2007_-Byelorussian_Pharmacopoeia_Volume_2

Pall., R. fedtschenkoana Regel, R. kokanica (Regel) Regel ex Juz., R. micrantha Smith, R. psammophila Chrshan., R. rugosa Thunb., R. tomentosa

Smith, R. zangezura P. Jarosch. и другие виды.

Содержат не менее 0,2 % аскорбиновой кислоты (C6H8O6; М.м. 176,1) в пересчете на сухое сырье или, если сырье используют для приготовления холосаса, каротолина и сиропов, не менее 2,6 % свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту (С4H6O5; М.м. 134,1) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Цельные,

очищенные от чашелистиков и плодоножек ложные плоды разнообразной формы: от шаровидной, яйцевидной или овальной до сильно вытянутой веретеновидной; длина плодов от 0,7 см до 3 см, диаметр — 0,6—1,7 см. На верхушке плода имеется небольшое круглое отверстие или пятиугольная площадка. Плоды состоят из разросшегося мясистого, при созревании сочного цветоложа (гипантия) и заключенных в его полости многочисленных плодиков-орешков. Стенки высушенных плодов твердые, хрупкие, наружная поверхность блестящая, реже матовая, более или менее морщинистая. Внутри плоды обильно выстланы длинными, очень жесткими щетинистыми волосками. Орешки мелкие, продолговатые, со слабо выраженными гранями. Цвет плодов от оранжево-красного до коричневато-красного, орешки светло-желтые, иногда коричневатые. Запах отсутствует.

В. Микроскопия (#2.8.3). Исследуют из-

мельченное сырье (355). Цвет оранжевожелтый. Видны: обрывки наружного эпидермиса гипантия (плода) в виде светло-желтых пластов, состоящих из многоугольных клеток с прямыми неодинаково утолщенными, местами четковидно-утолщенными стенками и редкими устьицами; обрывки мякоти плода, состоящей из тонкостенных паренхимных клеток, содержащих оранжево-красные глыбки каротиноидов и многочисленные друзы оксалата кальция; фрагменты околоплодника орешка, состоящие из групп или пластов, реже одиночных каменистых клеток с сильно утолщенными пористыми оболочками; многочисленные крупные одноклеточные волоски­ двух типов (или их обломки) — очень крупные прямые с толстой стенкой и узкой полостью и более мелкие, слегка извилистые, с широкой полостью; обрывки проводящих пучков со спиральными сосудами.

С. Тонкослойная хроматография

(2.2.27).

Испытуемый раствор. К 5 г измельченного сырья (355) прибавляют 25 мл 96 % спирта Р. Встряхивают в течение 30 мин и фильтруют.

Раствор сравнения. 10 мг аскорбиновой кислоты Р растворяют в 5 мл спирта (60 %, об/об) Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем сили-

кагеля F254 Р.

Подвижная фаза: кислота уксусная Р — ацетон Р — метанол Р — толуол Р (5:5:20:70, об/об/об/об).

Наносимый объем пробы: 20 мкл испытуе-

мого раствора и 2 мкл раствора сравнения в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление А: просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм.

Результаты А: на хроматограмме испытуемогораствораобнаруживаетсязонапоглощения, соответствующая по расположению основной зоне на хроматограмме раствора сравнения.

Проявление В: пластинку опрыскивают раст­ вором 0,2 г/л дихлорфенолиндофенола натрие-

вой соли Р в 96 % спирте Р. Просматривают при дневном свете.

Результаты В: на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается зона белого цвета на розовом фоне, соответствующая по расположению и цвету основной зоне на хроматограмме раствора сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора также обнаруживаются интенсивная зона оранжево-желтого цвета, расположенная около фронта подвижной фазы, и зона желтого цвета, расположенная в верхней трети хроматограммы (каротиноиды).

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимыепримеси(#2.8.2).Несырьевые части растения: другие части растения (кусочки веточек, чашелистиков и плодоножек) — не более 2 %; почерневшие, пригоревшие, поврежденные вредителями и болезнями плоды — не более 1 %; частицы плодов, в том числе орешки, проходящие сквозь сито (2400), — не более 3 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32).

Не более 15,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 7,0 %.

Сырье, используемое для получения холосаса, каротолина и сиропов, должно отвечать следующим требованиям.

