- •Методы исследования в микробиологии
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования (бсми)
- •1 Этап бсми. Забор, хранение и транспортировка материала.
- •2 Этап бсми. Приготовление микропрепаратов.
- •1) Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в убитом состоянии:
- •Препараты, позволяющие изучать микроорганизмы в живом состоянии:
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Среды для получения изолированных колоний.
- •Среды для накопления чистой культуры.
- •Среды для идентификации микроорганизмов.
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Методы, основанные на изучении фрагментов днк.
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Состав питательной среды:
- •Величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):
- •Условия инкубации:
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •Определение активности гуморального поствакцинального индивидуального или коллективного иммунитета;
- •Определение титров диагностических, лечебных и профилактических сывороток;
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Наличие ложных результатов:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •Достоинства алми:
- •II. Недостатки алми:
- •Оглавление
4 Этап бсми. Заключение.
Оценка БСМИ.
Достоинства:
простой;
доступный;
быстрый;
экономичный.
Недостатки:
низкая чувствительность световых микроскопов (около 104-105 микроорганизмов в мл), поэтому информативность БСМИ невелика;
низкая специфичность из-за схожести морфологии микроорганизмов разных видов, поэтому результаты его могут использоваться как ориентировочные при индикации высоких таксонов;
обычно, как самостоятельный метод, БСМИ – поздний метод исследования, так как для накопления концентрации микроорганизмов, улавливаемой БСМИ, необходимо время; в то же время БСМИ используется на всех этапах БЛМИ для контроля чистоты выделяемой культуры.
Таблица 4
Схема микроскопического метода исследования
Цели |
|
||||
|
|||||
Этапы
|
1 - взятие, хранение и транспортировка материала |
||||
2 - приготовление микропрепаратов |
для изучения убитых микроорганизмов:
|
окрашивание микропрепаратов |
простые методы
|
||
сложные методы |
|||||
для изучения живых микроорганизмов:
|
|||||
3 - микроскопия:
|
|||||
4 - заключение |
|||||
Оценка
|
достоинства
|
|
|||
недостатки
|
используется на всех этапах БЛМИ для контроля чистоты выделяемой культуры |
||||
Культивирование микроорганизмов на питательных средах
Облигатные внутриклеточные паразиты (хламидии, риккетсии, вирусы) культивируются исключительно в клеточных системах: на культурах клеток, в куриных эмбрионах, в организмах чувствительных лабораторных животных. Культивирование же бактерий (накопление микробной биомассы) осуществляется на питательных средах.
Питательная среда субстрат для выращивания бактерий в лабораторных или производственных условиях.
Требования к питательным средам. В питательных средах создают необходимые условия для роста и размножения бактерий. Питательные среды должны:
содержать все элементы, из которых строится бактериальная клетка, в такой форме, в которой микроорганизмы способны их усваивать; среды должны содержать источники C и N, минеральные соли, в ряде случаев ростовые факторы (аминокислоты, пурины, пиримидины, витамины);
быть влажными, чтобы процесс диффузии питательных веществ в клетку проходил без затруднений;
быть прозрачными (жидкие среды), чтобы можно было визуально наблюдать за ростом микроорганизмов;
быть стерильными, чтобы знать какому микробу принадлежат те или иные свойства;
быть изоосмотичными (за счет 0,85% NaCl);
иметь определённое значение pH и обладать буферными свойствами.
Большинство патогенных бактерий, адаптированных к относительно стабильному микроокружению организма человека, растут преимущественно при близких к нейтральному значению рН 6,57,6. Холерный вибрион способен расти на средах с щелочным рН 8,09,0 (щелочная пептонная вода, щелочной агар), а грибы микромицеты растут на средах с кислым рН 4,06,0 (среда Сабуро). Сапрофиты адаптированы к росту в более широком диапазоне рН 2,09,0. Величина рН среды влияет на метаболизм бактерий, воздействуя на растворимость питательных веществ. В процессе роста микроорганизмов величина рН среды может резко меняться, что требует поддержания определённого рН особенно для тех микроорганизмов, которые продуцируют кислоты, но не обладают к ним толерантностью (лактобациллы, энтеробактерии). Для этого в состав среды вводят либо несбраживаемые вещества (неорганические фосфаты, карбонат кальция или бикарбонат натрия), либо буферы (фосфатный, трис-солянокислый, цитратный и ацетатный).
Классификации питательных сред (табл. 5).
Таблица 5