Сборник статей 2014

выполнения процедуры животные находились на искусственной вентиляции легких. В течение всего эксперимента у крыс велась запись ЭКГ.

Результаты. При введении U-50,488 за 15 мин до ишемии было выявлено достоверное снижение частоты возникновения аритмий по сравнению с контролем. При селективной блокаде изучаемых протеинкиназ без последующего введения U-50,488, не было выявлено статистически значимых изменений в частоте возникновения аритмий. В свою очередь при ингибировании данных протеинкиназ с последующим введением U-50,488 было выявлено, что блокада МЕК-киназы, тирозинкиназ и mTOR-киназы устраняла антиаритмический эффект U-50,488, а при блокаде PI3-киназы антиаритмический эффект U-50,488 сохранялся.

Выводы. Агонист κ1-ОР U-50,488 обладает антиаритмическим эффектом. В реализации антиаритмического эффекта U-50,488 принимают участие МЕК-киназа, тирозинкиназы, р38-киназа и mTOR-киназа. PI3-киназа не участвует в сигнальном механизме антиаритмического эффекта U-50,488.

СИСТЕМА «ПРОТЕИНАЗЫ-ИНГИБИТОРЫ» ПРИ ПАНКРЕОНЕКРОЗЕ

А.А. Нужнов

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра биохимии и молекулярной биологии

Актуальность. Известно, что острый панкреатит характеризуется относительно благоприятным течением, однако в 20% случаях развивается панкреонекроз и/или некроз парапанкреатической клетчатки, сопровождающийся тяжелыми осложнениями. Ферментативное пропитывание забрюшинной клетчатки происходит как непосредственно вокруг поджелудочной железы, так и в отдаленных от неё анатомических зонах, вплоть до диафрагмы и малого таза. Дальнейшее течение воспалительного процесса зависит от степени тканевой деструкции в поджелудочной железе. Распространенность воспаления и протеолиз структурных белков тканей связаны с повышением активности высвобождаемых лейкоцитами протеиназ и защитного уровня ингибиторов в очаге поражения. В связи с этим представляется актуальной разработка новых эффективных методов локального лечения панкреонекроза путем регуляции протеолиза на фоне использования препаратов ингибиторов протеиназ.

Цель. Цель заключалась в изучении активности трипсино-, эластазоподобных протеиназ, активности α1--протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина в плазме крови и экссудате при панкреонекрозе на фоне лечения препаратами ингибиторов протеиназ.

Материалы и методы. Обследовано 25 человек больных панкреонекрозом, находившихся на лечении в хирургических отделения городской больницы №1 г. Барнаула, в период с 2005 по 2014 гг. В процессе лечения было применено локальное введение ингибиторов протеиназ: гордокс вводили в дозировке 300000 ЕД 2-3 раза в день, контрикал - 80000 АЕ, 2-3 раза в день в течение 5-6 дней. Кроме этого, для формирования ограничительного барьера во время операции пункционно по границе распространения флегмоны инфильтрировалась забрюшинная клетчатка ингибиторами протеиназ. В сыворотке больных и лаваже из брюшной полости (экссудате) определяли активность протеиназ и ингибиторов. Активность эластазо- и трипсиноподобных протеиназ измеряли по скорости гидролиза, соответственно, N-бутил-оксикарбонил-L-аланина-пара-нитрофенилового эфира и N-бензоил-L-аргинин этилового эфира (БАЭЭ). Активность α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина исследовали по скорости гидролиза БАЭЭ трипсином и выражали в условных ингибиторных единицах (ИЕ/мл).

Результаты. Показано, что при панкреонекрозе развивается дисбаланс системы «протеиназы-ингибиторы». В сыворотке крови больных выявлен реципрокный характер изменения активности ингибиторов: увеличение α1-протеиназного ингибитора и снижение

239

активности α2-макроглобулина. При этом у больных панкреонекрозом в сыворотке крови наблюдалась острофазная реакция основных плазменных ингибиторов клеточных протеиназ. Так, уровень α1-протеиназного ингибитора был повышен в 1,4 раза по сравнению с контрольными данными. В лаваже из брюшной полости протеиназноингибиторный дисбаланс характеризовался депрессией антитриптической активности и возрастанием активности эластазо- и трипсиноподобных протеиназ.