Допустимыепримеси(#2.8.2).Несырьевые части растения: другие части растения (кусочки веточек, чашелистиков и плодоножек) — не более 2 %; почерневшие, пригоревшие, поврежденные вредителями и болезнями плоды — не более 3 %; частицы плодов, в том числе орешки, проходящие сквозь сито (2400) — не более 3 %; недозрелые плоды (от зеленого до желтого цвета) — не более 5 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более

0,5 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 15,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 7,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение содержания аскорбиновой кислоты. 20,0 г измельченного сырья (2000) растираютвступкес5гстеклянногопорошка,постепенно прибавляя 300 мл воды Р, и выдерживают

втечение 10 мин, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 15 мл фильтрата. 1,0 мл полученного раствора помещают в коническую колбу, прибавляют 1 мл раствора 20 г/л кислоты хлористоводородной Р, 13 мл воды Р и титруют из микробюретки тит­ рованным раст­вором дихлорфенолиндофенола

Рдо появления розовой окраски, не исчезающей

втечение 30—60 с. Титрование проводят в течение не более 2 мин. В случае интенсивного окрашивания фильтрата или высокого содержания в нем аскорбиновой кислоты (расход титранта более 2 мл) исходное извлечение разводят водой

Рв два раза или более.

1 мл титрованного раствора дихлорфено-

линдофенола Р соответствует 0,0001 г аскорбиновой кислоты.

Определение содержания свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту.25,0гизмельченногосырья(1400)помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 200 мл воды Р и нагревают на водяной бане в течение 2 ч. Охлаждают, количественно переносят

вмерную колбу вместимостью 250 мл и доводят водой Р до объема 250,0 мл. 10,0 мл полученного раствора помещают в колбу вместимостью 500 мл, прибавляют 200—300 мл свежепрокипя-

ченной воды Р, 1 мл раствора фенолфталеина Р1, 1,5 мл раствора метиленового синего Р и титруют 0,1 М раст­вором натрия гидроксида до появления в пене фиолетово-красной окраски.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида

соот­ветствует 0,0067 г яблочной кислоты.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Эвкалипта прутовидного листья

EucaIypti viminalis foIia

EUCALYPTUS VIMINALIS LEAF*

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные поздней осенью, зимой или ранней весной и высушенные листья EucaIyptus viminaIis LabiII.

Содержат:

––цельное сырье: не менее 10 мл/кг эфирного масла в пересчете на сухое сырье;

––измельченное сырье: не менее 8 мл/кг эфирного масла в пересчете на сухое сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Смесь двух типов листьев: листья старых ветвей — черешковые от узколанцентных до серповидно изогнутых, остроконечные, плотные, длиной от 4 см до 27 см, шириной от 0,5 см до 5 см; листья молодых ветвей — сидячие с округлым основанием или с короткими черешками, удлиненнояйцевидной формы, на верхушке заостренные, длиной от 3,5 см до 11 см, шириной от 0,7 см до 4 см. Встречаются листья, имеющие переходящую форму от удлиненно-яйцевидной до ланцетной. Листья голые с цельным, ровным или волнистым краем с многочисленными точками, просвечивающимися в проходящем ярком свете (вместилища с эфирным маслом). Цвет листьев от светло-зеленого до серовато-зеленого, иногда с фиолетовым оттенком и слабым сизоватым налетом. Запах ароматный, усиливающийся при растирании.

В. Микроскопия (#2.8.3). Клетки эпидермиса листьев как старых, так и молодых ветвей с поверхности многоугольные, в их центре видны светло-серые пятна (бугорки). На поперечном срезе листа клетки эпидермиса более или менее равносторонние с сильно утолщенными наружными стенками и толстым слоем кутикулы, выступающей в виде бугорков; устьица погружены в мезофилл листа. Листья изолатеральные. В листьях молодых ветвей палисадная ткань состоит из двух, реже трех рядов клеток; губчатая ткань и межклетники хорошо выражены. В листьях старых ветвей палисадная ткань представлена тремя, реже четырьмя рядами клеток, клетки губчатой ткани неясно выражены. Главная жилка листьев как старых, так и молодых ветвей имеет кристаллоносную обкладку, встречаются друзы оксалата кальция. Эфиромасличные вместилища крупные, округлой или овальной формы, погружены в мезофилл и занимают часто более половины толщины листа; внутри их заметны один-два слоя выделительных клеток.

