- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
Условия инкубации:
изменение температуры инкубации может привести к торможению либо к увеличению скорости роста, поэтому посевы инкубируют при 350С;
преждевременный или поздний учет результатов может привести к ошибочной оценке результатов, поэтому учёт проводят через 1824 часа инкубации.
Причины несовпадений результатов определения активности препарата in vitro и его клинической эффективностью в лечении пациентов:
отсутствие адекватного хирургического лечения;
общее состояние пациента (возраст, питание, сопутствующие заболевания);
несвоевременное назначение антимикробной терапии;
низкая биодоступность препарата;
невозможность достижения бактерицидной концентрации в воспалительном очаге;
инактивация микробными ферментами.
Некоторые резистентные формы микроорганизмов, получающие эпидемическое распространение.
Антибиотикорезистентные S. pneumoniae (АРП) - пневмококки, резистентные к антибактериальным препаратам трех и более классов (например, к пенициллину, ко-тримоксазолу и макролидам).
Бактерии, продуцирующие β-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС), способны инактивировать β-лактамные антибиотики различных классов, включая пенициллины и цефалоспорины I-IV поколений, кроме цефамицинов (цефокситин, цефотетан) и карбапенемов.
Бактерии, продуцирующие β-лактамазы широкого спектра действия, способны инактивировать пенициллины, включая аминопенициллины (ампициллин, амоксициллин), антисинегнойные пенициллины (карбенициллин, пиперациллин и др.), цефалоспорины I и отчасти II (цефаклор) поколений.
Ванкомицинорезистентные энтерококки (VRE) – Enterococcus spp. для которых МИК для ванкомицина составляет 32 мг/л и более.
Метициллинорезистентный S. aureus (MRSA) – S. aureus, резистентные к метициллину (оксациллину), которые содержат ген mecA, обусловливающий продукцию измененного пенициллинсвязывающего белка ПСБ-2. ПСБ-2 плохо связывает β-лактамные антиботики и они не транспортируются в бактерии. MRSA устойчивы ко всем β-лактамным антибиотикам и обычно резистентны к антибиотикам других классов, поэтому их называют «множественно-резистентные стафилококки».
S.aureus с промежуточной резистентностью к ванкомицину или S.aureus с промежуточной резистентностью к гликопептидам – S.aureus, которые характеризуются значениями МИК ванкомицина 8–16 мг/л.
Биологический (экспериментальный) метод исследования
Биологический (экспериментальный) метод исследования (ЭСМИ) - совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных.
Цели ЭСМИ.
Выделение и идентификация чистой культуры микроорганизмов, если её невозможно получить на питательных средах:
а) из-за большого количества в материале посторонней микрофлоры, обладающей ингибиторным действием (например, выделение возбудителя чумы из разлагающихся трупов грызунов);
б) для выделения микроорганизмов, которые на питательных средах не растут (риккетсии, вирусы).
Определение вирулентности и патогенности микроорганизмов.
Индикация и идентификация экзотоксинов.
Изучение патогенеза инфекционных болезней при воспроизведении экспериментальных инфекций.
Производство биологических препаратов (профилактических, диагностических и лечебных сывороток, вакцин, культур тканей).
Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов (химиопрепаратов, иммунопрепаратов).
Лабораторные животные служат донорами крови для приготовления кровяных питательных сред и проведения исследований, связанных с использованием крови и её ингредиентов.
Этапы ЭСМИ.