- 132 -

 

Российская академия медицинских наук

Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН

 

На правах рукописи

 

 

 

Лепехова

Светлана Александровна

 

 

Ксенотрансплантация криоконсервированной культуры эмбриональных клеток печени

в коррекции острой печеночной недостаточности

(экспериментальное исследование)

 

 

14.00.16 – патологическая физиология

Диссертация

на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

 

Научный руководитель:

кандидат мед. наук К.А. Апарцин

Научный консультант:

доктор мед. наук Ю.В. Гладышев

 

 

 

Иркутск, 1999

 

Список сокращений

 

АЛТ	– аланинаминотрансфераза
АСТ	– аспартатаминотрансфераза
ГЦ	– гепатоцит
ДМСО	– диметилсульфоксид
КГ	– контрольная группа
ККП	– культура клеток печени
КТ	– ксенотрансплантация
ОГ	– основная группа
ОПН	– острая печеночная недостаточность
ОТП	– острое токсическое повреждение печени
ПОЛ	– перекисное окисление липидов
ТГЦ	– трансплантация гепатоцитов
у.е.	– условные единицы
ФРГ	– фактор роста гепатоцитов
ЧХУ	– четыреххлористый углерод
ЭКП	– эмбриональные клетки печени
ЭР	– эндоплазматический ретикулум

 

Оглавление

Список сокращений 2

  2

оглавление 3

ВВЕДЕНИЕ 5

Применение клеток печени для коррекции острой печеночной недостаточности (обзор литературы) 10

1.1 Способы клеточной метаболической поддержки в коррекции печеночной недостаточности 10

1.2. Способы коррекции острой печеночной недостаточности в эксперименте 12

1.2.1. Моделирование острой печеночной недостаточности 12

1.2.2. Механизмы острого токсического повреждения печени при введении ССl₄ 12

1.2.3.Критерии эффективности метаболической клеточной коррекции ОПН 14

1.3. Трансплантация гепатоцитов в коррекции острой печеночной недостаточности 16

1.3.1. Способы приготовления гепатоцитов для трансплантации 17

1.3.2. Криоконсервация 19

1.3.3.Приготовление препарата для ксенотрансплантации 21

1.3.4. Способы ксенотрансплантации 21

Глава 2. Материалы и методы исследования 29

2.1 Общая характеристика экспериментального материала 29

2.2. Характеристика методов исследования 31

2.2.1.Моделирование острого токсического повреждения печени 31

Исследования проводили в лаборатории экспериментальной хирургии института хирургии ВСНЦ СО РАМН (дир. – профессор Е.Г. Григорьев). Животных содержали в условиях вивария при свободном доступе к пище и воде на рационе питания, соответствующем нормативам ГОСТа «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ», 1978 года. 31

2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации 31

2.2.3. Методы лабораторного контроля 34

2.2.4.Методы морфологического исследования 36

2.3.Методы статистической обработки 39

Глава 3. Получение криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени для ксенотрансплантации 41

3.1.Технология получения культуры клеток печени 41

3.1.1 Дезагрегация печеночной ткани 41

3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток 44

3.1.3 Очистка и культивирование эмбриональных клеток свиной печени 46

3.2.Консервация клеток 48

3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации 48

3.2.2. Сравнительная оценка эффективности криоконсервации культуры эмбриональных клеток свиной печени 50

3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация 52