С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. К 0,5 г свежеизмель-

ченного сырья (355) прибавляют 5 мл толуола Р, встряхивают в течение 2-3 мин и фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного Р.

Раствор сравнения. 50 мкл цинеола Р раст-

воряют в толуоле Р и разводят до объема 5 мл этим же растворителем.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.

Подвижная фаза: этилацетат Р — толуол Р (10:90, об/об).

Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку опрыскивают раст­ вором анисового альдегида Р и нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин. Просматривают при дневном свете.

Результаты: на хроматограмме раствора сравнения в центральной части обнаруживается зона цинеола. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается основная зона, соответствующая по расположению и цвету зоне цинеола на хроматограмме раствора сравнения; возле линии фронта подвижной фазы обнаруживается интенсивная зона фиолетового цвета (углеводороды); могут обнаруживаться и другие более слабые зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимыепримеси(#2.8.2).Несырьевые части растения: другие части растения (веточки, бутоны, плоды) — не более 2 %; почерневшие и побуревшие листья — не более 3 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 5,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определяют содержание эфирного масла (2.8.12, метод В или С). 10,0 г измельченного сырья (1400) помещают в колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 400 мл воды Р в качестве жидкости для перегонки. Время перегонки 1 ч.

Хранение

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Эвкалипта шаровидного листья

EucaIypti globuli foIia

EUCALYPTUS LEAF

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Цельные или измельченные высушенные листья старых ветвей EucaIyptus globulus LabiII.

Содержат:

––цельное сырье: не менее 20 мл/кг эфирного масла в пересчете на безводное сырье;

––измельченное сырье: не менее 15 мл/кг эфирного масла в пересчете на безводное сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Листья главным образом серовато-зеленого цвета, относительно толстые, вытянутые, эллиптические и серповидно изогнутые, длиной обычно до 25 см, шириной до 5 см. Черешок скрученный, сильно морщинистый, длиной от 2 см до 3 см (реже до 5 см). Листья жесткие, голые,

сжелтовато-зеленой средней жилкой. Боковые жилки сходятся у края пластинки. Край листовой пластинки ровный, немного утолщенный. На обеих поверхностях видны мелкие разбросанные бородавчатые темно-коричневые точки. В проходящем ярком свете просвечиваются вместилища с эфирным маслом. Запах ароматный.

В. Микроскопия (#2.8.3). Исследуют из-

мельченноесырье(355).Цветсеровато-зеленый. Видны: фрагменты гладкой листовой пластинки

смаленькими толстостенными клетками эпидермы с толстой кутикулой, многочисленными устьицами аномоцитного типа диаметром более 80 мкм; редкими группами коричневых клеток, коричневато-черных в центре, диаметром 300 мкм; фрагменты изобилатерального мезофилла с двумя или тремя слоями палисадной паренхимы на каждой стороне, с несколькими слоями губчатого мезофилла, клетки которого вытянуты и имеют ту же ориентацию, что и палисадные клетки, и с призмами и друзами оксалата кальция; фрагменты мезофилла, содержащие крупные схизогенные масляные вместилища.

С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. К 0,5 г свежеизмель-

ченного сырья (355) прибавляют 5 мл толуола Р, встряхивают в течение 2—3 мин и фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного Р.

Раствор сравнения. 50 мкл цинеола Р раст-

воряют в толуоле Р и разводят до объема 5 мл этим же растворителем.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.

Подвижная фаза: этилацетат Р — толуол Р (10:90, об/об).

Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку опрыскивают раст­ вором анисового альдегида Р и нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин. Просматривают при дневном свете.

Результаты: на хроматограмме раствора сравнения в центральной части обнаруживается зона цинеола. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается основная зона, соответствующая по расположению и цвету зоне цинеола на хроматограмме раствора сравнения; возле линии фронта подвижной фазы обнару-

живается интенсивная зона фиолетового цвета (углеводороды); могут обнаруживаться и другие более слабые зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырье-

вые части растения: веточки — не более 2 %; почерневшие и побуревшие листья — не более 3 %. Сумма других допустимых примесей: не более 2 %. Сырье не должно содержать сидячих листьев молодых ветвей сердцевидной или овальной формы, с многочисленными железками на обеих сторонах, видимыми в виде точек в проходящем ярком свете. Определение проводят из 30 г испытуемого сырья.

