2007_-Byelorussian_Pharmacopoeia_Volume_2

идальной формы, твердые, морщинистые, длиной от 5 мм до 13 мм, шириной от 4 мм до 10 мм, сверху с кольцевой оторочкой, образованной ссохшимисячашелистиками.Вжелтоватоймякоти плода находятся 1—5 деревянистых косточек, имеющих неправильную треугольную, овальную или сжатую с боков форму. Поверхность косточек ямчато-морщинистая или бороздчатая по спинке. Цвет плодов от желто-оранжевого и темно-красного до коричневато-красного, коричневого или черного, иногда с беловатым налетом выкристаллизовавшегося сахара. Запах отсутствует.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просма-

тривании эпидермиса плода видны четырехшестиугольныеклеткисравномерноутолщенными стенками и желто-коричневым содержимым. На поверхности эпидермиса редкие одиночные одноклеточные, слегка извилистые, на концах заостренные, толстостенные волоски. На кольцевой оторочке плода волоски многочисленные, одноклеточные, со вздутиями, притупленные у верхушки и расширенные у основания, с тонкими стенками и коричневатым содержимым. Мякоть плода состоит из клеток округлой или овальной формы, содержащих включения оранжевокрасного или коричневато-желтого цвета (каротиноиды), мелкие друзы и призматические кристаллы оксалата кальция. Во внутренней части мякоти плода проходят коллатеральные пучки, встречаются одиночные склереиды. Близ крупных пучков расположены пласты каменистых клеток; кристаллы оксалата кальция местами образуют кристаллоносную обкладку. При измельчении сырья (355) видны: продолговатые, одноклеточные, часто изогнутые, конические, с гладкими, утолщенными и одревесневшими стенками волоски; паренхиматозные скопления фрагментов поверхностного слоя с красными пигментами; некоторые клетки внутренних слоев содержат небольшие группы кристаллов оксалата кальция; иногда обнаруживаются группы склереид, около проводящих пучков каменистые клетки и призматические кристаллы оксалата кальция; встречаются фрагменты эпидермального слоя, состоящего из шестиугольных слизистых клеток, под которыми находится слой желто-коричневого пигмента, содержащий многочисленные удлиненные призмы оксалата кальция; толстостенная паренхима эндосперма и семядолей, содержащие алейроновые зерна и капли жирного масла.

С. Тонкослойная хроматография

(2.2.27).

Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченно-

го сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р и нагревают в водяной бане при 65°С в течение 5 мин при частом встряхивании. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Фильтрат доводят метанолом Р до объема 10 мл.

Раствор сравнения. 2 мг хлорогеновой кислоты Р, 2 мг кофейной кислоты Р, 5 мг гипе-

розида Р и 5 мг рутина Р растворяют в 20 мл

метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подхо-

дящего силикагеля Р.

Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).

Наносимый объем пробы: 30 мкл испытуе-

мого раствора и 10 мкл раствора сравнения в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: при температуре от 100°С до

105°С.

Проявление: горячую пластинку опрыскива-

ют раствором­ 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором­ 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 30 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются и другие флуоресцирующие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2).Несырьевые части растения: подгоревшие плоды — не более 2 %; плоды недозрелые (буровато-зеленые) — не более 1 %; плоды, поврежденные вредителями, дробленые, отдельные косточки, плодоножки, в том числе отделенные при анализе, — не более 5 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32)

Не более 14,0 %. 3,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 5,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 1,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение содержания процианидинов в пересчете на цианидина хлорид. К 2,50 г измельченного сырья (355) прибавляют 30 мл спирта (70 %, об/об) Р, нагревают с обратным холодильником в течение 30 мин и фильтруют. Остаток промывают 10,0 мл спирта (70 %, об/об) Р. К фильтрату прибавляют 15,0 мл кис-

лоты хлористоводородной Р1 и 10,0 мл воды Р

инагревают с обратным холодильником в течение 80 мин, после чего охлаждают, фильтруют

ипромывают остаток спиртом (70 %, об/об) Р до прекращения окрашивания фильтрата. Объем фильтрата доводят спиртом (70 %, об/об) Р до 250,0 мл. 50,0 мл полученного раствора выпаривают в круглодонной колбе до объема приблизительно 3 мл и переносят в делительную воронку. Ополаскивают круглодонную колбу последовательно 10 мл и 5 мл воды Р и переносят в делительную воронку. Полученный раствор встряхивают трижды с бутанолом Р порциями по 15 мл. Органические слои объединяют и доводят бутанолом Р до объема 100,0 мл.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) раствора при 545 нм.

