- •2.4. Який клінічний матеріал може бути використаний при лабораторній діагностиці вірусних інфекцій у живих системах.
- •Вкажіть мішені дії противірусних препаратів у життєвому циклі вірусів.
- •3.1. Особливості росту клітин в культурі.
- •Особенности образования монослоя трансформированными клетками (клетки образуют мультислой)
- •Методи прямої і непрямої імунофлюоресценції.
- •Метод "летающих стекол"
- •Стандартизація лабораторних тварини за генетичними характеристиками.
- •1. Инбредные (линейные):
- •Отбор клинического материала для исследования
- •Основні групи сучасних дезінфікуючих засосбів, їх характеристики, механізми дії.
- •Галоїдовмісні сполуки
- •Альдегідовмісні сполуки
- •Пероксиданти
- •Четвертинні амонієві сполуки
- •Похідні гуанідину
- •Третинні алкіламіни (амфотензиди)
- •Композиційні препарати
- •4.5. Протигерпетичні препарати
- •5.3. Відповідно класифікації всі лабораторні тварини поділяються на 4 категорії
- •Що таке сд50, лд50, мпк, особливості їх визначення у біологічних системах.
- •6.1.Джерела одержання клітинних культур
- •Види клінічного матеріалу, що використовуються у лабораторній діагностиці вірусних інфекцій
- •6.3. Гнотобіоти і гнотобіологія
- •Які існують способи введення інфекційного матеріалу лабораторним тваринам
- •6.5.Категорії дезінфікуючих засобів в залежності від кінцевої мети їх застосування
- •7.2. Підготовка клінічного матеріалу до лабораторних досліджень в біологічних системах.
- •7.3. Стандартні умови утримання і годівлі лабораторних тварин.
- •7.4 За якими ознаками можна визначити, що в організмі лабораторної тварини відбувається репродукція вірусів.
- •7.5. Вимоги до тест-вірусів при дослідженні віруліцидної дії дезінфікуючих засобів.
- •8.1. Живильні середовища для культивування клітинних культур, їх призначення і основні характеристики.
- •8.2. Особливості деконтамінації клінічного матеріалу, що містить складні віруси.
- •8.3. Яке значення має вибір певного виду і кількості лабораторних тварин для валідації вірусологічних досліджень.
- •8.4. .Що таке лд50 та інфекційний титр вірусу, визначений на лабораторних тваринах, як між собою пов’язані ці величини.
- •8.5.Чому необхідно використовувати тест-віруси при дослідженні віруліцидної дії дезінфікуючих засобів.
- •Билет №9
- •Сольові розчини для культивування клітинних культур, їх призначення і основні характеристики.
- •9.2. Що таке стандартні умови утримання лабораторних тварин.
- •Алгоритми дослідження віруліцидної дії дезінфікуючих засобів.
- •Які основні принципи гуманного ставлення до лабораторних тварин викладені у Європейській конвенції про захист лабораторних тварин.
- •13.4.В чому полягають основні методичні прийоми при типуванні вірусів в рн у біологічних системах.
- •13.5.Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів суспензійним методом.
- •Роль ростових факторів при культивуванні культур клітин, джерела їх одержання.
- •14.2.Титрування вірусів в культурі клітин.
- •14.3.Категорій лабораторних тварин відповідно до наявності у них патогенів та умов утримання.
- •14.4.Противірусні препарати розширеного спектру дії.
- •Призначення живильних середовищ в залежності від вмісту в них сироватки.
- •15.2.Який взаємозв’язок існує між генетичним статусом тварин і об’ємом їх вибірки у групах при проведенні вірусологічних досліджень.
- •15.3.Що таке типування вірусів і як воно проводиться на лабораторних тваринах.
- •15.4Алгоритми визначення специфічної дії противірусних препаратів.
- •Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів методом тест-об"єктів.
- •Сироватка тварин як джерело ростових факторів.
- •В чому полягають основні небезпечні чинники при роботі з лабораторними тваринами.
- •16.3 Що є критерієм визначення серотипу вірусу при його типуванні в рн.
- •16.4 Як визначити оптимальний режим дії противірусних хіміопрепаратів у культурі клітин.
- •16.5 Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при знезаражуванні білизни.
- •Билет 17
- •17.1 Основні етапи підготовки сироватки крові тварин до використання у біотехнології клітинних культур.
- •17.2 Яких правил слід дотримуватись при роботі з кров’ю та біологічними рідинами інфікованих або померлих тварин.
- •17.3 Особливості виділення вірусів з клінічного матеріалу, їх титрування та типування у біологічних системах
- •17.4 Розрахунок хіміотерапевтичного індексу противірусного хіміопрепарату.
- •17.5 Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при знезаражуванні води. (в лекциях просто приведены все методы, именно для воды нету)
4.5. Протигерпетичні препарати
Ліки-попередники
Аномальні нуклеозиди як протигерпетичні препарати
Пуринові аналоги:
аденін-арабінозід (араа)
Аденін-арабінозід (араа)
Застосування:
Місцеве
• При герпетическом ураженні очей
Системне
• При герпетическом енцефаліті
• генералізованому герпесі у новонароджених
• оперізуючий лишай (герпес-зостер)
• Гепатит в
Галогенізовані нуклеозиди
Фтордезоксіурідін
Йоддезоксіурідін
Рибавірин (віразол)
Тіосемікарбазон
Метисазон (марборан)
Синтетичний антивірусний препарат (1950 г). Активний щодо вірусу віспи, зумовленої наявністю в молекулі бензольного кільця і бічний цепьі, яка містить сірку. Механізм дії - пригнічення трансляції пізніх вірусних білків на іРНК і сборгі віріонів.
