у.е. (р<0,05). При сравнении площади ядра существенных межгрупповых различий не выявлено. Средняя площадь цитоплазмы в клетках животных основной и контрольных групп достоверно увеличивается по сравнению с нормой (6,8±0,1 у.е.) и составляет соответственно 8,3±0,2 у.е., 8,4±0,3 у.е., 8,7±0,2 у.е. (р<0,05). При электронно-микроскопическом исследовании печени у животных всех групп в большинстве ГЦ отмечалось понижение электронной плотности цитоплазматического матрикса; выявляются существенные сдвиги важнейших внутриклеточных структур. Профили каналов гранулярного ЭР не имеют большой протяженности, расширены и фрагментированы, на большом протяжении лишены рибосом. Объемная доля гранулярного ЭР достоверно увеличивается в основной и контрольных группах (9,1±0,8%; 10,1±1,2%; 10,8±1,0% соответственно) по сравнению с нормой (6,5±0,2%; p<0,05), при этом статистически значимых различий между группами не выявлено. Численная плотность гранулярного ЭР возрастала во всех группах за счет увеличения его фрагментации.

Таблица 5.3.

Результаты (M±m) морфометрического исследования ультраструктуры гепатоцитов

Норма	2 сутки			4 сутки
	ОГ	КГ1	КГ2	ОГ	КГ1	КГ2
Средняя площадь ядра (у.е.)
30,0±0,4	35,0±2,4 p1=0.006 p3=* p4=*	34,0±2,2 p1=0.008	35,4±1,7 p1=0.005	46,5±1,1 p1=0.001 p2=0.004 p3=0.002 p4=0.002	37,6±1,8 p1=0.004 p2=0.01	38,1±1,3 p1=0.003 p2=0.01
Средняя площадь цитоплазмы (у.е.)
6,8±0,1	8,3±0,2 p1=0.006 p3=* p4=*	8,4±0,3 p1=0.005	8,7±0,2 p1=0.003	7,1±0,4 p1=0.04 p2=0.006 p3=0.002 p4=0.002	10,2±0,9 p1=0.001 p2=0.003	10,9±0,3 p1=0.001 p2=0.003
Объемная доля гранулярного ЭР (%)
6,5±0,2	9,1±0,8 p1=0.002 p3=* p4=0.04	10,1±1,2 p1=0.002	10,8±1,0 p1=0.001	14,0±1,8 p1=0.001 p2=0.003 p3=0.001 p4=0.001	31,5±2,4 p1=0.001 p2=0.001	36,8±2,3 p1=0.001 p2=0.002
Численная плотность гранулярного ЭР (шт.)
40,1±2,5	54,6±2,9 p1=0.003 p3=* p4=0.02	56,0±2,7 p1=0.001	58,4±2,3 p1=0.001	38,9±2,7 p1=* p2=0.002 p3=0.001 p4=0.001	79,4±2,7 p1=0.001 p2=0.001	79,9±3,1 p1=0.002 p2=0.001
Объемная доля митохондрий (%)
20,0±1,4	29,7±0,7 p1=0.001 p3=0.002 p4=0.001	21,4±1,1 p1=*	20,9±1,5 p1=*	34,8±1,1 p1=0.001 p2=0.002 p3=0.001 p4=0.001	15,5±1,3 p1=0.006 p2=0.01	16,1±0,7p1=0.005 p2=0.009
Численная плотность митохондрий (шт.)
10,9±0,8	7,4±0,4 p1=0.006 p3=0.02 p4=0.02	5,9±0,6 p1=0.001	5,7±0,9 p1=0.001	8,9±0,7 p1=0.003 p2=0.01 p3=0.002 p4=0.002	3,7±0,6 p1=0.001 p2=0.004	3,7±0,3 p1=0.001 p2=0.004

 

Примечание: Значимость различий определена по критерию Стьюдента; * - различия незначимы (р>0,5); р1 - значимость различий показателей по сравнению с нормой ; р2 - значимость различий показателей по сравнению с предыдущим в группе ; р3 - значимость различий показателей в основной и контрольной 1 группах ; р4 - значимость различий показателей в основной и контрольной 2 группах.

Митохондрии большей частью округлой формы, их матрикс гомогенный, электронно-светлый, кристы различной длины, просматриваются плохо. Встречаются вакуолизированные митохондрии с полностью разрушенными кристами. При морфометрическом исследовании отмечали увеличение объемной доли митохондрий в основной группе до 29,7±0,7% (при норме 20,0±1,4%,р=0,006). В группах контроля объемная доля митохондрий не имела значимых различий с нормальным показателем. Снижение численной плотности митохондрий отмечали во всех группах. К отдельным митохондриям прилежат первичные лизосомы. Лизосомы как первичные, так и вторичные встречаются по всей площади цитоплазмы. Особенно много вторичных лизосом около желчных канальцев. Довольно часто встречаются миелиновые тельца.