Содержание процианидина в пересчете на цианидина хлорид в процентах рассчитывают по формуле:

A×500 , m×75

где:

75 — удельный показатель поглощения цианидина хлорида;

А — оптическая плотность раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания флавоноидов

впересчете на гиперозид. 5,000 г измельченно-

го сырья (2000) помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50,0 мл 96 % спирта Р, взвешивают с точностью до 0,01 г и нагревают на кипящей водяной бане

втечение 1 ч. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и дово-

дят массу колбы до первоначальной 96 % спиртом Р. Полученный раствор процеживают через ватный тампон толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 15 мл фильтрата; 25,0 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 мл и выпаривают досуха в вакууме. Сухой остаток обрабатывают дважды горячим раствором­ 100 г/л натрия хлорида Р порциями по 10 мл, каждый раз нагревая содержимое колбы на водяной бане в течение 2 мин. Раствор охлаждают, процеживают через ватный тампон, смоченный водой Р, на колонку, заполненную

полиамидом для колоночной хроматографии Р (1,0 г полиамида для колоночной хроматогра-

фии Р помещают в стаканчик вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл воды Р, перемешивают и выливают через воронку в колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см. В нижнюю часть колонки предварительно помещают небольшой ватный тампон, смоченный водой Р. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин, не допуская обнажения поверхности сорбента. Толщина слоя жидкости над сорбентом должна быть не менее 4—5 мм). Колонку промывают 30,0 мл воды Р, из них 10 мл используют для промывания фильтра, который после этого убирают. Когда над сорбентом останется слой жидкости толщиной 7—10 мм, водный­ элюат отбрасывают. Элюирование суммы флавоноидов проводят 25 мл 96 % спирта Р, который прибавляют в колонку постепенно, порциями по 5 мл. Первые порции элюата (бесцветные и прозрачные) собирают в градуированную пробирку вместимостью10млидиаметромоколо1см.Когда элюат приобретет окраску и обьем окрашенного элюата в пробирке достигнет 1 мл, мерную пробирку убирают (граница раздела бесцветного водного и окрашенного спиртового слоев элюата впробиркехорошоразличимавизуально).Элюат из пробирки отбрасывают. Последующие порции элюата собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем элюата в колбе доводят 96 % спиртом Р до 25,0 мл (раствор А).

Испытуемый раствор. 2,0 мл раствора А доводят 96 % спиртом Р до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения. 2,0 мл раствора 1 г/л ФСО гиперозида в 96 % спирте Р помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл со шлифом и выпаривают досуха под вакуумом. Остаток в колбе обрабатывают дважды горячим раст­ вором 100 г/л натрия хлорида Р порциями по 10мл,каждыйразнагреваясодержимоеколбына водяной бане в течение 2 мин, и сливают раствор на вновь приготовленную колонку, заполненную

полиамидом для колоночной хроматографии Р,

процеживая через ватный тампон, смоченный водой Р. Элюат для измерения оптической плотности стандартного образца гиперозида получают аналогично элюату суммы флавоноидов.

Компенсационный раствор. Получают ана-

логично элюату суммы флавоноидов путем про-

пускания 25,0 мл 96 % спирта Р через вновь приготовленную колонку, заполненную полиами-

дом для колоночной хроматографии Р, в мер-

ную колбу вместимостью 25 мл. Объем элюата доводят 96 % спиртом Р до 25,0 мл.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора и раствора сравнения при

365нм.

Содержание суммы флавоноидов в пере-

счете на гиперозид в процентах рассчитывают по формуле:

A×m0 ×Р×0,08 ,

A0 ×m

где:

A — оптическая плотность испытуемого раствора;

ненияA0; — оптическая плотность раствора срав-

m — масса навески испытуемого сырья, г; m0 — масса навески ФСО гиперозида, г; Р — содержание гиперозида в ФСО, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Боярышника цветки

Crataegi fIores

HAWTHORN FLOWER*

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранныевначалецветенияивысушенные соцветия кустарников или небольших деревьев:

Crataegus sanguinea PaII.; С. Iaevigata (Poir) DC. (syn.: С. oxyacantha sensu Pojark.); С. koroIkowii

L. Henry; C. aItaica (Loud.) Lange; C. сhIorocarpa Lenne et C. Koch; C. aItaica (Loud.) Lange; C. dahurica Koehne ex Schneid.; С. monogyna Jacq.;

С. aIemanniensis Cin.; С. pentagyna WaIdst. et Kit.; С. orientobaItica Cin.; С. curvisepaIa Lindm.; С. × curonica Cin.; С. × dunensis Cin. Содержат не менее 0,5 % гиперозида (С21Н20О12; М.м. 464,4) в пересчете на сухое сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Смесь цель-

