4.3. Практические задания, которые выполняются на занятии:
Изучить принципы, методы, этапы получения чистых культур бактерий.
Освоить работу с бактериологической петлей, чашками Петри, пробирками и осуществить посев исследуемого материала на твердые питательные среды с целью получения изолированных колоний бактерий.
Ознакомиться с методами культивирования анаэробов.
5. Содержание темы
На практическом занятии студенты изучают принципы, методы и этапы выделения чистых культур бактерий. Осваивают технику посева материала на твердые питательные среды методом штриховых посевов. Осуществляют первый этап выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий, засевая исследуемые материалы на соответствующие среды и создавая соответствующие условия культивирования, необходимые для микроорганизмов с разными биологическими свойствами. Цель - получение изолированных колоний. Выполненные задания студенты записывают в протокол и подписывают его у преподавателя.
Рекомендации по оформлению протокола.
Выделение чистых культур и их идентификация (определение видовой принадлежности) представляют собой суть основного метода диагностики инфекционных заболеваний - бактериологического.
Методы и принципы выделения чистых культур бактерий.
I. Методы, которые основываются на принципе механического разъединения микроорганизмов:
1. Метод серийных разведений материала в жидкой питательной среде (метод Л. Пастера).
1мл 1мл 1мл 1мл 1мл 1мл
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
Смесь
бактерий
по 9 мл МПБ
2. Метод пластинчатых разведений материала (метод Р. Коха ).
1мл 1мл 1мл 1мл 1мл 1мл
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
Смесь
бактерий
по 9 мл расплавленного и охлажденного до 50оС МПА
отдельные
колонии
Чашки Петри
Метод рассева материала по поверхности твердой питательной среды с помощью шпателя (метод К. Дригальского).
Сплошной рост Отдельные колонии
4. Метод штриховых посевов.
Материал, который содержит микроорганизмы, рассевают параллельными штрихами по поверхности твердой питательной среды с помощью бактериологической петли.
I
II
IV III
Чашка Петри
5. Методы выделения чистой культуры из одной клетки с помощью микроскопа и микроманипулятора (получение клонов).
II. Методы, которые основываются на принципе использования биологических особенностей микроорганизмов:
1. Метод выделения подвижных бактерий.
2. Метод выделения термостойких бактерий.
3. Метод выделения анаэробов.
4. Методы выделения кислото- и щелочеустойчивых микроорганизмов.
5.Метод выделения микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам, анилиновым красителям, и др.
6. Методы выделения бактерий на элективных средах.
7. Метод выделения культур путем заражения чувствительных лабораторных животных.
Основные этапы выделения чистой культуры бактерий.
|
Этапы |
Задачи этапов |
|
1 |
2 |
|
I Взятие исследуемого материала.
|
1.Взять материал, который содержит возбудителя. 2.Сохранить возбудителя в материале. 3.Предотвратить инфицирование себя и окружающих лиц. |
|
II Посев материала на твердые питательные среды. |
Получить изолированные колонии. |
|
1 |
2 |
|
III Исследование изолированных колоний: 1. Изучение культуральных свойств (форма, размер, цвет, и др.). 2. Микроскопия препарата, изготов-ленного из микроорганизмов колонии и окрашенных по Граму или другим методом (определение морфологической однородности и однотинкториальности) |
Отобрать колонию, подозрительную на колонию патогенных микроорганизмов (на основе изучения культуральных и морфологических свойств) |
|
IV Пересев отобранной колонии микроорганизмов на скошенную питательную среду. |
Получить чистую культуру. |
|
V. Исследование культуры: 1. Изучение культуральных признаков. 2. Микроскопия препарата, изготов-леного из микроорганизмов колонии и окрашенных по Граму или другим методом (определение морфологической однородности и однотинкториальности) |
Определить чистоту культуры (признаки чистой культуры - морфологическая однородность и однотинкториальныесть микроорганизмов). |
Чистая культура - это популяция микроорганизмов одного вида, выращенная на стерильной питательной среде.
После выделения чистой культуры определяют вид микроорганизма (идентифицируют).
Основные этапы идентификации (определение видовой принадлежности)
чистой культуры бактерий.
|
Этапы |
Цель |
|
1. Определить морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму или другим методом). |
Определить вид микроорганизма |
|
2. Определить активную подвижность (методы "раздавленной" или "висячей" капли). | |
|
3. Определить культуральные свойства (характер колоний, характер роста культуры в жидких и на твердых питательных средах). | |
|
4. Определить ферментативные свойства (посев на дифференциально-диагностические среды). | |
|
5. Определить антигенные свойства (провести серологические реакции). | |
|
6. Определить чувствительность культуры к специфическому фагу. | |
|
7. Определить патогенность (инфицирование лабораторных животных). | |
|
8. Определить другие свойства (по необходимости). |
Вид - совокупность микроорганизмов, которые имеют общие морфофизиологические свойства (морфологические, тинкториальные, культуральные, ферментативные, антигенные и др.) и похожий генотип (высокая степень гомологии ДНК, близкое суммарное содержимое пар Г+Ц).
Вид микроорганизмов определяют по их морфологическим, тинкториальным, культуральным, ферментативными, антигенным и другим свойствами.
Задание 1. Начать выделение чистой культуры аэробных бактерий из смеси микроорганизмов.
I II
Термостат
IV III
Смесь МПА
микроорганизмов
Задание 2. Начать выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы.
I II
Анаэростат
Термостат
IV III
Суспензия Кровяной МПА
почвы