Липидные включения располагаются в виде капель различной величины. Гранулы гликогена встречаются редко в единичных количествах и располагаются между мембранами гранулярной сети и митохондриями. Ядра имеют светлый матрикс. Околоядерное пространство ядерной оболочки у большинства ядер на большом протяжении расширено. Хроматин располагается отдельно лежащими глыбками по всему срезу ядра. Изменения в комплексе Гольджи сводятся к дезорганизации его компонентов, которые представлены в виде вакуолей. Желчные канальцы значительно расширены. Между отдельными ГЦ выявляются очень широкие межклеточные щели. Ультраструктура стенки синусоидов нарушена. В пределах одного среза встречаются синусоиды как с равномерно расширенным, так и деформированным просветом. В них располагается большое количество эритроцитов.

Клетки Купфера в большинстве случаев набухшие. Их ядра увеличены в объеме, ядрышко располагается эксцентрично. Ядерный хроматин разбросан по всей площади ядра. Отмечаются признаки активации фагоцитарного аппарата. В цитоплазме наблюдаются скопления лизосом, остаточных телец и липидных капель. Каналы гранулярного ЭР значительно расширены, резко увеличено количество вторичных лизосом. Зачастую отростки клеток Купфера проникают в пространство Диссе. Последнее на больших промежутках значительно расширено и заполнено аморфным электронно-светлым материалом.

Исследование ультраструктуры печени в основной и контрольных группах на 4 сутки эксперимента выявило значительные различия. При электронно-микроскопическом исследовании в ткани печени животных основной группы преобладают ГЦ со светлой гиалоплазмой, их цитоплазма окрашивается толуидиновым синим равномерно. Гранулярный ЭР представлен расширенными цистернами, имеет большую протяженность и сохранившийся рибосомальный аппарат. Обращает на себя внимание значительное снижение в цитоплазме как первичных, так и вторичных лизосом. Жировые включения при сравнении с контролем встречаются в значительно меньшем количестве и их диаметр существенно меньше (рис. 5.3).

Кариометрическое исследование показало, что средняя площадь ядер у крыс основной группы на 4 сутки составляет 46,5±1,1 и достоверно выше нормы (30,0±0,4; р=0,001). Средняя площадь цитоплазмы уменьшается в основной группе до 7,1±0,49 по сравнению с предыдущими сутками (8,3±0,2,р=0,006), но превосходит нормальные значения (6,8±0,1; р=0,04).

 

Рис.5.3. Участок цитоплазмы гепатоцита крыс основной (A) и контрольной 1 (Б) групп на 4-е сутки эксперимента. Электронограмма.Ув. 45000. 1 – гранулярный ЭР с сохранившимися рибосомами; 2 – вакуолизированный гранулярный ЭР, лишенный рибосом.

 

В контроле средняя площадь цитоплазмы увеличивается до 10,2±0,9 у.е. и 10,9±0,3 у.е.; р=0,001). В просвете синусоидов встречаются как отдельно лежащие клеточные органеллы, так и целые участки цитоплазмы. ГЦ заполнены темным цитоплазматическим матриксом. Деструктивные изменения представлены расширением и фрагментацией гранулярного ЭР. Цитоплазма заполнена жировыми включениями различного диаметра. Во многих ГЦ эти включения занимают практически весь объем гиалоплазмы. Гликоген, так же как и первичные лизосомы практически исчезают из цитоплазмы. Большинство митохондрий набухшие, с гомогенноплотным матриксом, кристы просматриваются плохо или полностью разрушены.

Визуальную картину подтверждают и количественные данные. Морфометрическое исследование показало существенное увеличение объемной плотности гранулярного ЭР по сравнению с нормой (6,5±0,2) во всех группах: в основной - 14,0±1,8 (р=0,001), в контрольной 1 - 31,5±2,4 (р=0,0001); в контрольной 2 - 36,8±2,3 (р=0,0001). Численная плотность фрагментов в основной группе не имеет достоверных отличий от нормы. В группах контроля отмечается увеличение числа фрагментов гранулярного ЭР до 79,4±2,7 и 79,9±3,1 при норме 40,1±2,5 (р=0,001).

Стопки и цистерны комплекса Гольджи значительно расширены, в отдельных ГЦ отмечается их деструкция. Перинуклеарное пространство на значительном протяжении расширена. Встречаются глубокие инвагинации ядерной оболочки. Средняя площадь ядер в контроле составила 37,6±1,8 у.е. и 38,1±1,3 у.е., что существенно ниже, чем в основной группе (46,5±1,1; р=0,001).

В контрольном материале наблюдается перестройка стенки синусоидов, часто встречаются набухшие синусоидальные клетки. Местами их плазмолемма разрыхлена и разрушена, тогда в просвете синусоидов встречаются клеточные органеллы и мембраны. Клетки Купфера значительно увеличены в объеме, часто занимают весь просвет синусоида. Их ядра крупные, кариолемма изрезана. Ядрышки просматриваются плохо. В цитоплазме в большом количестве встречаются вторичные лизосомы, вакуоли, липидные включения различных размеров. Каналы гранулярного ЭР значительно расширены, часто на большом протяжении лишены рибосом. Микроворсинки ГЦ, выступающие в пространство Диссе, сглажены.

Таким образом, анализ ультраструктуры ГЦ позволил предположить активацию регенераторных клеточных процессов под влиянием трансплантации эмбриональной ККП в условиях ОТП. Для оценки митотической активности клеток было предпринято сравнительное исследование содержания ДНК в ядрах ГЦ.