Ускоренный метод

Характеристика метода. Полуколичественный или количественный. Позволяет получить результат через 4-6 часов. Основан на выявлении начальных стадий роста бактерий.

Особенности метода. Используют индикаторы окислительно-восстановительного потенциала (ОВП)  хлорид тетразолия или индикаторы рН среды (в том числе флюоресцентные), которые позволяют выявлять рост микроорганизмов на ранних стадиях.

Техника проведения. Определение чувствительности проводят либо диско-диффузионным методом, либо методом разведений в бульоне (см. выше). При использовании диско-диффузионного метода через 46 часов агар с культурой и нанесенными дисками обрабатывают индикатором окислительно-востановительного потенциала  хлоридом тетразолия. В случае использования метода разведений в бульоне изначально в жидкую среду с антибиотиками добавляют индикатор рН и сбраживаемые углеводы, при этом рН среды устанавливают нейтральной 7,2±0,2. За счет индикатора среда приобретает определенный цвет.

Принцип учета. После обработки ОВП индикатором в местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не изменяется. В случае использования индикатора рН, если антибиотик не активен, то микроорганизмы растут и выделяют кислые метаболиты, индиктор рН меняет цвет. Если антибиотик активен, то микроорганизмы погибают и среда не изменяет свой цвет.

Оценка чувствительности. Оценка результатов проводится по диаметру неокрашенных зон вокруг дисков. В жидких средах по изменению цвета среды в пробирках определяют МИК антибиотика.

Оценка метода. Простой, ориентировочный.

Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов

Характеристика метода.

Рис. 47. Карта с лунками, заполненными

дегратированными антибиотиками,

углеводами, индикаторами рН

Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации, прогнозирует механизмы устойчивости, позволяет создавать компьютерную базу резистентности всех исследованных культур к антиботикам.

Особенности метода. Используют стандартные тест-системы, в которых антибиотики в трех концентрациях внесены в специальные лунки пластиковой тест-системы. В лунках также находятся углеводы и индикатор рН. Все субстраты в лунках высушены.

Техника проведения. Готовят суспензию чистой культуры тест-микроорганизмов с мутностью 0,250,65 по стандарту McFarland. Прибор вносит автоматически суспензию микроорганизмов в тест-систему, инкубирует при 35⁰С в течение суток, учитывает каждые 2 часа результаты, по мере готовности результатов интерпретирует их в течение 2–24 часов, выдает протокол результатов (электронный, печатный).

Принцип метода. Если концентрация антибиотика не активна, микроорганизмы растут и размножаются, вызывая увеличение мутности среды, снижение рН среды и изменение цвета индикатора. Если концентрация антибиотика активна, то микроорганизмы не изменяют мутность и цвет среды (рис. 47).

Оценка чувствительности. Прибор автоматически проводит нефелометрию и спектрофотометрию и по изменению мутности и цвета среды определяет МИК тест-культуры. Сравнивает ее со стандартными величинами МИК и относит тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным штаммам.

Оценка метода. Стандартный, из-за автоматизации прост в исполнении, позволяет получать результаты через 5–8 часов, позволяет создавать электронную базу данных и сравнивать данные из различных лабораторий. Требует дорогостоящего автоматического анализатора.