ных щитковидных, реже зонтиковидных соцветий и их частей — отдельных цветков, бутонов, цветоножек, лепестков, тычинок и пыльников. Цветки правильные, с двойным околоцветником, состоящим из пяти продолговато-треугольных, треугольных или узких ланцетных зеленоватых чашелистиков и пяти овальных коричневатоили желтовато-белых лепестков; тычинок до 20, с красными пыльниками, столбиков от 1 до 5; цветоножки обычно голые или слабо опушенные, длиной до 35 мм. Диаметр распустившихся

цветков 10—15 мм, бутонов — 3—4 мм. Запах слабый, своеобразный.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просматри-

вании чашелистиков и лепестков с поверхности видны клетки эпидермиса, имеющие с наружной стороны прямые или слабо извилистые стенки и складчатую кутикулу. Устьица крупные, редкие, аномоцитного типа, расположенные на чашелистиках с наружной стороны. Клетки внутреннего эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выросты. По краю чашелистиков расположены многоклеточные шаровидные железки (сидячие и на многоклеточных ножках) с желтовато-коричневым содержимым; на поверхности — многочисленные простые, одноклеточные волоски с толстыми стенками, гладкие, на верхушке заостренные, прямые или слабо изогнутые, у основания слегка расширенные и окруженные розеткой из пяти эпидермальных клеток. В мезофилле чашелистиков и завязи имеются друзы, изредка встречаются призматические кристаллы оксалата кальция.

С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченно-

го сырья (355) прибавляют 5 мл 96 % спирта Р и кипятят с обратным холодильником на водяной бане в течение 15 мин. Охлаждают, собирают надосадочную жидкость.

Раствор сравнения. 5 мг гиперозида Р раст-

воряют в 10 мл 96 % спирта Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем сили-

кагеля Р.

Подвижная фаза: хлороформ Р — метанол Р (80:20, об/об).

Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе в течение 2 мин. Проявление А: просматривают в ультрафио-

летовом свете при длине волны 365 нм. Результаты А: на хроматограмме испы-

туемого раствора обнаруживается зона темнокоричневого цвета на уровне зоны гиперозида на хроматограмме раствора сравнения.

Проявление В: пластинку опрыскивают раст­ вором50г/лалюминияхлоридаРв96 %спиртеР,

нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 2-3 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при 365 нм и при дневном свете.

Результаты В: в ультрафиолетовом свете зоны, соответствующие гиперозиду, приобретают желто-зеленую флуоресценцию, при дневном свете — ярко-желтую окраску.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимыепримеси(#2.8.2).Несырьевые части растения: другие части растения (веточки, листья) — не более 6 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более

0,5 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 12,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 3,5 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Испытуемый раствор. 2,000 г измельчен-

ного сырья (2400) помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 96 % спирта Р, взвешивают с точностью до 0,01 г и нагревают

собратным холодильником на водяной бане в течение 1 ч. Охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной 96 % спиртом Р. Процеживают через ватный тампон толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 30 мл фильтрата. 50,0 мл фильтрата помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл и упаривают в вакууме до объема 2-3 мл. Доводят 96 % спиртом Р до объема 10,0 мл, перемешивают, дают осесть образовавшемуся аморфному осадку и собирают надосадочную жидкость.

Раствор сравнения. 0,050 г ФСО гиперози-

да, высушенного при температуре от 100°С до 105°С, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 40 мл 96 % спирта Р и нагревают с обратным холодильником на водяной бане до полного растворения кристаллов. Охлаждают и доводят 96 % спиртом Р до объема 50,0 мл.

На линию старта ТСХ пластинки со слоем силикагеля Р наносят по 80 мкл раствора сравнения и испытуемого раствора в виде полос длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от края. Пластинку

снанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин и хроматографируют с использованием подвижной фазы хлороформ Р — метанол Р (80:20, об/об) (камеру не насыщают парами подвижной фазы). Когда фронт подвижной фазы пройдет около 13 см, пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе в течение 2 мин и повторно хроматографируют в описанных выше условиях. Пластинку высушивают на воздухе в течение 2 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм. Отмечают зоны гиперозида на хроматограммах раствора сравнения и испытуемого раствора. Вырезают участки пластинки с зонами, а также чистый участок равной площади этой же пластинки для контрольного опыта, разрезают каждый на кусочки размером 0,3—0,5 см, помещают в колбы со шлифами вместимостью 50 мл, прибавляют по 10,0 мл смеси из диоксана Р и воды Р (50:50, об/об), закрывают пробками и встряхивают в течение 60 мин. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 1000 об/мин в течение 5 мин.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) элюатов испытуемого раствора и раствора сравнения при 365 нм, используя элюат контрольного опыта в качестве компенсационного раствора.

