2 Этап.

А. Изучение морфтипов колоний на кровяном анаэробном агаре. Колонии анаэробов слизистые, выпуклые, мелкие, полупрозрачные, с серо-белыми, преимущественно ровными краями. Колонии пигментирующих видов превотелл, порфиромонад, пептококков и пептострептококков приобретают светло-коричневое или черно-коричневое окрашивание на 714 сутки инкубации на средах, содержащих кровь. Колонии бактероидов на кровяном агаре могут давать зоны -гемолиза. Колонии Clostridium perfringens могут обуславливать двойной гемолиз: 1 зона (внутренняя)  -гемолиз, 2 зона (внешняя)  -гемолиз. Роящийся рост типичен для C. septicum, C. tetani. C. difficile образуют колонии в виде битого стекла, могут иметь круглую или неправильную форму со слегка волокнистыми краями. Колонии Fusobacterium spp. имеют желтоватый или желто-кремовый оттенок.

Б. Хроматография тиогликолевой среды и индикация анаэробов в среде по наличию летучих жирных кислот.

В. Микроскопия колоний.

Г. Изучение флюоресценции колоний с помощью лампы Вуда. В проходящем длинноволновом УФ-свете (365 нм) представители рода Prevotella дают ярко-красную флюоресценцию, рода Porphyromonas и C. difficile - желто-зеленую флюоресценцию.

Д. Посев изолированных колоний с целью определения их чувствительности к кислороду. Селективные анаэробные среды не всегда эффективно ингибируют рост сопутствующей факультативно-анаэробной микрофлоры, в связи с чем, на втором этапе бактериологического исследования подтверждают чувствительность исследуемой культуры к кислороду. Для этого намеченные для дальнейшего бактериологического исследования колонии высевают параллельно на сектора на две чашки Петри, одну из которых инкубируют в анаэробных условиях, а другую в аэробных (рис. 24).

1 2

6. 3

5 4

 

                            

 

Культуры

1, 2, 5

подвергают

дальнейшему

бакисследованию

инкубация в аэробных условиях

1 2

6 3

5 4

инкубация в анаэробных условиях

Рис. 24. Подтверждение чувствительности исследуемой культуры к кислороду

Посев на сектора осуществляют для всех морфотипов колоний; в случае однотипности колоний пересевают не менее пяти колоний. Посев на сектора позволяет также накопить чистые культуры анаэробных микроорганизмов, что важно на дальнейших этапах идентификации и определения чувствительности к антимикробным средствам. Посевы инкубируют 24 – 48 часов при 37⁰с.

3 этап. На третьем этапе исследуют свойства культур, для которых подтверждена чувствительность к кислороду.

А. Определение чистоты культуры анаэробов в мазке по Граму.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры анаэробов на основании биохимических признаков и спектра летучих жирных кислот. Ориентировочная идетификация до рода проводится с использованием ограниченного числа тестов, развернутая идентификация до вида – с использованием широкого спектра тестов.

Изучение биохимических признаков предпочтительно с использованием коммерческих тест-систем для биохимической идентификации анаэробов, которые позволяют проводить относительно точную видовую идентификацию. Большинство тест-систем применяются в комплексе с компьютеризированным банком данных биохимических профилей различных видов анаэробов, что упрощает процесс идентификации микроорганизмов.

В. Определение спектра чувствительности к антибиотикам.

4 этап – аналогично выделению аэробов и факультативных анаэробов.

А. Учет и анализ результатов.

Б. Выдача заключения.

Оценка БЛМИ.

Достоинства:

• относительно высокая чувствительность (около 10² микроорганизмов в мл);

• относительно высокая специфичность (возможность установления этиологии заболевания);

• возможность определения количества микроорганизмов в исследуемом материале;

• возможность определения спектра чувствительности выделенной чистой культуры к антибиотикам;

• ранний метод исследования (может применяться с первых дней заболевания).

Недостатки:

• относительная длительность;

• трудоёмкость;

• опасность инфицирования;

• дорогостоящий.

Таблица 9

Схема бактериологического000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 метода исследования

Цели	1. Постановка этиологического диагноза.
	2. Определение дополнительных свойств (например, чувствительности микроорганизма к антибиотикам и бактериофагам).
	3. Определение количества микробов при диагностике инфекций, вызываемых УПМ.
	4. Типирование микроорганизмов (определение фаговаров и сероваров) в эпидемиологических целях.
Этапы		Выделение аэробов и факультативных анаэробов		Выделение облигатных анаэробов
	1	забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала посев в среду обогащения (при необходимости) микроскопия посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний (количественный посев при выделении УПМ)		забор материала и транспортировка с использованием транспортных систем для анаэробов микроскопия предварительная обработка материала методами температурного или алкогольного шока для выделения спорообразующих анаэробов посев на анаэробный кровяной агар и на элективные, дифференциально-диагностические среды с целью получения изолированных колоний посев в жидкую тиогликолевую среду с целью определения летучих жирных кислот
	2	изучение мофотипов колоний микроскопия колоний ориентировочная РА на стекле с поливалентными сыворотками (при необходимости) накопление чистой культуры		изучение морфотипов колоний на кровяном анаэробном агаре микроскопия колоний хроматография тиогликолевой среды и определение летучих жирных кислот изучение флюоресценции колоний с помощью лампы Вуда отсев изолированных колоний с целью определения их чувствительности к кислороду
	3	учет роста на среде накопления		исследование свойств чувствительных к кислороду культур
		оценка чистоты культуры в мазке по Граму окончательная идентификация чистой культуры определение спекрта чувствительности к антибиотикам
	4	учет и анализ результатов выдача заключения
Оценка	достоинства		относительно высокая чувствительность (около 102 микроорганизмов в мл) относительно высокая специфичность (возможность установления этиологии заболевания) возможность определения количества микроорганизмов в исследуемом материале возможность определения спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам ранний метод исследования (может применяться с первых дней заболевания)
	недостатки		относительная длительность трудоёмкость опасность инфицирования дорогостоящий