Локальное введение препаратов ингибиторов - гордокса и контрикала - приводило к восстановлению системы «протеиназы-ингибиторы» сыворотки крови: происходило увеличение активности α2-макроглобулина, снижение острофазного белка α1-ингибитора протеиназ на фоне нормализации активности эластазо- и трипсиноподобных протеиназ. В экссудате выявлено повышение ингибиторного потенциала, направленного на купирование избыточного протеолиза. В этой группе больных коррекция протеиназноингибиторного баланса в очаге поражения позволила сократить частоту возникновения гнойно-септических осложнений и снизить летальность в 1,9 раза по сравнению с общим показателем при этой патологии.

Выводы. Локальная коррекция протеиназно-ингибиторного баланса в очаге поражения у больных панкреонекрозом приводит к восстановлению защитного ингибиторного потенциала внутренней среды организма, купирует чрезмерную активацию протеолиза и улучшает исходы заболевания.

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА SPP1 (RS11728697) У БОЛЬНЫХ ИММУНОЗАВИСИМЫМИ БОЛЕЗНЯМИ.

В.С. Павлов, Е.С. Сибирекова

ФГБУ "НИИ медицинской генетики" СО РАМН, г. Томск Лаборатория популяционной генетики Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра медицинской генетики

Актуальность. Бронхиальная астма (БА) и туберкулёз (ТБ) – широко распространённые мультифакторные заболевания. Согласно эпидемиологическим данным БА и ТБ редко проявляются вместе у одного индивида, что позволяет рассматривать их, как возможную дистропию – взаимоисключение болезней на клиническом уровне.

Ген остеопонтина (SPP1), локализованный на длинном плече 4-ой хромосомы (4q22.1) играет значимую роль в развитии многих, в том числе иммуннозависимых болезней. Остеопонтин является цитокином преимущественно вовлеченным в Th1 иммунный ответ, повышая экспрессию интерферона гамма и интерлейкина 12. Высокий уровень остеопонтина обнаруживается в сыворотке крови у пациентов с ТБ, который значительно снижается после антимикобактериальной терапии. Однако в опыте на мышах, показано, что продукт гена SPP1 также оказывает воздействие на реакции Th2-пути, способствуя развитию аллергических заболеваний. Известно, что у людей, страдающих аллергической БА, происходит повышение экспрессии этого гена, а его выраженность прямо связана с тяжестью заболевания.

Таким образом, ген SPP1 может быть задействован в развитии разных иммунозависимых заболеваний и интересен с точки зрения исследования дистропных отношений между ними.

Цель. Оценка роли полиморфизма гена SPP1 (rs11728697) в развитии БА и ТБ. Материалы и методы. Для исследования использованы образцы банка ДНК ФГБУ «НИИ медицинской генетики» СО РАМН. Выборку составили больные ТБ (n=268), больные БА (n=159) и здоровые индивиды (n=193). Генотипирование проводили с помощью ПЦРПДРФ анализа, применяя праймеры (ООО «Биоссет»), фланкирующие искомый участок гена SPP1 (rs11728697) и эндонуклеазу рестрикции (Hae III, НПО «Сибэнзим»). Продукты

240

амплификации и рестрикции визуализировали в 3%-агарозном геле, через проходящий пучок УФ-света. Для статистических расчетов использовали доступный on-line ресурс http://ihg2.helmholtz-muenchen.de.

Результаты. В контрольной группе наблюдаемое распределение генотипов для полиморфного варианта гена SPP1 (rs11728697) соответствует ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (р>0,05). Частоты генотипов и аллелей в исследуемых выборках соответствовали частотам для других европеоидных популяций, изученных в проекте 1000 Genomes (http://www.1000genomes.org/).

У больных БА, ТБ и здоровых наиболее распространен гетерозиготный генотип варианта гена SPP1 (rs11728697), его частота варьировала от 45,08% (у здоровых) до 49,69% (у больных БА). Гомозиготный генотип СС наиболее часто встречался в группе пациентов с БА (17,61%), в отличие от больных ТБ, где частота данного генотипа составила 15,67%. Аллель Т встречался в исследуемых группах с частотой 57,55% у больных БА, 59,89% у больных ТБ и 60,88% у здоровых. Однако при сравнении пациентов с БА, ТБ и здоровых индивидов значимых отличий в частотах аллелей и генотипов для варианта гена SPP1 (rs11728697) не обнаружено (р>0,05).

Выводы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют об отсутствии связи полиморфного варианта гена SPP1 (rs11728697) с развитием БА и ТБ.

