Выделение иридоидов из лрс

Учитывая особенную чувствительность иридоидов по отношению к кислотам и ферментам (гидролиз) при их выделении сырьё предварительно обрабатывают карбонатом кальция (растительное сырьё - карбонат кальция 10:1) для нейтрализации органических кислот. Ферменты инактивируют нагреванием свежего сырья при 100°С с последующим высушиванием при 60°С.

Универсального метода выделения иридоидов из ЛРС не существует.

Выделение иридоидов из ЛРС проводят водой, нисшими спиртами или водно-спиртовыми смесями.

Можно предложить следующую схему выделения иридоидов.

1. Сырьё экстрагируют 50% этанолом. Для нейтрализации органических кислот к раствору добавляют кальция гидрокарбонат. Экстракцию иридоидов проводят при нагревании.

2. После фильтрации сырье выбрасывают.

3. Отгонка спирта под вакуумом до водного остатка.

1. Для очистки от липофильных веществ водный раствор порциями обрабатывают петролейным эфиром, который затем выбрасывают.

2. Очищенный водный раствор пропускают через колонку с оксидом алюминия для удаления фенольных соединений.

3. Полученный водный элюат упаривают досуха, остаток растворяют в небольшом количестве этанола, к которому прибавляют ацетон для осаждения полисахаридов, сапонинов и других балластных веществ.

4. Осадок балластных веществ отфильтровывают, а спирто- ацетоновый раствор, содержащий сумму иридоидов, упаривают.

5. Выделение индивидуальных веществ проводят методом распределительной колоночной хроматографии.

В других случаях используют свойство иридоидов обратимо адсорбироваться на активированном угле. Иридоиды из растительного сырья экстрагируют водой с добавлением карбоната кальция (для нейтрализации и связывания свободных кислот). К полученному экстракту добавляют активированный уголь, который затем промывают водой для удаления свободных сахаров. Иридоиды с угля элюируют 50% (аукубин) или 70% (асперулозид) этанолом, элюат концентрируют упариваением.

Разделение очищенной фракции проводят хроматографически на колонках с полиамидным сорбентом, силикагелем, целлюлозой, препаративной тонкослойной хроматографией.

Качественный анализ

Для качественного определения иридоидов в ЛРС часто используют реактив Трим-Хилла.

Реактив Трим-Хилла: смесь кислот уксусной ледяной,

хлористоводородной концентрированной,

0,2% -ного водного раствора меди сульфата (20:1:2).

К 1 мл спиртового извлечения из ЛРС прибавляют 0,5 мл реактива Трим-Хилла. Смесь нагревают на водяной бане 1-2 мин. При взаимодействии с этим реактивом иридоиды ряда аукубина дают голубое или синее окрашивание. С помощью этого реактива могут быть обнаружены асперулозид, гарпагид, монотропеин, тевирикозид.

Несмотря на то, что эта реакция является общепринятой, некоторые иридоиды (например, вербеналин, логанин, плюмирид) ею не выявляются. В аналитической практике находит применение реактив Шталя,с которым реагируют большинство веществ иридоидной

природы. Иридоиды группы аукубина с этим реативом дают синюю или голубую окраску.

Реактив Шталя: n-диметиламинобензальдегид – 1г,

концентрированная хлористоводородная кислота – 5 мл,

этанол – до 100 мл.

Реактив Бэкон-Эдельмана: бензидин – 0,5 г,

трихлоруксусная кислота – 10 г,

этанол – до 100 мл.

Иридоиды с этим реактивом окрашиваются от лимонно-желтого до коричневого цвета.

С вербеналином –фиолетовая окраска,

с аукубином – лимонно-жёлтая,

с каталполом – коричневая окраска в видимом свете с интенсивной жёлтой флуоресценцией в УФ - свете.

Реактив Година: ванилин – 1 г,

3% водный раствор хлорной кислоты – 50 мл,

этанол – до 100 мл.

Логанин с этим реактивом даёт окрашивание от красного до фиолетового.

Обнаружение аукубина: кусочек растительного материала помещают на фильтровальную бумагу, смачивают каплей реактива Шталя, через 2-3 мин сырьё снимают с бумаги и место с реактивом прогревают струёй горячего воздуха (90-100°С). При наличии аукубина наблюдают появление на бумаге голубого пятна (при наличии в сырье проазуленов образуется пятно зеленого цвета).