Практична частина:

Мета роботи: Навчитися визначати концентрацію глюкози в сироватці крові за допомогою ортотолуїдинового реактиву. Для виконання роботи необхідно вивчити такі питання теорії:

Контрольні питання

1. Методи визначення концентрації глюкози.

2. Постійність концентрації глюкози і механізми, що забезпечують цю постійність.

3. Практичне використання визначення концентрації глюкози.

4. Перетравлення вуглеводів у шлунково-кишковому тракті.

5. Нервова й ендокринна регуляція вуглеводного обміну.

6. Синтез глікогену. Розщеплення глікогену.

7. Гліколіз. Реакції субстратного фосфорилювання.

8. Цикл трикарбонових кислот (цикл Кребса).

9. Дихальний ланцюг. Характеристика і структура переносників дихального ланцюга.

10. Гліконеогенез

11. Пентозофосфатний шлях розпаду вуглеводів і його біологічна роль.

12. Енергетичні ефекти окиснення глюкози.

Практичне значення роботи: Найчастіше зумовленим показником вуглеводного обміну з діагностичними цілями є вміст глюкози в крові і сечі. Підвищення рівня глюкози (гіперглікемія) є досить частим симптомом при різноманітних захворюваннях, насамперед пов'язаних із ураженням ендокринної системи (цукровий діабет, пухлини кори наднирників, гіперфункції щитовидної залози, захворювання печінки, органічні ураження ЦНС).

Принцип методу: глюкоза при нагріванні з ортотолуїдином у розчині трихлороцтової кислоти (ТХУ) дає синьо-зелене забарвлення, інтенсивність якого прямо пропорційна концентрації глюкози в крові.

Матеріали і реактиви: ортотолуїдиновий реактив, 3 %-ний розчин трихлороцтової кислоти, основний стандартний розчин глюкози - 27,80 ммоль/л, центрифуга, центрифужні пробірки, штатив із пробірками, водяна лазня, фотоелектроколориметр, кювети із шириною прошарку 10 мм.

Хід роботи: У дві центрифужні пробірки наливають по 0,9 мл розчину трихлороцтової кислоти, потім в одну з них вносять 0,1 мл сироватки крові, а в другу - 0,1 мл стандартного розчину глюкози, розведеного перед вжитком у 5 разів із концентрацією 5,55 ммоль/л. Вміст пробірок збовтують і центрифугують при 3000 об/хв 10 хвилин. У 2 пробірки відбирають по 0,5 мл надосадочної рідини і додають по 4,5 мл ортотолуїдинового реактиву. Пробірки поміщають у киплячу водяну лазню на 5 хвилин, охолоджують їх під струменем холодної води і вимірюють на ФЕК оптичну щільність проб у кюветах проти контрольної проби з червоним світлофільтром (λ = 600 - 650 нм).

При проведенні контрольної проби до 4,5 мл ортотолуїдинового реактиву доливають 0,5 мл трихлороцтової кислоти. Далі пробу обробляють так само, як і дослідну.

Розраховують глюкозу за формулою:

де Соп - конц. глюкози в дослідній пробі (ммоль/л);

Сст - конц. глюкози в стандартній пробі, близька до фізіологічної (5,55 ммоль/л);

Еоп - оптична щільність дослідної проби;

Ест - оптична щільність розчину стандарту.

Нормальний вміст глюкози в сироватці крові коливається 3,33 - 4,99 ммоль/л.

Результат і висновок.

Заняття № 12.

Тема: ОБМІН ВУГЛЕВОДІВ (СЕМІНАР)

Питання до семінарського заняття:

Скласти схему метаболізму вуглеводів на окремому аркуші.

1. Загальна характеристика вуглеводів. Значення для живих організмів.

2. Класифікація вуглеводів.

3. Характеристика моносахаридів. Представники та їх будова. Оксикарбонільні і циклічні форми. Явище таутомерії і мутаротації. Хімічні властивості.

4. Характеристика дисахаридів. Представники та їх будова. Фізичні й хімічні властивості.

5. Характеристика полісахаридів (крохмаль, целюлоза, гепарин).

6. Методи визначення концентрації глюкози.

7. Постійність концентрацій глюкози і механізми, що забезпечують цю постійність.

8. Практичне використання методу визначення концентрації глюкози.

9. Перетравлення вуглеводів у шлунково-кишковому тракті.

10. Усмоктування моносахаридів.

11. Нервова й ендокринна регуляція вуглеводного обміну.

12. Синтез глікогену. Розщеплення глікогену (глікогеноліз).

13. Анаеробна фаза окислювання вуглеводів. Гліколіз. Реакція субстратного фосфорилювання. Глікозил-трансферазні реакції.

14. Аеробне окиснення вуглеводів.

15. Дихальний ланцюг. Характеристика і структура переносників дихального ланцюга.

16. Гліконеогенез.

17. Пентозофосфатний цикл.

18. Енергетичні ефекти окиснення глюкози.

Заняття № 13.

Тема: ПЕРЕТРАВЛЕННЯ БІЛКІВ У ШЛУНКОВО-КИШКОВОМУ ТРАКТІ