ДЕКАЛЬЦИНАЦИЯ КОСТИ В ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕХНИКЕ

Е.Д. Порохова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра морфологии и общей патологии

Актуальность. В экспериментальной и клинической практике нередко необходимо исследовать детали строения минерализованных тканей (костной ткани, ткани зуба). Не менее важными являются и исследования патологических процессов в этих тканях. Но работа с таким материалом считается достаточно трудной, так как приготовление микропрепарата проводится по особой методике. Методика эта включает не только традиционные, хорошо описанные в профессиональной литературе действия, но и специфические манипуляции (приготовление шлифа, декальцинация), которые необходимо проводить с учетом особенностей изучаемого материала, а также ориентируясь на цели конкретного исследования. Существует большое количество методик проведения декальцинации, описанных в профессиональной литературе. Авторы описывают декальцинацию для разных минерализованных тканей с использованием различных реагентов. Каждая из этих методик разрабатывается автором с учетом целей эксперимента и имеет свои плюсы и минусы.

Цель. Рассмотреть преимущества и недостатки основных способов декальцинации, а также методы определения окончания декальцинации и способы ускорения этого процесса. На основе полученных данных разработать методику приготовления микропрепарата костного материала.

Материалы и методы. Исследование проводилось на половозрелых крысах породы Wistar. Материал (эпифиз бедренной кости и грудина) извлекался из организма животного тотчас же после умерщвления. Животные выводились из эксперимента путем декапитации с соблюдением этических норм. Далее материал фиксировался в раствор 10% нейтрального формалина. После фиксации образцы переносились в декальцинирующий раствор, содержащий 2 части концентрированной муравьиной кислоты и 8 частей 10%- ого нейтрального формалина. Декальцинат меняли раз в сутки, а для определения момента окончания декальцинации использовали оксалатный тест.

Декальцинация в этих условиях проводилась тремя способами: 1)при температуре 25 °C до полного удаления минералов.

241

2)при температуре 25 °C, сохранив небольшое количество минералов. 3)при температуре 37 °C до полного удаления минералов.

По окончании декальцинации проводилась необходимая деацидификация (удаление кислоты) всех образцов. Далее материал обезвоживался, заливался в парафин, делались срезы на микротоме. Нами использовался метод обзорной окраски гематоксилином и эозином.

Результаты. Декальцинация при 37 °C до полного удаления минералов проходила быстрее, чем при комнатной температуре, но привела к повреждению материала. Кости, которые декальцинировались не до конца, с трудом резались на микротоме. Наиболее подходящим оказался способ декальцинации до полного удаления солей кальция при 25 °C. Этот метод позволил получить в короткие сроки (4-5 дней) достаточно качественные микропрепараты кости (грудины и эпифиза бедренной кости). Образцы легко резались на микротоме мягким лезвием. Результат окраски также оказался вполне удовлетворительным. Нами была отмечена хорошая сохранность костной ткани и красного костного мозга при использовании выбранного нами метода.

Выводы. При условии, что соблюдён температурный режим, а время декальцинации не превышает необходимое, использование смеси муравьиной кислоты и формальдегида наиболее приемлемо. Такая смесь мало влияет на качество окрашивания препаратов гематоксилином и эозином, декальцинирует быстро и не вызывает набухания тканей. В экспериментах, где нет необходимости проводить гистохимическое выявление ферментов ткани, смесь муравьиной кислоты и формальдегида можно считать наиболее подходящим декальцинирующим агентом.

РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ И ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ NOСИНТАЗ В РАЗВИТИИ РЕСТЕНОЗА, СТЕНОЗИРУЮЩЕГО АТЕРОСКЛЕРОЗА И ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА

Л.Ю. Прончина

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Центральная научно-исследовательская лаборатория Сектор молекулярной биологии

Актуальность. В основе патогенеза ишемической болезни сердца (ИБС) лежит стенозирующий атеросклероз (СА) коронарных артерий. Просвет пораженного сосуда уменьшается за счет образования атеросклеротических бляшек и интенсивного разрастания соединительной ткани, что приводит к нарушению коронарного кровотока и поражению миокарда. Хирургическое лечение ИБС направлено на восстановление нормального кровотока в пораженной артерии путем установки в нее упругого цилиндрического каркаса – стента. В ряде случаев происходит повторное сужение стентированного сосуда, данный вид осложнения называется рестенозом стента после коронарной ангиопластики.

