Выделение дубильных веществ из лрс

ДВ - это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности.

Для получения суммы ДВ (схема 13) ЛРС экстрагируют горячей водой, а затем охлаждают. Водный экстракт обрабатывают последовательно:

1. Петролейным эфиром (или бензолом) - для очистки от хлорофилла, терпеноидов и липидов.

2. Диэтиловым эфиром, который извлекает катехины, оксикоричные кислоты и др. фенольные соединения.

3. Этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот и др.

Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракции диэтилового эфира и этилацетата разделяют на индивидуальные компоненты с помощью различных видов хроматографии. Используют

 адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевой порошок);

 распределительную хроматографию на колонках силикагеля;

 ионообменную;

 гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др.

Идентификация индивидуальных компонентов ДВ основана на хроматографических методах (хроматография на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления.

Схема 13

Качественный анализ

Качественные реакции можно подразделить на 2 группы:

I. Общие реакции осаждения - для обнаружения ДВ.

II. Групповые - для установления принадлежности ДВ к определенной группе.

Для проведения качественных реакций готовят водное извлечение из ЛРС.

I. Для обнаружения дубильных веществ проводят реакции:

1) с 1% раствором желатина в 10% растворе натрия хлорида. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина. Реакция специфична;

2) осаждение ДВ солями алкалоидов (сульфат хинина). Образуется белый осадок;

3) с 5% раствором бихромата калия. Образуется коричневый осадок или муть. (Это и гистохимическая реакция обнаружения локализации ДВ в сырье);

4) с раствором основного ацетата свинца. Образуется белый осадок.

II. Определение групповой принадлежности ДВ:

1) с 1% раствором железоаммониевых квасцов гидролизуемые ДВ дают черно-синее окрашивание, а конденсированные - черно-зеленое;

2) 10% раствор среднего ацетата свинца в уксуснокислом растворе (10%) осаждает гидролизуемые ДВ, конденсированные остаются в растворе, которые с железоаммониевыми квасцами дают черно-зеленое окрашивание;

3) при нагревании извлечения с бромной водой конденсированные ДВ выпадают в осадок;

4) смесь 40% раствора формальдегида и концентрированной хлористоводородной кислоты осаждает конденсированные ДВ, а гидролизуемые остаются в растворе.

Реакция на катехины: с 1% раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте образуется ярко-красное окрашивание.

Лейкоантоцианидины можно обнаружить, нагревая извлечение с раствором хлористоводородной кислоты - появляется красное окрашивание за счет образования антоцианов.

Количественный анализ

Все методы количественного определения ДВ в ЛРС можно разделить на гравиметрические, объемные и физико-химические.

1. Гравиметрические методы:

1) Ранее использовали осаждение ДВ желатином или ацетатом меди. В настоящее время эти методики потеряли свое значение.

2) В кожевенной промышленности применяется весовой единый метод (ВЕМ). Метод основан на свойстве ДВ давать необратимые соединения с коллагеном кожи.

Получают водное извлечение из ЛРС, делят его на 2 равные части. Одну часть упаривают, высушивают и взвешивают (Р). Вторую часть обрабатывают кожным (гольевым) порошком, фильтруют. Фильтрат упаривают досуха, высушивают и взвешивают (Р₁). По разности сухих остатков в контроле (Р) и в опыте (Р₁) определяют содержание ДВ.

2. Объемные методы:

1) В ГФ ХI (вып. 1, с. 286) принят оксидиметрический метод определения ДВ (схема 14).

Схема 14

Схема количественного определения ДВ в ЛРС

Подготовка ЛРС (измельчение, просеивание, взятие навески)

Экстракция ДВ водой при нагревании

Фильтрация

На выброс -

охлаждение отработанное сырье

Окислительно-восстановительное титрование

Часть фильтрата, разбавленного водой,

титруют раствором перманганата калия

в присутствии индигосульфокислоты

Расчет результатов

Метод основан на окислении фенольных ОН-групп перманганатом калия в присутствии индигосульфокислоты, которая является регулятором и индикатором реакции. После полного окисления ДВ перманганатом калия начинает окисляться индигосульфокислота до изатина, в результате чего окраска из синей переходит в золотисто-желтую.

ИНДИГОСУЛЬФОКИСЛОТА ИЗАТИН

(синий цвет) (золотисто-желтый)

Методика имеет ряд недостатков - кроме ДВ, происходит окисление других соединений. Несмотря на различную структуру ДВ в сырье, пересчет их содержания ведется на танин.

2) Для количественного определения танина в листьях сумаха и скумпии включен метод осаждения ДВ сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Б в присутствии ксиленового оранжевого.

3. Физико-химические методы:

1) Колориметрические методы связаны со способностью ДВ давать окрашенные соединения с фосфорно-молибденовой или фосфорно-вольфрамовой кислотами в присутствии карбоната натрия или с реактивом Фолина - Дениса и др.

2) Хромато-спектрофотометрические методы.