Практична частина:

Мета роботи: Ознайомитися з якісними (кольоровими) реакціями на білки й амінокислоти. Для виконання роботи необхідно вивчити такі питання теорії:

Контрольні питання.

1. Визначення білків.

2. Елементарний склад білків.

3. Будова та класифікація амінокислот.

4. Фізико-хімічні властивості амінокислот.

5. Якісні реакції на амінокислоти.

Практичне значення роботи: Кольорові реакції широко використовуються для встановлення білкової природи речовини, вивчення амінокислотного складу різноманітних природних білків і пептидів, для ідентифікації індивідуальних амінокислот. Більшість із них чутливі й високоспецифічні, що дозволяє відкривати незначні кількості білків, тієї або іншої амінокислоти в гідролізатах білків, у біорідинах і тканинах організму, в лікарських засобах.

Матеріали і реактиви. Кольорові реакції на білки й амінокислоти проводять із: 1%-ний розчин яєчного білка, 10-% розчин їдкого натрію, 1 %-ний розчин сульфату міді, 0,1 %-ний розчин нінгідрина в 95 %-ному ацетоні, концентрована азотна кислота, 10 %-ний розчин ацетату свинцю, 10 %-ний розчин гідроксиду натрію, волосся, 5 %-ний розчин нітриту натрію, концентрована оцтова кислота; пробірки, піпетки, штатив для пробірок, пальник.

Дослід 1. Біуретова реакція (Піотровського) відкриває пептидний зв'язок (-СО-NH-) у білках.

Принцип методу. У лужному середовищі розчин білка при взаємодії з іонами міді набуває синьо-фіолетового кольору, а продукти його неповного гідролізу - пептони - дають рожеве забарвлення. Біуретову реакцію дають речовини, що містять не менше двох пептидних зв'язків.

Хід роботи. До 5 крапель 1%-ного розчину яєчного білка додають 5 крапель 10%-ного розчину їдкого натрію, 2 краплі 1%-ного розчину сульфату міді й усе перемішують. Вміст пробірки набуває фіолетового кольору. Не можна додавати надлишок сульфату міді, тому що синій осадок гідрату окису міді маскує характерне фіолетове забарвлення біуретового комплексу білка.

Дослід 2. Нінгідринова реакція характерна для аміногруп, що знаходяться в α-положенні і входять до складу білків, поліпептидів і вільних амінокислот.

Принцип методу. α - амінокислоти при нагріванні з нінгідрином окислюються на альдегіди, оксид вуглецю (IV) і аміак. Аміак реагує з нінгідрином з утворенням комплексу, що має фіолетово-синій колір.

Хід роботи. До 3 - 4 крапель розчину білка додають 1 - 2 краплі розчину нінгідрину і нагрівають. У пробірці з'являється рожево-фіолетове забарвлення, що із часом синішає.

Дослід 3. Ксантопротеїнова реакція (Мульдера) доводить присутність у білках ароматичних амінокислот: триптофану, фенілаланіну, тирозину.

Принцип методу. При обробці розчину білка концентрованою азотною кислотою бензольне кільце амінокислот нітрується з утворенням нітросполук, забарвлених у жовтий колір.

Хід роботи. У пробірку до 3-4 крапель розчину білка додають 1-2 краплі азотної кислоти. Пробірку обережно нагрівають і стежать за зміною забарвлення.

Дослід 4. Реакція Фоля на амінокислоти, що містять сірку

Принцип методу. При нагріванні білка з лугом сірковмісні амінокислоти відщеплюють сірку у виді сірководню, що з ацетатом свинцю дає сірчистий свинець чорного кольору.

Хід роботи. В одну пробірку поміщають трохи волосся або шматочок нігтя, а в іншу - 5 крапель розчину білка. У кожну з пробірок додають по 1 краплі розчину (CH3COO)₂Pb, NaOH і нагрівають до кипіння.

Дослід 5. Визначення аміногрупи - NН₂ в амінокислотах і білках (реакція Ван-Слайка).

Принцип методу. Азотиста кислота розщеплює амінокислоти із звільненням газоподібного азоту.

Хід роботи. У пробірку наливають 3 - 5 мл розчину білка або амінокислоти, додають рівний об’єм розчину NaNО₂ і декілька крапель концентрованої оцтової кислоти. При цьому утворюється азотиста кислота, що вступає в реакцію з аміногрупою. Виділяються бульбашки газу - азоту.

Результати дослідів заносять у таблицю такої форми:

№ п/п

Назва реакції

Застосовувані реактиви

Поява фарбування

Що відкриває дана реакція

Висновки:

Заняття № 2.

Тема: ВЛАСТИВОСТІ білків