Вода (2.2.13). Не более 100 мл/кг. Определение проводят из 20,0 г измельченного сырья (355).

Общая зола (2.4.16). Не более 6,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определяют содержание эфирного масла (2.8.12, метод А). 10,0 г испытуемого сырья, измельченного непосредственно перед испытанием, помещают в круглодонную колбу вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл воды Р и 100 мл глицерина Р. В градуированную трубку помещают 0,5 мл ксилола Р. Перегонку проводят со скоростью 2—3 мл/мин в течение 2 ч.

Хранение

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Элеутерококка корневища и корни

Eleutherococci rhizomata et radices

ELEUTHEROCOCCUS

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные осенью, тщательно очищенные от земли, разрубленные на куски и высушенные корневища и корни кустарника Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim. Содержат не менее 0,08 % суммы элеутерозида В (М.м. 372,4) и элеутерозида Е (М.м. 742,7) или не менее 0,30 % суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Куски кор-

невищ и корней, цельные или расщепленные вдоль,длинойдо8см,толщинойдо4см,деревянистые, твердые, прямые или изогнутые, иногда разветвленные. Кора тонкая, плотно прилегает к древесине. Корневища с поверхности гладкие или слабо продольно-морщинистые с пазушными почками и следами отмерших стеблей и обло-

манных корней. Поверхность корней более гладкая со светлыми поперечными бугорками. Излом длинноволокнистый, светло-желтого цвета. Корневища с поверхности светло-коричневого цвета, корни — более темные. Запах слабый.

В. Микроскопия (#2.8.3). На поперечном срезе корневищ и корней видны: секреторные ходы с 4-5 эпителиальными клетками, заполненные коричневым содержимым; лубяные волокна с толстыми одревесневшими стенками, располагаются группами или одиночно; в клетках лубяной паренхимы многочисленные друзы оксалата кальция. Крахмал заполняет только клетки паренхимы, окружающие секреторные ходы, и клетки сердцевинных лучей. В сосудах встречаются тиллы. Сердцевинные лучи многорядные.

C. Тонкослойная хроматография

(2.2.27).

Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченно-

го сырья (355) прибавляют 10 мл спирта (50 %, об/об) Р и кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. Охлаждают, фильтруют. Фильтрат выпаривают досуха на водяной бане, остаток растворяют в 2,5 мл смеси из воды Р и спирта (50 %, об/об) Р (5:20, об/об) и фильтруют.

Раствор сравнения. 2,0 мг эскулина Р и

2,0 мг каталпола Р растворяют в 20 мл смеси из

воды Р и спирта (50 %, об/об) Р (2:8, об/об). Пластинка: ТСХ пластинка со слоем сили-

кагеля Р.

Подвижная фаза: вода Р — метанол Р — метиленхлорид Р (4:30:70, об/об/об).

Наносимый объем пробы: по 20 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление А: просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

Результаты А: на хроматограмме раствора сравнения в верхней части обнаруживается флуоресцирующая зона синего цвета (эскулин).

Проявление В: пластинку опрыскивают

раствором­ анисового альдегида Р, нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин и просматривают при дневном свете.

Результаты В: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются и другие слабые зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырье-

вые части растения: почерневшие и побуревшие в изломе корневища и корни — не более 3 %; другие части растения (остатки стеблей) — не более 1,5 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Верх хроматографической пластинки

Общая зола (2.4.16). Не более 8,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение содержания суммы элеутерозида В и элеутерозида Е. Жидкост-

ная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор. 0,500 г измельчен-

ного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл смеси из 96 % спирта Р и воды Р (50:50, об/об)

инагревают в водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют через пористый стеклянный фильтр. Остаток с фильтра переносят в ту же круглодонную колбу вместимостью 100 мл и повторяют экстракцию дважды. Фильтраты собирают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл и упаривают при пониженном давлении до объема около 10 мл. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 20 мл, используя смесь из 96 % спирта Р и воды Р (50:50, об/об),

идоводят до объема 20,0 мл этим же растворителем. Фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения (а). 10 мг феруловой кислоты Р растворяют в смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 20,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b). 10 мг кофейной кислоты Р растворяют в смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 20,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (с). 1 мл раствора срав-

нения (а) разводят смесью из метанола Р и

воды Р (50:50, об/об) до объема 25,0 мл. Филь-

труют через нейлоновый фильтр с размером пор

0,45 мкм.

