- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
Транспортные. Их используют на этапах доставки биологического материала в бактериологическую лабораторию; состав этих сред такой, что бактерии сохраняют жизнеспособность, но не размножаются в них, поэтому количественный и качественный состав микрофлоры не изменяется.
Среды обогащения – жидкие среды, которые подавляют сопутствующие возбудителю микроорганизмов (щелочная пептонная вода для холерного вибриона, среды с желчью для энтеробактерий) и стимулируют рост возбудителя.
Среды для получения изолированных колоний.
Среды для накопления чистой культуры.
Среды для идентификации микроорганизмов.
Консервирующие для длительного хранения микроорганизмов в условиях морозильной камеры. Эти среды содержат криопротекторы (10% глицерин), защищающие мембраны в процессе замораживания; необходимы для создания коллекций микроорганизмов.
Приготовление питательных сред.
Большинство сред, используемых в бактериологии, представляют собой высушенные концентраты в заводской фасовке, которые взвешивают, растворяют в дистиллированной воде, стерилизуют и разливают в лабораторную посуду. Этапы приготовления таких сред следующие:
Взвешивают навеску сухой концентрированной среды в соответствии с инструкцией по применению.
Растворяют навеску в соответствующем объеме дистиллированной воды.
Доводят до кипения при постоянном перемешивании и кипятят 1 мин до полного растворения компонентов. Доводят рН среды до требуемой величины обычно, 7,2±0,2.
Разливают среду в подготовленную посуду, закрывают ватно-марлевыми пробками, стерилизуют в автоклаве при +1210С в течение 15 мин. Среды с углеводами стерилизуют при +1150С в течение 15 мин.
После охлаждения среды до 45500С добавляют при необходимости селективные и/или стимулирующие добавки: 5% крови, 5% сыворотки, антибиотики, гемин, витамины и др., тщательно перемешивают.
Разливают среду в стерильные чашки Петри по 20 мл на чашку (чтобы глубина агарового слоя составляла не менее 4 мм), равномерно распределяют, оставляют до застывания. Используют стерильные одноразовые пластиковые чашки Петри или стеклянные, многоразового использования, предварительно простерилизованные.
После застывания среды её подсушивают от конденсата в термостате в течение 30 мин. Для этого на полку термостата кладут лист фильтровальной бумаги и помещают чашку так, чтобы крышка служила опорой для края её дна, перевёрнутого средой вниз.
При необходимости чашки Петри с готовой средой можно хранить в запаянном полиэтиленовом пакете при +2+80С в течение 710 суток; перед посевом среды подсушивают в термостате до исчезновения конденсата на внутренней поверхности крышки.
Рост бактерий в жидких питательных средах.
При росте бактерий в жидких питательных средах могут наблюдаться:
1) равномерное помутнение среды типично для большинства факультативно-анаэробных бактерий; при этом степень помутнения может быть слабой, умеренной или сильной;
2) придонное или пристеночное помутнение среды специфично для стрептококков и облигатно анаэробных бактерий; осадок может быть плотным, рыхлым, слизистым или хлопьевидным;
плёнка на поверхности среды характерна для аэробов, плёнка может быть тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой. Рост в виде пленки характерен, напр., для Yersinia pestis (от пленки вниз спускаются нити- «сталактиты») и Vibrio cholera (нежная пленка).
Рост бактерий на плотных питательных средах.
На плотной питательной среде из одной микробной клетки вырастает скопление микроорганизмов колония. Морфотипы колоний, вырастающих на средах, зависят от видовой принадлежности микроорганизма и позволяют идентифицировать и дифференцировать микроорганизмы.
На плотных питательных средах колонии микроорганизмов могут отличаться размерами, формой, краем, поверхностью, прозрачностью, структурой и консистенцией, профилем, цветом и запахом (табл. 7, рис. 19).
Таблица 7