Содержание гиперозида в процентах рассчитывают по формуле:

A×m0 ×40 ,

A0 ×m

где:

A — оптическая плотность элюата испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность элюата раствора сравнения;

m — масса навески испытуемого сырья, г; m0 — масса навески ФСО гиперозида, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Брусники листья

Vaccinii vitis-idaeae folia

COWBERRY LEAF*

Определение

Собранные до начала цветения или после созревания плодов высушенные листья многолетнего вечнозеленого кустарничка Vaccinium vitis-idaea L. Содержат не менее 4,0 % производных гидрохинона в пересчете на арбутин

(С12Н16О7; М.м. 272,3) в сухом сырье или не менее 4,5 % арбутина (С12Н16О7; М.м. 272,3) в сухом

сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Листья ко-

роткочерешковые, кожистые, эллиптические или обратнояйцевидные, на верхушке притупленные или слабовыемчатые с цельными или слегка зазубренными, завернутыми вниз краями, длиной от 7 мм до 30 мм, шириной от 5 мм до 15 мм. Листья сверху темно-зеленые, снизу светлозеленые с ясно заметными темно-коричневыми точками (железками). Запах отсутствует.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просматри-

вании листа с поверхности видны слегка извилистые стенки клеток верхнего и нижнего эпидермиса. Устьица только на нижнем эпидермисе, мелкие, окружены двумя околоустьичными клетками, расположенными параллельно устьичной щели (парацитный тип). На нижней стороне листа имеются железки, состоящие из многоклеточнойножки,постепеннопереходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым. На верхней стороне листа по жилкам встречаются редкие одноклеточные прямые или дуговидно изогнутые волоски с тол-

стыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью. В мезофилле содержатся редкие одиночные кристаллы оксалата кальция в виде призм.

С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченно-

го сырья (355) прибавляют 5 мл смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и кипятят с обратным холодильником в водяной бане в течение 10 мин. Горячее извлечение фильтруют. Фильтр и пробирку промывают смесью из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 5 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения. 2,5 мг арбутина Р раст-

воряют в 5 мл метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля G Р.

Подвижная фаза: этилацетат Р — кислота муравьиная безводная Р — вода Р (44:3:3, об/об/об).

Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: при температуре от 100°С до

105°С.

Проявление: пластинку опрыскивают раст­ вором 10 г/л 4-аминопиразолона P, затем раст­ вором 20 г/л калия ферроцианида Р и проявляют в парах аммиака. Просматривают при дневном свете.

Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора в верхней половине могут обнаруживаться и другие зоны.

Верх хроматографической пластинки

ИСПЫТАНИЯ (Числовые показатели)

Допустимыепримеси(#2.8.2).Несырьевые части растения: листья, побуревшие и почерневшие с обеих сторон, — не более 7 %; другие части растения — не более 1 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 13,0 %. 3,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.1.6). Не более 7,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 0,5 %.

Количественное определение

Определение содержания производных гидрохинона в пересчете на арбутин. К 0,400 г

измельченного сырья (355) прибавляют 50 мл воды Р и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают и доводят водой Р до объема 250,0 мл. После оседания частиц сырья 5,0 мл извлечения переносят в делительную воронку, прибавляют 45 мл воды Р, 1 мл раствора 20 г/л

аминопиразолона P, 0,5 мл раствора аммиака разведенного Р2, 1 мл раствора 80 г/л калия ферроцианида Р. После прибавления каждого ингредиента смесь перемешивают. Выдерживают в течение 5 мин, прибавляют 25 мл хлороформа Р и встряхивают. Органический слой процеживают в мерную колбу вместимостью 100 мл через ватный тампон, увлажненный хлороформом Р. Водный слой промывают хлороформом Р три раза порциями по 25 мл. Хлороформные извлечения объединяют и доводят хлороформом Р до объема 100,0 мл.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученного раствора при 455 нм, используя воду Р в качестве компенсационного раствора.

Содержание производных гидрохинона в пересчете на арбутин в процентах рассчитывают по формуле:

A×5000 , m×648

где:

648 — удельный показатель поглощения арбутина;

А — оптическая плотность полученного раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания арбутина. 0,500 г измельченного сырья (710) помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды Р и нагревают, поддерживая слабое кипение, в течение 30 мин. Горячее извлечение фильтруютвмернуюколбувместимостью100мл через бумажный фильтр, избегая попадания частиц сырья на фильтр. В колбу с сырьем повторно прибавляют 25 мл воды Р и кипятят в течение 20 мин. Горячее извлечение вместе с сырьем переносят на тот же фильтр и остаток на фильтре дважды промывают горячей водой Р порциями по 10 мл. К фильтрату прибавляют 3 мл раст-

