- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
Признаки |
Характеристика признаков |
Морфологические
|
размеры форма взаимное расположение тинкториальные свойства: окраска по Граму или другими дифференциально-диагностическими методами |
Культуральные |
рост на плотных (вид колоний) и в жидких средах |
Биохимические
|
выявление ферментов: протеаз (разлагающих белки) карбогидраз (разлагающих углеводы) липаз (разлагающих липиды) оксидоредуктаз (оксидазы, каталазы, дегидраз) ферментов-токсинов (гемолизинов, плазмокоагулазы, лецитиназы, гиалуронидазы, ДНК-азы) экзотоксинов (дифтерийного и др.) профиля летучих жирных кислот (для анаэробов) |
Генетические |
содержание Г+Ц (%) в ДНК последовательность нуклеотидов в ДНК и РНК |
Серологические |
изучение антигенной структуры микроба и определение его серовара в РА на стекле с моновалентными сыворотками или в реакции латекс-агглютинации |
Биологические
|
вирулентность для животных токсигенность чувствительность к бактериофагам (определение фаговара) чувствительность к антибиотикам |
Экологические |
(естественное место обитания) |
4 Этап.
А. Учет и анализ результатов. Учитывают результаты изучения биохимических, серологических, генетических и др. характеристик и сравнивают их со свойствами эталонных (типовых) штаммов различных видов микроорганизмов. Относят идентифицируемый микроорганизм к тому виду, с которым он проявляет наибольшее сходство. Учитывают спектр чувствительности к противомикробным препаратам.
Б. Выдача заключения. Оформляют заключение, которое представляет собой заверенный бланк с данными о пациенте, исследованном материале, выделенных видах микроорганизмов (в случае выделения УПМ необходимо указывать количество), спектре их чувствительности к противомикробным препаратам.
II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
Среди облигатных анаэробов выделяют спорообразующие анаэробы клостридии (возбудители ботулизма, столбняка, газовой гангрены) и неспорообразующие (неклостридиальные) пептококки, пептострептококки, вейлонеллы, пропионобактерии, бактероиды, порфиромонады, превотеллы, фузобактерии.
1 Этап.
А. Забор материала и транспортировка с использованием транспортных систем для анаэробов.
Б. Микроскопическое исследование материала (в материале присутствуют полиморфные микроорганизмы, либо грубые грамположительные палочки с обрубленными концами).
В. Предварительная обработка материала методами температурного или алкогольного шока для выделения спорообразующих анаэробов.
Процедура алкогольного шока: в течение 1 часа при комнатной температуре (22250С) при постоянном перемешивании выдерживают смесь равных объемов абсолютного (или 96%) этилового спирта и исследуемого материала (суспензия фекалий, раневой экссудат).
Процедура теплового шока: в подогретую на водяной бане при 800С в течение 5 минут пробирку со средой из рубленого мяса с глюкозой и крахмалом (chopped meat-glucose-starch medium) добавляют 1 мл суспензии соответствующего образца. Экспонируют пробу в течение 10 минут, а затем извлекают пробирку и охлаждают перед посевом в холодной воде.
Г. Посев материла на анаэробный кровяной агар и на элективные, дифференциально-диагностические среды (анаэробный кровяной агар с гентамицином или анаэробный кровяной агар с неомицином и налидиксовой кислотой) с целью получения изолированных колоний. Посевы инкубируют 2448 часов при 370С в анаэробных условиях (в анаэробной камере, либо в микроанаэростате, либо в анаэробном пакете).
Д. Посев материла в жидкую тиогликолевую среду с целью определения летучих жирных кислот.