Дискодиффузионный метод

Характеристика метода. Полуколичественный. Определяет группы антибиотиков, активных в отношении патогена.

Особенности метода. Используют стандартные диски диаметром 6,25 мм, представляющие собой фильтровальный картон, пропитанный антибиотиком в определенной концентрации.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов в концентрации 1,5х10⁸ КОЕ/мл, наносят ее в объеме 1 мл на чашку Петри со средой агар Мюллер-Хинтона или АГВ (толщина слоя среды 4±0,5 см). Суспензию распределяют равномерно по поверхности, избыток суспензии удаляют, поверхность среды высушивают, наносят на среду диски на расстоянии 2 см друг от друга и от края, но не более 6 на чашку Петри, инкубируют при 35⁰С 18–24 часа. Можно использовать специальный диспенсер для одновременного нанесения 6 дисков.

П

Рис. 45. Диаметр зоны задержки роста

Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма

ринцип учета. Антибиотик из диска центробежно диффундирует в среду, в месте его действия микроорганизмы погибают, образуя концентрическую зону задержки роста. В остальных участках среды микроорганизмы беспрепятственно растут.

Оценка чувствительности. Определяют диаметр зон задержки роста в мм и сравнивают со стандартными величинами зон задержки роста, на основании чего относят микроорганизмы к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным (рис. 45).

Оценка метода. Простой, нетрудоемкий, относительно дешевый, обладает высокой воспроизводимостью. Основной метод в клинических лабораториях для нетребовательных микроорганизмов.

Метод разведений в агаре

Характеристика метода. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации.

Особенности метода. Готовят 812 серийных двукратных разведений антибиотика в агаре Мюллер-Хинтона.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов в концентрации 10⁷ КОЕ/мл и инокулируют по 12 мкл (посевная доза 12х10⁴) на среды в чашках Петри с последовательными двукратными концентрациями антибиотика, инкубируют при 35⁰С 18–24 часа. Культуры могут наносить на среду в чашках Петри штампом-репликатором, что позволяет одновременно изучать до 100 культур.

Принцип учета. Микроорганизмы растут на среде, если концентрация антибиотика ниже ингибирующей и не растут  если больше.

Оценка чувствительности. Определяют МИК антибиотика для тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Оценка метода. Метод трудоемкий, требует затрат большого количества сред, посуды, времени. Основной метод регионального или национального мониторинга антибиотикорезистнтности.

Метод разведений в жидких средах

Характеристика метода. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации.

Особенности метода. Готовят 812 серийных двукратных разведений антибиотика в пробирках с бульоном Мюллер-Хинтона.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов 10⁶ КОЕ/мл, вносят суспензию в соотношении 1:1 в Мюллер-Хинтон бульон с различными концентрациями антибиотика (посевная доза 5х10⁵), инкубируют при 35⁰С 18–24 часа.

Принцип учета. Микроорганизмы растут на среде, вызывая ее помутнение, если концентрация антибиотика ниже ингибирующей, и не растут  если больше (среда прозрачна).

Оценка чувствительности. Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Оценка метода. Метод трудоемкий, требует затрат большого количества сред, посуды, времени. Основной метод регионального или национального мониторинга антиботикорезистнтности.

Е-тест (эпсилометрический метод)

Характеристика метода. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации.

Особенности метода. Используют стандартные пластиковые полоски с нанесенным на них экспоненциально убывающим градиентом концентрации антибиотика, например от 256 до 0,016 мкг/мл.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов в концентрации 10⁸ КОЕ/мл, погружают в нее стерильный тампон, равномерно штриховыми движениями распределяют суспензию по поверхности среды Мюллер-Хинтона или АГВ (рН 7,2±0,1), поверхность среды высушивают. На чашку диаметром 90 мм наносят не более 2 полосок E-теста (на чашку диаметром 150 мм  не более 6), инкубируют при 35⁰С 16–18 часов.

Принцип учета. Антибиотик из Е-теста центробежно диффундирует в среду, в месте его активного действия рост микроорганизмов подавляется и образуется эллипсоидная (каплевидная) зона задержки роста. Так как концентрация антибиотика в полоске убывает, то получается не концентрическая, а эллипсоидная зона задержки роста. Место пересечения основания эллипса со шкалой концентраций E-теста соответствует МИК антибиотика (рис. 46).

Рис. 46. Метод Е-тестов

Оценка чувствительности. Ингибиция роста микроорганизма вокруг полоски-носителя происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика выше МИК. Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Оценка метода. Простой, не трудоемкий, позволяет тестировать привередливые микроорганизмы (стрептококки, пневмококки, гемофилы, гонококки, анаэробы). Не получил широкого распространения из-за дороговизны.