Практична частина

Мета роботи: засвоїти метод визначення концентрації холестеролу в сироватці крові. Для виконання роботи необхідно вивчити такі питання теорії:

Контрольні питання

1. Умови, необхідні для перетравлення жиру. Перетравлення в шлунково-кишковому тракті.

2. Роль жовчі в перетравленні жирів.

3. Усмоктування і транспорт ліпідів.

4. Розщеплення та утворення триацилгліцеролів і фосфоліпідів.

5. β-Окиснення жирних кислот.

6. Окиснення гліцерину.

7. Синтез жирних кислот.

8. Біологічне значення холестеролу.

9. Біосинтез і транспорт холестеролу і його регуляція.

10. Принцип методу визначення холестеролу в крові.

11. Практичне використання цього методу.

Практичне значення роботи: За визначенням концентрації холестеролу в сироватці крові судять про ліпідний обмін. При порушенні ліпідного обміну холестерол може накопичуватися в крові. Збільшення вмісту холестеролу спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, вроджених порушеннях обміну, захворюваннях печінки.

Принцип методу: Холестерол при наявності оцтового ангідриду й суміші оцтової і сірчаної кислот дає зелене забарвлення, інтенсивність якого визначають на ФЕК.

Матеріали і реактиви: Сироватка крові, стандартний розчин холестеролу (180 мг холестеролу розчиняють у 100 мл етилового спирту), реактив А - суміш крижаної оцтової кислоти (30 мл), оцтового ангідриду (150 мл) і концентрованої сірчаної кислоти (30 мл) (1:5:1). Готувати реактив необхідно при постійному охолодженні. Сірчану кислоту додають в останню чергу, дуже повільно, постійно помішуючи. Реактив зберігають у холодильнику в посуді з темного скла з притертим корком.

Устаткування: Штатив із пробірками, піпетки, мікропіпетки, циліндри, колба, термостат (37^о С), ФЕК, міліметровий папір.

Хід роботи: У пробірку вносять 0,1 мл сироватки крові, додають швидко 2,1 мл реактиву А, негайно перемішують, 10 разів струшують і поміщають у термостат (37^о С). Через 20 хвилин суміш у пробірці набуває зеленого кольору. Для визначення молярної концентрації холестерола в досліджуваній пробі за оптичною щільністю необхідно побудувати калібрований графік. Знайдену концентрацію холестеролу множать на 1000 (кількість сироватки - 0,1 мл). Коефіцієнт перерахунку в одиниці СІ (ммоль/л) дорівнює - 0,0258.

Для побудови каліброваного графіка слід зі стандартного розчину холестеролу (у 1 мл утримується 1,8 мл холестерола) взяти по 0,05, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25 мл і додати реактив А до обсягу 2,2 мл у кожній пробірці. При цьому в пробах буде утримуватися така кількість холестеролу: 0,09, 0,18, 0,27, 0,36, 0,45 мг відповідно. Після додавання реактиву А пробірки енергійно струшують і поміщають у термостат при t 37^о С. Через 20 хвилин фотоколориметрують. Будують графік, де по осі ординат - екстинція, а по осі абсцис - відомі концентрації холестеролу.

Вміст загального холестеролу в сироватці крові людини знаходиться в межах 2,97 - 8,79 ммоль/л.

Зробити висновки.

Заняття № 17.

Тема: ОБМІН ліпідів (СЕМІНАР). РІШЕННЯ БІОХІМІЧНИХ ЗАДАЧ за ВЗАЄМОЗВ'ЯЗКом МЕТАБОЛІЗМУ БІЛКІВ, ВУГЛЕВОДІВ І лІпІдІв