1. Роль ростових факторів при культивуванні культур клітин, джерела їх одержання.

факторы роста Применяется:

• Сыворотка крови крупного рогатого скота

• Эмбриональная (эмбрионы поздних сроков)

• Новорожденных телят (до 10 дней)

• Молодых телят (до 12 месяцев)

• Молодых телят, обогащенная железом (4-6 месяцев)

• Взрослых коров (1-6 лет)

• Сыворотка крови и эмбрионов других животных

По своему назначению питательные среды подразделяются на:

• Ростовые

(2,5 и более % сыворотки)

• Поддерживающие

(менее 2,5 % сыворотки) или без сыворотки

14.2.Титрування вірусів в культурі клітин.

^{ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ}

• ^{Титрование выделенных вирусов проводят с целью количественного определения содержания вирусных частиц в единице объема исследуемого материала}

• ^{Титрование это обязательный этап как выделения вирусов из клинического материала, так и их дальнейшего типирования и изучения биологических свойств возбудителя}

^{ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ}

• ^{Титрование можно проводить в трех биологических системах:}

^{На животных}

^{В культуре клеток}

^{На эмбрионах птиц}

• ^{Титрование вирусов всегда проводят в той же системе, в которой вирус был выделен}

• ^{При изменении биологической системы, перед титрованием вирус должен быть адаптирован в течение трех пассажей к новой биологической системе}

^{ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ В ЖИВЫХ СИСТЕМАХ}

^{Готовят последовательные десятикратные серийные разведения (от 10-1 до 10-6) и более выделенного материала: культуральной или эмбриональных жидкостей, сыворотки крови, суспензий органов животных}

^{ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ В ЖИВЫХ СИСТЕМАХ}

1. ^{Формируют группы тест-объектов (клеточных культур, эмбрионов, подопытных животных) по 4 тест-объекта в каждой}

2. ^{Вируссодержащим материалом в соответствующем разведении инфицируют по 4 тест-объекта}

3. ^{Материал вводят начиная с максимального разведения}

^{ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОГО ТИТРА ВИРУСА}

• ^{Титр вируса – это такое наибольшее разведение вируссодержащей жидкости, которое вызывает цитопатический эффект или гибель (или проявление признаков заболевания) у половины инфицированных тест-объектов в течение всего времени наблюдения}

• ^{Инфекционный титр вируса обозначается:}

• ^{Для культур клеток – ТЦД50/мл (тканевая цитопатическая доза)}

• ^{Для животных и эмбрионов -ЛД}₅₀^{/мл (летальная доза) или ИД}₅₀^{/мл (инфицирующия доза)}

• ^{Титр вируса всегда соответствует его 1 инфекционной дозе}

• ^{День инфицирования считается нулевым}

• ^{Гибель животных в течение 1 суток от момента инфицирования расценивается как реакция на манипуляцию}

^{УЧЕТ ТЦД50 (ЛД50) ВИРУСА}

^{РАСЧЕТ ИНФЕКЦИОННОГО ТИТРА ВИРУСА ПО МЕТОДУ КЕРБЕРА}

• ^{Расчет проводят по формуле}

• ^{-lg ЛД}₅₀ ^{= L-d (S-0.5), где:}

• ^{L – логарифм начального разведения в опыте}

• ^{D – позность между логариямами последовательных разведений}

• ^{S – сума пропорций тест-объектов, довших позитивный результат (заболевание или гибель животных)}

• ^{Lg ЛД}₅₀ ^{= -1-1(4,0-0,5) = -4,5}

• ^{Инфекционный титр вируса = 10-4,5 ЛД}_50/^мл

^{ОПРЕДЕЛЕНИЕ 10 И 100 ЛД}₅₀

• ^{Одна летальная доза вируса ЛД}₅₀ ^{всегда соответствует инфекционному титру вируса}

• ^{Соответственно 10 и 100 ЛД}₅₀ ^{соответствует разведение клинического материала, содержащего вирус до 10-4 и 10-3.}