Гены NO-синтаз являются кандидатными для развития ИБС, СА и рестеноза стентов, поскольку оксид азота NO оказывает сосудорасширяющее действие, влияя на высвобождение вазоактивных медиаторов, участвует в процессах тромбообразования и регуляции ремоделирования стенки сосуда. Для выявления роли генов NO-синтаз в развитии ИБС, СА и рестеноза проведено исследование пяти полиморфизмов гена эндотелиальной NO-синтазы (eNOS): VNTR, 894G/C, -786T/C, -691C/T, 774C/T и полиморфизма (CCTTT)n гена индуцибельной NO-синтазы (iNOS).

Цель. Установить полиморфизм генов eNOS и iNOS, связанный c риском развития ИБС, СА и рестеноза стентов.

Материалы и методы. Материалом исследования служили образцы ДНК больных ИБС (n=485), в контроле использовали образцы ДНК практически здоровых людей (n=280);

242

образцы ДНК больных СА (n=307) и без СА (n=78); образцы ДНК больных рестенозом (n=30) и без рестеноза (n=74). Выделение геномной ДНК проводили методом фенолхлороформной экстракции. Исследование генотипа осуществляли методом ПЦР с последующей рестрикцией. Для статистической обработки использовали пакеты программ “Statistica for Windows 6.0”,«Statcalc» и «Arlequin 3.1».

Результаты. Установлены генотипы, увеличивающие риск развития ишемической болезни сердца: генотип ab полиморфизма VNTR гена eNOS, генотип GT полиморфизма 894G/T гена eNOS, генотипы TC и CC полиморфизма 786T/C гена eNOS, генотип CT полиморфизма 774C/T гена eNOS, генотип (14/14) по числу повторов равному 14 полиморфизма (ССТТТ)n гена iNOS; выявлены генотипы, увеличивающие риск развития рестеноза стентов после коронарной ангиопластики: генотипы аа и ab полиморфизма VNTR гена eNOS, генотипы TT и GT полиморфизма 894G/T гена eNOS, генотип CT полиморфизма 691C/T гена eNOS, наличие аллеля T полиморфизма 774C/T гена eNOS; выявлены генотипы, увеличивающие риск формирования стенозирующего атеросклероза: генотип аb полиморфизма VNTR гена eNOS, генотипы TC и CC полиморфизма 786T/C гена eNOS, генотипы CT и TT полиморфизма 691C/T гена eNOS, генотипы CT и TT полиморфизма 774C/T гена eNOS.

Выводы. Гены эндотелиальной и индуцибельной NO-синтаз вовлечены в патогенез ишемической болезни сердца, стенозирующего атеросклероза и рестеноза стентов после коронарной ангиопластики. Для выявления молекулярных механизмов развития заболеваний необходимо дальнейшее изучение структуры и функции NO-синтаз.

РОЛЬ СЕРОВОДОРОДА В РЕГУЛЯЦИИ СА2+ ЗАВИСИМОЙ K+ ПРОНИЦАЕМОСТИ МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

Ю.А. Розенбаум, И.Н. Мосунов

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра биофизики и функциональной диагностики

Актуальность. Газовые трансмиттеры, к которым относятся сероводород, оксид азота, оксид углерода, рассматриваются в последние годы как регуляторы ряда физиологических функций организма человека. Эти молекулы, в том числе сероводород, регулируют ионную транспортную систему клеток. Мембрана эритроцитов содержит Са2+ активируемые K+ каналы, которые играют важную роль в эриптозе – программируемой гибели эритроцитов. Известно, что при ряде патологий время жизни эритроцитов снижено. В связи с этим изучение влияния различных физических и химических факторов на ион-транспортные системы клеток представляется весьма актуальным.

Цель. Изучение влияния сероводорода на Са2+ зависимую K+ проницаемость мембраны эритроцитов человека.