вора свинца (II) ацетата основного Р, переме-

шивают, охлаждают и доводят объем фильтрата водой Р до 100,0 мл. Колбу помещают в водяную баню и выдерживают до полной коагуляции осадка. Горячую жидкость полностью отфильтровывают в колбу через бумажный фильтр, прикрывая воронку часовым стеклом. Охлаждают, к фильтрату прибавляют 1 мл кислоты серной Р, колбу взвешивают с точностью до 0,01 г и кипя-

тят с обратным холодильником в течение 1,5 ч, поддерживая равномерное и слабое кипение. Охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной водой Р и полностью отфильтровывают в колбу вместимостью 250 мл через бумажный фильтр. К фильтрату прибавляют 0,1 г порошка цинка Р и встряхивают в течение 5 мин. Жидкость ней-

трализуют натрия гидрокарбонатом Р (около 1—2 г) по красной лакмусовой бумаге Р, прибавляют еще 2 г натрия гидрокарбоната Р и по-

сле его растворения фильтруют в колбу через бумажный фильтр.

50,0 мл фильтрата переносят в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл воды Р и немедленно титруют из микроили полумикробюретки 0,1 М раствором­ йода до появления синего окрашивания, не исчезающего втечение1мин,используявкачествеиндикатора

раствор крахмала, свободный от йодидов, Р. 1 мл 0,1 М раствора йода соответствует

0,01361 г арбутина (С12Н16О7).

Хранение

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Бузины черной цветки

Sambuci nigrae flores

ELDER FLOWER

Определение

Собранные в период цветения высушенные цветки и бутоны кустарника Sambucus nigra L. Содержат не менее 0,80 % флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид (С21Н20О12; М.м. 464,4) в сухом сырье или не менее 2,0 % флавоноидов

в пересчете на рутин (С27Н30О16; М.м. 611) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Отдельные цветки и бутоны на коротких голых цветоножках или без них. Цветки со слабо заметной пятизубчатой спайнолистной чашечкой и венчиком из 4—5 лепестков, сросшихся у основания, диаметром до 5 мм. Тычинок пять, приросших к трубке венчика, завязь полунижняя, трехгнездная. Цвет желтоватый. Запах ароматный.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании лепестка с поверхности видны многоугольные со слабо извилистыми тонкими стенками клетки верхнего эпидермиса, по краю — с сосочковидными выростами; клетки нижнего эпидермиса более крупные, сильно извилистые. Устьица только на нижней стороне лепестка, овальные, аномоцитного типа. Кутикула с обеих сторон, морщинистая. Клетки эпидермиса

чашелистика со слабо извилистыми стенками, устьица округлые, кутикула мелкоморщинистая. В мезофилле лепестков и чашелистиков многочисленные тонкостенные клетки-идиобласты с кристаллическим песком оксалата кальция. Волоски простые и головчатые. Простые волоски сосочковидные, мелкие, одноклеточные, тонкостенные, со штриховатой кутикулой. Головчатые волоски крупные, с округлой или овальной многоклеточной головкой на 2—4-клеточной ножке. Пыльцевые зерна мелкие сферические или эллипсоидные, диаметром около 30 мкм, с тремя апертурами, расположенными по экватору.

С. Просматривают в ультрафиолетовом свете при 365 нм хроматограммы, полученные в испытании «Sambucus ebulus L.». На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются интенсивная флуоресцирующая зона светло-синего цвета (хлорогеновая кислота), флуоресцирующая зона оранжевого цвета (рутин) и флуоресцирующая зона оранжевого цвета (изокверцитрозид), расположенная немного выше зоны гиперозида на хроматограмме раствора сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается флуоресцирующая зона зеленовато-синего цвета, расположенная немного ниже зоны кофейной кислоты на хроматограмме раствора сравнения; могут обнаруживаться и другие слабые флуоресцирующие зоны. При просматривании при дневном свете на хроматограмме испытуемого раствора четко видны только зоны, соответствующие рутину и изокверцитрозиду.

Испытания (Числовые показатели)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несы-

рьевые части растения: побуревшие цветки — не более 15 %. Цветоносы и другие посторонние примеси: не более 8 %. Определение проводят из 10 г испытуемого сырья.

Sambucus ebulus L. Тонкослойная хроматография (2.2.27).

Испытуемый раствор. К 0,5 г измельчен-

ного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р, нагревают на водяной бане при температуре 65°С в течение 5 мин при периодическом встряхивании. Охлаждают, фильтруют и доводят метанолом Р до объема 10 мл.

Раствор сравнения. 1 мг кофейной кислоты Р, 1 мг хлорогеновой кислоты Р, 2,5 мг гиперозида Р и 2,5 мг рутина Р растворяют в 10 мл метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.

Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).

Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.

Высушивание: при температуре от 100°С до

105°С.

Проявление: горячую пластинку опрыскива-

ют раствором­ 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором­ 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Через 30 мин пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

Результаты: на хроматограмме раство­ ра сравнения в нижней половине обнаружива­ ются, в порядке увеличения значения Rf, флу­ оресцирующая­ зона оранжевого цвета (рутин), флуоресцирующая зона светло-синего цвета (хлорогеновая­ кислота) и флуоресцирующая зона от оранжево-желтого до оранжево-ко­ ричневого цвета (гиперозид); в верхней трети обнаруживается флуоресцирующая зона зеле­ новато-синего цвета (кофейная кислота). На хроматограмме­ испытуемого раствора не должна обнаруживаться зона розового цвета, расположенная ниже зоны рутина на хроматограмме раствора сравнения.

Потеря в массе при высушивании

(2.2.32). Не более 10,0 %. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°С до 105°С в течение 2 ч.

Общая зола (2.4.16). Не более 10,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 3,0 %.

Количественное определение

Определение содержания флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид. 0,600 г

измельченного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют

1 мл раствора 5 г/л гексаметилентетрамина Р, 20 мл ацетона Р и 2 мл кислоты хлористоводо-

родной Р1. Кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего извлечение процеживают через ватный тампон в колбу. Ватный тампон помещают в круглодонную колбу с остатком сырья и дважды кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин, каждый раз прибавляя 20 мл ацетона Р в качестве экстрагента. Охлаждаютипроцеживаютчерезватныйтампон. Объединенные ацетоновые извлечения фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, ополаскивают круглодонную колбу ацетоном Р и фильтруют через тот же фильтр, после чего промывают фильтр ацетоном Р. Объем раствора доводят до 100,0 мл ацетоном Р. 20,0 мл полученного раствора помещают в делительную воронку, прибавляют

20 мл воды Р и экстрагируют этилацетатом Р

порцией 15 мл, затем еще трижды порциями по 10 мл. Этилацетатные извлечения объединяют, помещают в делительную воронку и дважды промывают водой Р порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через бумажный фильтр с

10 г натрия сульфата безводного Р в мерную

колбу вместимостью 50 мл и доводят этилацетатом Р до объема 50,0 мл (раствор А).

Испытуемый раствор. К 10,0 мл раствора А прибавляют 1 мл реактива алюминия хлори-

да Р и доводят 5 % (об/об) раствором­ кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема

25,0 мл.

Компенсационный раствор. 10,0 мл раст-

вора А доводят 5 % (об/об) раствором­ кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема

25,0 мл.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при

425нм.

Содержание флавоноидов в пересчете на

изокверцитрозид в процентах рассчитывают по формуле:

А×625 , m×500

где:

500 — удельный показатель поглощения изокверцитрозида;

А — оптическая плотность испытуемого раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин. 1,000 г измель-

ченного сырья (710) помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл спирта (70 %, об/об) Р, взвешивают с точностью до 0,01 г и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц со стенок колбы. Охлаждают до комнатной температуры, доводят массу колбы до первоначальной спиртом (70 %, об/об) Р и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).

Испытуемый раствор. К 2,0 мл раствора А прибавляют 15 мл 96 % спирта Р, 0,5 мл кисло-

ты уксусной разведенной Р, 3 мл раствора 50 г/л алюминия хлорида Р в спирте (70 %, об/об) Р, 2 мл раствора 50 г/л гексаметилентетрами-

на Р и доводят водой Р до объема 25,0 мл.

Компенсационный раствор. К 2,0 мл раст-

вора А прибавляют 15 мл 96 % спирта Р, 0,5 мл

кислоты уксусной разведенной Р, 2 мл раствора 50 г/л гексаметилентетрамина Р и доводят во-

дой Р до объема 25,0 мл.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 407 нм.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах рассчитывают по формуле: А×1250 ,

m×220

где:

220 — удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом;

А — оптическая плотность испытуемого раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

Хранение

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Валерианы корневища с корнями

Valerianae rhizomata cum radicibus

VALERIAN ROOT

ОПРЕ,ДЕЛЕНИЕ

Высушенные целые или фрагментированные подземные части растения Valeriana officinalis L. s.l., включая корневища с корнями и столонами.