Раствор сравнения (d). К 1 мл раствора сравнения (а) прибавляют 1 мл раствора сравнения (b) и доводят смесью из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) до объема 25,0 мл. Филь-

труют через нейлоновый фильтр с размером пор

0,45 мкм.

Условия хроматографирования:

––предколонка длиной 4 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с

размером частиц 5 мкм;

––колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р с раз-

мером частиц 5 мкм;

––подвижная фаза:

––подвижная фаза А: кислота фосфор-

ная Р — вода Р (0,5:99,5, об/об);

––подвижная фаза В: ацетонитрил для хроматографии Р;

––скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

––спектрофотометрический детектор,

длина волны 220 нм;

––объем вводимой пробы: по 20 мкл испыту-

емого раствора и растворов сравнения (c) и (d).

Времена удерживания: элеутерозид В — около 10 мин; элеутерозид Е — около 22 мин. Отмечают пики элеутерозида В и элеутерозида Е, используя спектры поглощения, приведенные на рисунке 1 и рисунке 2.

Пригодность хроматографической систе-

мы: раствор сравнения (d):

––разрешение между пиками кофейной кислоты и феруловой кислоты не менее 15.

Содержание суммы элеутерозида В и элеутерозида Е в процентах рассчитывают по формуле:

где:

SB — площадь пика элеутерозида В на хроматограмме испытуемого раствора;

SЕ — площадь пика элеутерозида Е на хроматограмме испытуемого раствора;

Рисунок 1. УФ-спектр элеутерозида В.

SR — площадь пика феруловой кислоты на хроматограмме раствора сравнения (с);

С — концентрация феруловой кислоты в растворе сравнения (с), мкг/мл;

m — масса навески испытуемого сырья, мг.

Определение содержания суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В.

1,000 г измельченного сырья (1400) помещают

вконическую колбу вместимостью 100 мл и экстрагируют последовательно 20 мл спирта (70 %,

об/об) Р, 20 мл 96 % спирта Р и 20 мл смеси из хлороформа Р и 96 % спирта Р (5:1, об/об), при постоянном перемешивании при температуре не выше 50°С в течение 1 ч. Извлечения объединяют, фильтруют через бумажный фильтр в кругло­ донную колбу и выпаривают досуха в вакууме при температуре 40°С. К остатку прибавляют

10 мл воды Р и 10 мл тетрахлорида углерода Р, перемешивают и количественно переносят

вделительную воронку, используя тетрахлорид углерода Р. Встряхивают и отбрасывают нижний, органический слой. Водный слой встря-

хивают дважды с тетрахлоридом углерода Р

Рисунок 2. УФ-спектр элеутерозида Е.

порциями по 10 мл, отбрасывая органический слой. Затем водный слой встряхивают 5 раз со смесью из хлороформа Р и 96 % спирта Р (5:1,

об/об) порциями по 20 мл, 15 мл, 15 мл, 10 мл и 10 мл. Органические извлечения объединяют и фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного Р в мерную колбу вме-

стимостью 100 мл и доводят смесью из хлоро-

форма Р и 96 % спирта Р (5:1, об/об) до объема

100,0 мл. 20,0 мл полученного раствора разво-

дят смесью из хлороформа Р и 96 % спирта Р

(5:1, об/об) до объема 50,0 мл.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученного раствора при 278 нм, используя смесь

из хлороформа Р и 96 % спирта Р (5:1, об/об)

в качестве компенсационного раствора. Содержание суммы элеутерозидов в пере-

счете на элеутерозид В в процентах рассчитывают по формуле:

А×250×1,42 , m×302

где:

302 — удельный показатель поглощения элеутерозида В;

А — оптическая плотность раствора; 1,42 — коэффициент пересчета на сумму

элеутерозидов, учитывающий молекулярные массы элеутерозидов В, В1, Е и соотношение их содержания;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Эхинацеи пурпурной трава

Echinaceae purpureae herba

PURPLE CONEFLOWER HERB

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранная в фазу цветения, цельная или резаная и высушенная трава многолетнего травянистого растения Echinacea purpurea (L.) ­Moench. Содержит не менее 0,1 % суммы кафта-