Материалы и методы. Для исследования Са2+ активируемых K+ каналов был применен метод регистрации мембранного потенциала в суспензии эритроцитов по изменениям рН среды инкубации в присутствии протонофора, основанный на том, что в этих условиях распределение протонов зависит от мембранного потенциала Em как Em = RT/F (pHi – pH0). Здесь рНi и pH0 значения рН цитоплазмы и среды инкубации, соответственно. Для получения гиперполяризационного ответа к 4,75 мл среды инкубации (среда N), содержащей 150 мМ NaCl, 1 мМ KCl, 1мM MgCl2, 10 мM глюкозы, добавляли 0,25 мл упакованных эритроцитов. Через 5 мин инкубации при 37ºС и постоянном перемешивании добавляли протонофор Сl-ССР до конечной концентрации 20 мкМ и спустя 2 мин добавляли 0,5 мкМ Са2+ ионофора А23187. Добавление кальциевого ионофора А23187 к суспензии клеток, содержащей хлорид кальция, приводило к выходу ионов калия и развитию гиперполяризационного ответа (ГО) мембраны эритроцитов, что находило свое отражение в изменении рН суспензии. В исследовании использовалась кровь 5

243

практически здоровых доноров. Из полученной крови выделяли эритроциты методом центрифугирования. В качестве донора сероводорода был использован гидросульфид натрия (NaHS). Гиперполяризационный ответ мембраны эритроцитов вызывали различными концентрациями NaHS (1-150 мкМ). Оценку результатов проводили методом рН-метрии по приведённой выше методике.

Результаты. Добавление в среду инкубации эритроцитов NaHS в концентрациях от 1µМ до 10 µМ не вызывало изменения амплитуды ГО. Увеличение концентрации NaHS от 1 µМ до 150 µМ приводило к закономерному снижению амплитуды ответа, что свидетельствует о подавлении активности Са2+ активируемых K+ каналов. Причиной полученного эффекта может быть влияние H2S на белки ионного канала, что снижает его проводимость. Однако не исключаем, что сероводород действует на другие ион-транспортные системы, обеспечивающие поддержание градиента ионов калия, что необходимо для работы Са2+ активируемых K+ каналов. Одной из таких систем является NaK-Cl- -котранспорт.

Таким образом, в настоящем исследовании установлено, что сероводород изменяет перенос ионов калия через Са2+ активируемые K+ каналы мембраны эритроцитов. Одной из причин этого может быть непосредственное влияние сероводорода на белки ионного канала. Другой причиной может быть воздействие сероводорода на другие ионтранспортные системы клетки, в частности, NaK-Cl--котранспорт, которые создают градиент ионов калия на мембране клеток.

Выводы. Таким образом сероводород может непосредственно влиять на белки Са2+ активируемых K+ каналов, уменьшая его проводимость, либо через модуляцию активности NaK-Cl- - котранспорт.

МИТОХОНДРИИ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ В КАЧЕСТВЕ МИШЕНИ ДЛЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ ИМПУЛЬСНОГО РЕНТГЕНОВСКОГО ИЗЛУЧЕНИЯ

У. Рустамбек

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра нормальной физиологии Институт сильноточной электроники СО РАН, г. Томск Отдел физической электроники

Актуальность. Повреждение ядерной ДНК клетки является основной причиной биологических эффектов ионизирующего излучения, в том числе рентгеновского. Однако к настоящему времени появились экспериментальные данные, свидетельствующие о «внеядерных» радиационных эффектах рентгеновского излучения, в частности о значительной роли в этом митохондрий. Изменения функционирования митохондрий относят в большей степени к воздействиям рентгеновского излучения генерируемого в неимпульсном режиме. В тоже время, в различных сферах человеческой деятельности, в том числе и в медицине, начинают использоваться источники рентгеновского излучения, генерирующие импульсы малой, в том числе наносекундной длительности. Поэтому представляет интерес изучение влияния на митохондрии импульсно-периодического рентгеновского излучения (ИПРИ) и сопоставление полученных результатов с эффектами действия непрерывного излучения, влияние которого изучено лучше.

Цель. Изучить влияние ИПРИ на дыхание митохондрий гепатоцитов мышей и сопоставить полученные данные с эффектами действия непрерывного рентгеновского излучения.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на изолированных методом дифференциального центрифугирования митохондриях из печени беспородных белых мышей-самцов массой 25–30 г. Исследовалось влияние ИПРИ с частотой повторения импульсов в диапазоне 10–22 за секунду, дозой в импульсе 0.3 и 1.8 мГр и суммарной поглощенной дозой за сеанс облучения (4 000 импульсов) до 7.2 мГр на скорость

244

потребления кислорода митохондриями в различных метаболических состояниях по Чансу и по коэффициенту дыхательного контроля. В качестве источника ИПРИ использовалось тормозное излучение ускорителя Синус–150, который был разработан в Институте сильноточной электроники СО РАН (г. Томск).