Содержат:

––цельное и фрагментированное сырье: не менее 0,17% (м/м) суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту

(С15Н22О2; М.м. 234,3) в сухом сырье или не менее 2 % суммы сложных эфиров в пересчете на

этиловый эфир валереновой кислоты в сухом сырье;

––измельченное сырье: не менее 0,10 % (м/м)суммысесквитерпеновыхкислотвпересчете на валереновую кислоту (С15Н22О2; М.м. 234,3) в сухом сырье или не менее 2 % суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. Внешние признаки (#2.8.3). Корневища от желтовато-серого до бледного коричневатосерого цвета, от конической до цилиндрической формы, длиной приблизительно до 50 мм и диаметром 30 мм, основание удлиненное или сжатое, обычно полностью покрытое многочисленными корнями. На верхушке обычно имеется чашеобразный рубец от надземных частей; иногда присутствуют основания стеблей. На продольном разрезе в центре сердцевины видна полость с поперечными перегородками. Корни многочисленные, почти цилиндрической формы, цвет такой же, как у корневищ, диаметром от 1 до 3 мм, длина иногда превышает 100 мм. Присутствует небольшое количество нитевидных хрупких вторичных корней. На столонах имеются выступающие узлы, разделенные бороздчатыми междоузлиями длиной от 20 мм до 50 мм, имеющими волокнистый излом.

В.Микроскопия(#2.8.3).Исследуютизмельченное сырье (355). Цвет от бледного желтоватосерого до бледного серовато-коричневого. Видны: клетки, содержащие бледно-коричневую смолу или каплевидные включения эфирного масла; группы небольших прямоугольных склереид с толстыми стенками; редкие группы более крупных склереид основания стебля с более тон-

кимиклеточнымистенками;лигнифицированные сосуды с сетчатыми утолщениями, встречающиеся группами или по отдельности; отдельные фрагменты клеток коры и эпидермических клеток, на некоторых из которых имеются корневые волоски; редкие фрагменты пробки.

При использовании 50 % (об/об) раствора глицерина Р в измельченном сырье (355) видны многочисленные крахмальные зерна, в основном сложные, содержащие до 4—6 составляющих, но часто распадающиеся на отдельные гранулы округлой или неправильной формы диаметром до 15 мкм; большинство гранул имеют неотчетливые трещинки или радиальный центр наслоения.

C. Тонкослойная хроматография

(2.2.27).

Испытуемый раствор. 1 г измельченного сырья (355) суспендируют в 10 мл метанола Р и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Используют фильтрат.

Раствор сравнения. 5 мг кислоты ацетоксивалереновой Р и 5 мг кислоты валереновой Р

растворяют в 20 мл метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (5—40 мкм) [или ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (2—10 мкм)].

Подвижная фаза: кислота уксусная ледяная Р — этилацетат Р — циклогексан Р

(2:38:60, об/об/об).

Наносимый объем пробы: по 20 мкл [5 мкл]

в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см

[6 см] от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку опрыскивают раст­ вором анисового альдегида Р. Нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин. Просматривают при дневном свете.

Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие зоны фиолетового цвета.

Верх хроматографической пластинки

ИСПЫТАНИЯ (числовые показатели)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырье-

вые части растения: остатки листьев и стеблей, в том числе и отделенные при анализе, а также старые отмершие корневища – не более 5 %. Органические примеси: не более 2 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 15,0 %. 1,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до

105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 13,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 10,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение содержания суммы ­сесквитерпеновых кислот. Жидкостная хрома-

тография (2.2.29).

Испытуемый раствор. 1,50 г измельченного сырья (710) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл со шлифом, прибавляют 20 мл метанола Р1, перемешивают и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют. Фильтр с остатком помещают в ту же круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл метанола Р1 инагреваютнаводянойбанесобратнымхолодильником в течение 15 мин. Охлаждают и фильтруют. Фильтраты объединяют и доводят метанолом Р1 дообъема50,0мл,ополаскиваякруглодоннуюколбу и фильтр этим же растворителем.

Раствор сравнения. Количество ФСО сухого экстракта валерианы стандартизирован-

ного, соответствующее 1,0 мг валереновой кислоты, растворяют в метаноле Р1 и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Условия хроматографирования:

––колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р с раз-

мером частиц 5 мкм;

––подвижная фаза:

––подвижная фаза А: ацетонитрил Р —

раствор 5 г/л фосфорной кислоты Р (20:80, об/об);

––подвижная фаза B: раствор 5 г/л фос-

форной кислоты Р — ацетонитрил Р

(20:80, об/об);

––скорость подвижной фазы: 1,5 мл/мин;

––спектрофотометрический детектор,

длина волны 220 нм;

––объем вводимой пробы: 20 мкл. Идентификация пиков: для идентификации

пиков ацетоксивалереновой кислоты и валереновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения используют хроматограмму, прилагаемую к ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного.

Пригодность хроматографической систе-

мы: раствор сравнения:

––относительное время удерживания (по отношению к валереновой кислоте, время удерживания около 21 мин): ацетоксивалереновая кислота — около 0,5.

Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в процентах рассчитывают по формуле:

(S1 +S2 )×m2 ×P ×5 , S3 ×m1

где:

S1 —площадьпикаацетоксивалереновойкис- лоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S2 — площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S3 — площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения;

m1 — масса навески испытуемого сырья, г; m2 — масса навески ФСО сухого экстракта

валерианы стандартизированного, г;

Р — содержание валереновой кислоты в

ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного, %.

Определение содержания суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты. 5,000 г измельченно-

го сырья (500) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют

50 мл смеси из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) и встряхивают в течение 45 мин. Фильтруют через бумажный фильтр, смоченный смесью из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1,

об/об), в мерную колбу вместимостью 100 мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр. В колбу с остатком сырья прибавляют 40 мл сме-

си из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об)

и встряхивают в течение 15 мин. Фильтруют в ту же мерную колбу и доводят смесью из хлоро-

форма Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) до объема

100,0 мл (раствор А).

Испытуемый раствор. 5,0 мл раствора А помещают в круглодонную колбу вместимостью 50мливыпариваютввакуумепритемпературеот 40°Сдо50°Сдосуха.Кполученномусухомуостат-

ку прибавляют 5,0 мл гидроксиламина раствора щелочного Р3, выдерживают в течение 20 мин,

прибавляют 10,0 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты, 5,0 мл раствора 10 г/л железа (III) хлорида Р в 0,1 М растворе хлористово-

дородной кислоты, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, смоченный водой Р.

Компенсационный раствор. К 5,0 мл гидроксиламина раствора щелочного Р3 прибавляют 10,0мл1Мрастворахлористоводороднойкислотыи5,0млраствора10г/лжелеза(III)хлоридаРв 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 512 нм.

Содержание суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты в процентах рассчитывают по формуле:

А×400 , m×10,5

где:

10,5 — удельный показатель поглощения гидроксамата валереновой кислоты;

А — оптическая плотность испытуемого раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.

Василька синего цветки

Centaureae cyani flores

BLUE CORNFLOWER*

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в период цветения и высушенные краевые и срединные цветки одно-, двухлетнего травянистого растения Centaurea cyanus L. Содержат не менее 0,6 % суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3,5-дигликозид

(C27H31ClO16; М.м. 647,0) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

A.Внешние признаки (#2.8.3). Смесь крае-

вых и срединных цветков. Краевые цветки бесполые, воронковидные, длиной до 2 см, венчиковидные, неправильной формы, с 5—8 глубоко надрезанными ланцетовидными долями отгиба

итрубчатым основанием до 6 мм длиной. Срединные — обоеполые, трубчатые, длиной около 1 см, оканчивающиеся пятью прямыми зубцами, от середины к основанию резко суженные. Тычинок пять, со свободными шерстистыми нитями

исросшимися пыльниками. Пестик с нижней завязью. Цвет краевых цветков синий, у основания бесцветный; срединных — сине-фиолетовый. Запах слабый.

B.Микроскопия (#2.8.3). Клетки эпидермиса краевых цветков с обеих сторон вытянутые, с заостренными концами и извилистыми стенками. В трубчатой части цветка стенки клеток прямые или слабо волнистые. В тканях трубочки содержатся многочисленные призматические кристаллы оксалата кальция. Эпидермис труб-

чатых цветков имеет аналогичную структуру, но с более мелкими клетками. Встречаются зерна пыльцы овальной формы.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырье-

вые части растения: цветочные корзинки — не более 1 %; цветки, потерявшие естественную окраску, — не более 10 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потерявмассепривысушивании(2.2.32).

Не более 14,0 %. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 8,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 1,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Растворитель S. 20,0 мл кислоты хлористоводородной Р1 доводят водой Р до объема

500,0 мл.

Испытуемый раствор. 0,3 г измельченного сырья (710) помещают в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл растворителя S, выдерживают в водяной бане при температуре от 40°С до 45°С в течение 15 мин. Извлечение процеживают через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 250 мл. Ватный тампон с сырьем снова помещают в колбу, прибавляют 100 мл растворителя S, предварительно смывая частицы сырья с воронки в колбу, и повторяют экстрагирование указанным выше способом. Содержимое колбы процеживают через ватный тампон в ту же мерную колбу. Сырье на ватном тампоне промывают 40 мл растворителя S. После охлаждениядоводятобъемизвлечениярастворителем S до 250,0 мл. Полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 510 нм, используя растворитель S в качестве компенсационного раствора.

Содержание суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3,5-дигликозид в процентах рассчитывают по формуле:

А×250 , 453×m

где:

453 — удельный показатель поглощения цианидин-3,5-дигликозида;

А — оптическая плотность испытуемого раствора;

m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.