ровой кислоты (С13Н12О9; М.м. 312,2) и цикориевой кислоты (С22Н18О12; М.м. 474,3) в пересчете

на сухое сырье или не менее 2,1 % суммы производных оксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту (С22Н18О12; М.м. 474,3) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А.Внешниепризнаки(#2.8.3).Кускистеблей­ ,

листьев, цельные и частично разрушенные цветочные корзинки, цветки, бутоны, реже незрелые плоды.Стеблицилиндрические,ребристые,голые или(редко)жесткоопущенные,диаметромдо1см. Листья черешковые, продолговато-яйцевидные, яйцевидно-ланцетные или ланцетные, остроконечные, неравнокрупнозубчатые, реже цельнокрайние, с 3—5 продольными жилками, жесткие, шероховатые от короткощетинистого опушения. Цветочные корзинки с выпуклым, полым, густоусаженным прицветниками цветоложем. Обертка блюдцевидная, трехрядная; листочки обертки черепитчато расположенные, ланцетные, остроконечные, отогнутые, опущенные с внешней стороны, голые по краям. Прицветники узколанцетные, с шиловидным окончанием, превышающие по длине трубчатые цветки. Краевые цветки язычковые, длиной до 6 см, пестичные, бесплодные,

сдвух-трехзубчатым отгибом, снаружи опушенным. Срединные цветки трубчатые, обоеполые,

спятизубчатым венчиком. Плоды — семянки обратнопирамидальные, четырехгранные, к основанию суженные, с хохолком в виде короны с неравномерными зубчиками. Цвет стеблей зеленый, желтовато-зеленый, иногда с розовато-красными или фиолетово-красными пятнами; листьев — зеленый; листочков обертки — серовато-зеленый или зеленый; цветков — розовато-красный или фиолетово-красный; плодов — зеленый или зеленовато-коричневый. Запах слабый.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просматриваниилистасповерхностивидныклеткиэпидермиса с извилистыми стенками. Устьица овальные, окружены 2—6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип); расположены на обеих сторонах листа, на нижней их больше. Над жилками клетки эпидермиса имеют прямые стенки и вытянуты вдоль них. По жилкам и по краю листа встречаются простые длинные одноклеточные волоски

ипростые 2—4-клеточные остроконечные волоски со спавшейся конечной клеткой, часто опадающей; простые 1—4-клеточные волоски, иногда с заметным утолщением стенок; изредка встречаются железистые волоски, состоящие из 1—2-клеточной ножки и одноклеточной овальной головки, заполненной желтовато-коричневым содержимым. Клетки у основания волосков расположены радиально и образуют розетку. Клетки эпидермиса язычкового и трубчатого цветков на зубчиках сосочковидные, на остальных частях цветков со слабоизвилистыми стенками, над жилками — с прямыми стенками. Устьица мелкие, овальные, погруженные, окружены 4—6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип). Простые 2—3-клеточные волоски с острым концом расположены преимущественно по жилкам. Железки состоят из 10—12 выделительных клеток, расположенных в два ряда.

С. Тонкослойная хроматография

(2.2.27).

Испытуемый раствор. К 1,0 г измельчен-

ного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р

иобрабатывают ультразвуком в течение 5 мин. Центрифугируют и собирают надосадочную жидкость.

Раствор сравнения. 0,5 мг кофейной кислоты Р и 0,5 мг хлорогеновой кислоты Р растворяют в 5,0 мл метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (5—40 мкм) [или ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (2—10 мкм)].

Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (3:3:9:15, об/об/об/об).

Наносимый объем пробы: 25 мкл [5 мкл] ис-

пытуемого раствора и 10 мкл [2 мкл] раствора сравнения в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см

[5 см] от линии старта.

Высушивание: в токе холодного воздуха

втечение 10 мин, затем при температуре 100°С

втечение 2 мин.

Проявление: горячую пластинку опрыски-

вают раст­вором 5 г/л аминоэтилового эфира дифенилборной кислоты Р в этилацетате Р.

Через 30 мин пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться другие слабые флуоресцирующие зоны синего цвета.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырье-

вые части растения: стебли — не более 55 %. Органические примеси: не более 2,5 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 13,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 12,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение содержания суммы кафтаровой кислоты и цикориевой кислоты.