Результаты. В результате проведенных экспериментов было показано, что ИПРИ может изменять скорость дыхания митохондрий в разных состояниях по Чансу. Изменение функционального состояния митохондрий после воздействия ИПРИ зависело от частоты повторения импульсов и дозы. Скорость дыхания митохондрий на сукцинате снижалась при всех режимах воздействия ИПРИ. При этом увеличение дозы рентгеновских импульсов и частоты их повторения сопровождалось снижением ингибирующего эффекта ИПРИ на скорость потребления кислорода митохондриями в нефосфорилирующем состоянии на экзогенном субстрате, а при добавлении АДФ ингибирующее влияние этого фактора увеличивалось (от 15 до 50 % относительного группы ложного облучения). В то же время коэффициент дыхательного контроля, отражающий степень сопряжения процессов окисления и фосфорилирования уменьшался при большинстве из использованных доз и частот. Это указывает на ухудшение функционального состояния митохондрий, разобщение окисления и фосфорилирования и снижение возможности продукции АТФ.

Выводы. Полученные данные позволяют сделать заключение о значительной эффективности воздействия импульсно-периодического рентгеновского излучения на функционирование митохондрий. Для действия непрерывного рентгеновского излучения на митохондрии гепатоцитов, согласно найденным литературным данным, необходимы бόльшие дозы облучения. Например, в соответствии с результатам исследователей, скорость фосфорилирования уменьшается на 30–50% после облучения в дозах 0,5 и 1,0 Гр. и при действии дозой в 2 Гр. Также утверждают, что при облучении митохондрий до дозы 6-10 Гр нет изменений в скорости поглощения кислорода. Таким образом, в сравнении с непрерывным излучением, импульсный режим рентгеновского излучения оказался более эффективным в отношении изменения функционального состояния митохондрий гепатоцитов.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПЕЧЕНИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ (ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ) ПРИ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ

У. Рустамбек

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра морфологии и общей патологии Центральная научно-исследовательская лаборатория

Актуальность. На территории Томской области и прилегающих областях определяется гиперэндемичный очаг описторхоза. В этой связи поиск морфологических предикторов развития описторхозной инвазии является актуальным для оценки влияния метаболитов O. Felineus на структурные изменения в печени.

Цель. Целью работы является изучение морфофункционального состояния печени экспериментальных животных на разных сроках описторхозной инвазии.

Материалы и методы. Для данного исследования были взяты 7 золотистых хомяков, выведенные из эксперимента на 24 неделе после заражения, среди которых было 2 контрольных и 5 опытных животных. С целью уточнения конкретной локализации патологического процесса в паренхиме печени у животных гистологический материал забирался из области ворот, правой и левой доли печени. Гистологический материал печени фиксировался в 10% нейтральном формалине в течение 24 часов, обезвоживался с помощью изопрепа (абсолютизированного изопропилового спирта смешенного с

245

Тритоном Х15 в соотношении 1:10000, заливался в парафин по стандартной методике. Срезы толщиной 4–5 мкм получали при помощи санного микротома МЗП-01 Техном.

Для оценки паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в печени экспериментальных животных гистологические препараты окрашивались с помощью гематоксилина и эозина и изучались с использованием бинокулярного светового микроскопа Сarl Zeiss Axioskop 40 FL. При обзорной микроскопии оценивались воспалительные, пролиферативные, дисрегенераторные и фиброзные процессы в паренхиме и строме печени.

Результаты. При проведении световой микроскопии в печени золотистых хомяков на 24 неделе эксперимента нами констатировались воспалительные, сосудистые и некротические изменения в паренхиме печени с нарушением строения органа. Синусоидные капилляры в печеночной дольке расширены, центральные вены полнокровны с признаками реологических расстройств в виде стаза, сладжа и тромбоза. Междольковые вены в печеночной триаде расширены и полнокровны, эндотелиоциты набухшие с признаками внутриклеточного отека, что нередко сочеталось с формированием диапедезных кровоизлияний. В дольке печени выявлялись периваскулярные, очаговые полиморфноклеточные инфильтраты с преобладанием лимфоцитов. Воспалительные изменения в паренхиме печени приводили к развитию белковой и жировой дистрофии гепатоцитов с последующим некрозом. Морфологические изменения, наблюдаемые в паренхиме печени, наиболее выражены в правой доле. В этой группе экспериментальных животных в паренхиме печени выявлялись участки некроза с обнаружением печеночных клеток с кариорексисом и цитолизом.