Погано розчинний у воді. Застосовується внутрт у вигляді суспензії дробовими дозами по 200-500 мг / кг протягом 3 днів.
Побічні дії (нудота, блювота), через 4-6 годин після прийому, при досягненні його максимальної концентрації в крові
Похідні адамантану
Механізм протигрипозного дії адамантана
Похідні адамантану блокінуют іонні канали м2-білка вірусу грипу., В зв'язку з чим порушується його здатність проникати в клітини і вивільняти рібонулеопротенід (наругшаются ранні стадії репродукції (проникнення і роздягання).
Інгібітори вірусспеціфіческмх ферментів
Інгібітори нейрамінідази вірусів грипу
Ззанамівір (реленза)
Озелтамівір (таміфлю)
Механізм дії інгібітора нейрамінідази
Нейрамінідазу (сіалаза) - один з ключових ферментів, що беруть участь в репродукції вірусів грипу а і в.
При інгібуванні нейрамінідази:
• Порушується здатність вірусів проникати в чутливі клітини, так як вірус не може відокремитися від клітинного рецептора в рецептосоме,
• Сповільнюється вихід вірусів з інфікованої клітини,
• Зменшується стійкість вірусу до дії секрету слизових дихательрних шляхів.
Внаслідок цього сповільнюється і навіть запобігає подальше поширення вірусів в організмі.
Білет №5
5.1. Основна кількість робіт, виконаних на суспензіях, присвячена вивченню їх росту та метаболізму в накопичувальній культурі. Ріст клітинної популяції в циклі вирощування накопичувальної культури виражається S-подібною кривою. Цикл росту вимірюється часом від виходу культури в стаціонарну фазу. В процесі субкультивування клітини проходять послідовно наступні фази:
1) латентну або лаг-фазу;
2) експоненціальну (логарифмічну) фазу;
3) стаціонарну фазу;
4) фазу загибелі клітин.
1. лаг-фаза, охоплює проміжок часу від моменту внесення клітин на живильне середовище й до досягнення максимальної швидкості росту. В цей період клітини пристосовуються до умов культивування. Тривалість цієї фази залежить від зовнішніх умов, віку і специфіки клітин.
2. Експоненціальна, або лог-фаза. В цей період розмноження клітин відбувається з найбільшою швидкістю. Кількість клітин швидко збільшується. Внаслідок інтенсивного розмноження клітин відбувається швидке поглинання поживних речовин із живильного середовища і нагромадження в ньому продуктів обміну. Це, своєю чергою, сповільнює розмноження культури і лог-фаза переходить у наступну фазу.
3. Стаціонарна фаза настає тоді, коли кількість клітин перестає збільшуватись. У цей період кількість новоутворених клітин дорівнює числу відмерлих, а тому кількість живих клітин деякий час залишається незмінною. Разом з цим стаціонарна фаза характеризується максимальною величиною біомаси, максимальною життєдіяльністю клітинної популяції.
4. Фаза відмирання. У цій фазі відмирання бактерій переважає над розмноженням, зростає гетерогенність культури тощо. Такий стан клітинної популяції зумовлюється зміною фізико-хімічних властивостей поживного середовища та іншими несприятливими чинниками.
5. 2. ВІДБІР КЛІНІЧНОГО МАТЕРІАЛУ ДЛЯ ІССЛЕДОВАВНІЯ
У ранні терміни від початку захворювання, в тченіе 5-7 днів після прояву перших клінічних симптомів.
Секційний матеріал відбирають відразу після смерті хворого
Дотриманням правил асептики
При дотриманні правил асептики проби відбирають в стерильні контейнери, що містять 2-3 мл ВТС (сольовий розчин + антибіотики + білок)
Проби можуть зберігатися до 24-48 годин при 4 - 8 ° С
У разі необхідності проби можуть зберігатися до 6 місяців і довше при -40 -70 º C
Слід уникати повторного заморожування і відтавання клінічного матеріалу
МАРКУВАННЯ І ДОСТАВКА КЛІНІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
1. Клінічний матеріал постачають етикеткою, в якій вказані: ПІБ хворого, діагноз, вид клінічного матеріалу, дату його паркану.
2. Напис має бути розбірливою і зберігатися навіть в разі намокання етикетки
3. Контейнери з клінічним матеріалом поміщають у спеціальні транспортні контейнери з танучим льодом
4. Матеріал повинен бути доставлений в вірусологічну лабораторію якнайшвидше
ПІДГОТОВКА КЛІНІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
ОБРОБКА вируссодержащим МАТЕРІАЛУ
1. Освітлення при низкоскоростном центрифугировании
2. Приготування 10% суспензії
АЛІКВОТІРОВАНІЕ
І ЗБЕРІГАННЯ
Стерильний матеріал поділяють на аліквоти в пробірки (наприклад Еппендорф) по 1мл
Допускається розведення матеріалу в 2-10 разів з подальшим аліквотірованіем
Проби можуть зберігатися:
При 4 - 8 º С - до 24-48 годин
При -40 -70 º C - 6 місяців і більше Слід уникати повторного заморожування і відтавання клінічного матеріалу