Жидкостная хроматография (2.2.29).

Испытуемый раствор. 0,500 г измельчен-

ного сырья (355) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта (70 %, об/об) Р, обрабатывают ультразвуком в течение 15 мин и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем. Перемешивают и выдерживают в течение нескольких минут до оседания частиц.

Раствор сравнения. 10,0 мг ФСО хлорогеновой кислоты и 10,0 мг кофейной кислоты Р

растворяют в спирте (70 %, об/об) Р, обрабатывают ультразвуком в течение 15 мин и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем. 4,0 мл полученного раствора разводят спиртом (70 %, об/об) Р до объема 100,0 мл.

Условия хроматографирования:

––колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р с раз-

мером частиц 5 мкм;

––температура: 35°С;

––подвижная фаза:

––подвижная фаза А: кислота фосфор-

ная Р — вода Р (1:999, об/об);

––подвижная фаза В: ацетонитрил Р;

––скорость подвижной фазы: 1,5 мл/мин;

––спектрофотометрический детектор,

длина волны 330 нм;

––объем вводимой пробы: 10 мкл.

Относительные времена удерживания

(по отношению к хлорогеновой кислоте, время удерживания около 7 мин): кафтаровая кислота — около 0,8; кофейная кислота — около 1,5; цинарин — около 1,6; эхинакозид — около 1,7; цикориевая кислота — около 2,3.

Пригодность хроматографической систе-

мы: раствор сравнения:

––разрешение между пиками кофейной кислоты и хлорогеновой кислоты не менее 5.

На хроматограмме раствора сравнения отмечают пики кофейной кислоты и хлорогеновой кислоты. На хроматограмме испытуемого раствора отмечают пики кафтаровой кислоты и цикориевой кислоты, используя хроматограмму на рисунке 1.

Содержание кафтаровой кислоты в процентах рассчитывают по формуле:

S1 ×С2 ×100×0,881

S2 ×C1

Содержание цикориевой кислоты в процентах рассчитывают по формуле:

S3 ×С2 ×100×0,695 ,

S2 ×C1

где:

S1 — площадь пика кафтаровой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S2 — площадь пика хлорогеновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения;

S3 — площадь пика цикориевой кислоты на хроматограмме раствора сравнения; мг/млС;1 — концентрация испытуемого раствора,

С2 — концентрация хлорогеновой кислоты в растворе сравнения;

0,695 — коэффициент пересчета, учитывающий разную чувствительность детектора;

0,881 — коэффициент пересчета между кафтаровой кислотой и хлорогеновой кислотой.

Определение содержания суммы производных оксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту. 1,000 г измельченно-

го сырья (500) помещают в колбу со шлифом вместимостью 25 мл, прибавляют 0,1 г кислоты щавелевой Р, вносят магнитный стержень с полимерным покрытием и прибавляют 10,0 мл спирта (95 %, об/об) Р. Колбу с содержимым закрывают пробкой и взвешивают с точностью до 0,01 г. Нагревают с обратным холодильником при слабом кипении в течение 45 мин при постоянном перемешивании. Охлаждают, закрывают пробкой, взвешивают и, при необходимости, доводят спиртом (95 %, об/об) Р до первоначальной массы и перемешивают. Содержимое колбы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Собирают надосадочную жидкость.

На линию старта листа фильтровальной бумаги размером 15×15 см наносят двумя полосами длиной 3 см по 20 мкл полученного раствора. После высыхания пятен отмечают их границы

графитовым карандашом и хроматографируют восходящим способом (2.2.26), в качестве подвижной фазы используют хлороформ Р. Когда фронт подвижной фазы пройдет 5 см от линии старта, бумагу вынимают из камеры и высушивают на воздухе до удаления запаха хлороформа. Отмеченные участки стартовых пятен вырезают, помещают в колбы вместимостью 25 мл, приливают в каждую по 10,0 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и встряхивают в течение 30 мин.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученных растворов при 328 нм, используя 0,1 М

раствор кислоты хлористоводородной в каче-

стве компенсационного раствора. Используют среднее значение оптической плотности полученных растворов.

Содержание суммы производных оксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту в процентах рассчитывают по формуле:

А×5000 , m×782

где:

782 — удельный показатель поглощения цикориевой кислоты;

А — среднее значение оптической плотно-

сти;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.