Выводы. Таким образом, у экспериментальных животных при воздействии O. Felineus в паренхиме печени нами обнаружены воспалительные и некротические изменения, которые связаны с токсическим воздействием метаболитов печеночного сосальщика прежде всего глиоксаля, который может вызвать гликозилирование ДНК и белков с последующим ее хроматолизом, приводящим к некрозу гепатоцитов.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ НЕЙРОГЛИАЛЬНОГО КОМПЛЕКСА ЗАТЫЛОЧНОЙ ДОЛИ КОРЫ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ ПРИ ТРАНЗИТОРНОЙ ИШЕМИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА, КОРРЕКЦИЯ ДИБОРНОЛОМ

Ю.О. Свердева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии

Актуальность. Согласно официальным материалам Министерства здравоохранения России за последние годы, смертность от болезней системы кровообращения занимает первое место и при этом продолжает неуклонно расти. Смертность от инсульта находится на втором месте, уступая лишь смертности от ишемической болезни сердца. Ишемические инсульты составляют 70-85 % от всех случаев инсульта. Ведущей стратегией лечения на сегодняшний день является тромболитическая терапия. В результате реперфузии головного мозга усиливаются процессы свободнорадикального окисления, что ведет к неизбежному повреждению сосудистой стенки и клеток головного мозга. Одной из приоритетных задач на современном этапе развития медицины является поиск антиоксидантов-нейропротекторов, которые позволили бы ограничить очаг ишемического повреждения.

Цель. Изучить влияние антиоксиданта диборнола в условиях реперфузионного повреждения головного мозга на модели тотальной транзиторной ишемии.

Материалы и методы. Эксперименты выполнены на 30 беспородных половозрелых крысах-самцах массой 180-200 г. Животных первой и второй групп за сутки до ишемии головного мозга наркотизировали этаминалом-натрия в дозе 60 мг/кг массы тела и производили термокоагуляцию обеих вертебральных артерий на уровне первого шейного

246

позвонка. Ишемию производили путем пережатия общих сонных артерий в течение 30 минут под эфирным наркозом. Реперфузию воспроизводили снятием окклюдеров. Крысы первой группы n=10 получали 1 мл 1% крахмальной слизи, животные второй (опытной) группы n=10 получали внутрижелудочно диборнол в дозе 100 мг/кг массы тела один раз в сутки в течение 7 дней. Первое введение препарата осуществляли через один час после моделирования ишемии. Контрольную группу составили ложнооперированные животные n=10. На восьмые сутки производили декапитацию под эфирным наркозом. На отвесных парафиновых срезах затылочной области коры, окрашенных крезиловым фиолетовым по Нисслю, проводили морфоколичественный анализ нейрональной и глиальной популяции IV слоя коры.

Результаты. На восьмые сутки после острой ишемии головного мозга достоверно возрастает количество нейронов с морфологическими изменениями по сравнению таковым у ложнооперированных животных. Увеличивается количество нейронов с обратимыми изменениями: в 6,3 раза (р<0,05) – с очаговым центральным хроматолизом, в 3,7 раз (р<0,05) - с периферическим. Содержание деструктивных нейронов также возрастает: в 4,6 раза (р<0,05) - гиперхромных нейронов со сморщиванием ядра и в 2,5 раза (р<0,05) - клеток с тотальным хроматолизом. Морфометрический анализ показал достоверное снижение всех исследуемых показателей в группе леченных диборнолом животных. Помимо нейрональной популяции в процессе реперфузионного повреждения значимую роль играют глиальные клетки. Выявлено, что вследствие антиоксидантного действия диборнола снижается количество гиперхромных глиоцитов со сморщиванием ядра в 2 (р<0,05) раза, без сморщивания в 1.3 (р<0,05) раза.

Выводы. Таким образом, антиоксидант из группы экранированных фенолов диборнол способен ограничивать очаги реперфузионного повреждения головного мозга и оказывать нейропротективное действие.

ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ НЕЙРОБЛАСТОВ И ГЛИОБЛАСТОВ МОЗГА ЭМБРИОНА ПРИ АЛКОГОЛИЗАЦИИ МАТЕРИНСКОГО ОРГАНИЗМА

Ю.И. Сероштан

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии

Актуальность. Актуальность медицинских и социальных проблем, связанных с употреблением алкоголя и алкоголизмом, постоянно возрастает. В связи с вероятностью развития психической патологии в потомстве больных алкоголизмом большой интерес представляет женский алкоголизм. Хорошо известны факты, когда злоупотребление алкоголем приводит к появлению на свет детей со значительными сомато– неврологическими и психическими аномалиями. До сих пор многие вопросы физиологического и морфологического развития мозга человека в норме и при патологии остаются мало изученными. Недостаточно изучены особенности развития нейронов и глиоцитов головного мозга человека и влияние на этот процесс алкоголя.

Цель. Изучить особенности строения нейробластов и глиобластов коры развивающегося мозга при алкоголизации материнского организма.

Материалы и методы. Изучались эмбрионы 10-11 недель развития, которые были взяты во время операции по прерыванию беременности. Всего было получено 13 эмбрионов: 8 – от больных алкоголизмом женщин (основная группа) и 5 – от здоровых женщин (контрольная группа). Возраст больных алкоголизмом женщин был 26-39 лет, длительность заболевания - от 3 до 13 лет. Возраст женщин контрольной группы был аналогичен таковому у больных матерей. Все процедуры выполнялись с учетом требований этического комитета.

247

Головной мозг эмбрионов фиксировали в 0,5% растворе глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,3 – 7,4, дофиксировали в 1% растворе OsO4 и заливали в аралдит. Для морфометрии использовали полутонкие срезы, окрашенные метиленовым синим. На препаратах подсчитывали площадь нейро - и глиобластов, их количество на единицу площади, а также глионейрональный индекс в контрольной и основной группах. Для статистической обработки данных использовали программу Statistica 6.0.

Результаты. При изучении мозга эмбрионов основной и контрольной групп было установлено, что в период 10-11 недель развития мозговая ткань является достаточно хорошо структурно сформированной, выявляются нейробласты и глиобласты. Нейробласты выглядят как клетки округлой формы, располагающиеся группами. Центрально располагающиеся ядра со светлым матриксом занимают основной объем их перикариона и содержат 1-3 мелких ядрышка. Базофильное вещество цитоплазмы и нейрофибриллы не прослеживаются. Идентификация начального сегмента аксона затруднена. Глиобласты лежат между группами нервных клеток, имеют так же округлую форму и высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение. В их ядрах наблюдаются участки повышенной электронной плотности в виде зерен и нитей хроматина и содержатся крупные хорошо окрашенные ядрышки, занимающие центральное положение. Появляются глиобласты, контактирующие с нейробластами. Встречаются участки, на которых глиобласты располагаются группами, окружая нейробласты. В изучаемые нами сроки сосуды головного мозга представлены капиллярами с тонкой стенкой. Появляется базальная мембрана, которая представлена рыхлым волокнистым материалом. Начинается дифференцировка сосудов на артериальные и венозные. В формировании корковых слоев большую роль играют радиальные глиоциты. По их отросткам происходит миграция нейронов и образуются поверхностные слои коры. В нашем исследовании на некоторых участках развивающегося головного мозга в период 10-11 недель развития хорошо заметна миграции нейробластов вдоль глиальных волокон.

Выводы. Таким образом, при сравнении материала основной и контрольной групп было отмечено, что многие клеточные элементы эмбрионального мозга, в тех случаях, когда он развивался в организме больной алкоголизмом матери, не имели существенных отличий от нормы.

КАРДИОПРОТЕКТОРНЫЙ ЭФФЕКТ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОСТКОНДИЦИОНИРОВАНИЯ НА МОДЕЛИ ИЗОЛИРОВАННОГО СЕРДЦА.

Н.Г. Сковородникова

ФГБУ "НИИ кардиологии" СО РАМН, г. Томск Лаборатория экспериментальной кардиологии

Актуальность. Ишемическим посткондиционированием (ИП) принято называть повышение устойчивости органов и тканей к повреждающему действию постишемической реоксигенации, достигаемое с помощью нескольких сеансов кратковременной ишемии на фоне реперфузии. Феномен ИП был открыт в 2003 г группой физиологов из Атланты (США) в опытах in vivo на собаках. Позднее было установлено, что ИП можно воспроизвести и в экспериментах на изолированном перфузируемом сердце.

Ряд исследователей в экспериментах на изолированном перфузируемом сердце использовали троекратно чередующиеся сеансы реперфузии (30с) и ишемии (30с). Другие авторы применяли три цикла реперфузии-ишемии по 10 с каждый. Нередко используют 6 таких циклов. Вместе с тем, некоторым исследователям в экспериментах на изолированном перфузируемом сердце крыс не удалось воспроизвести феномен посткондиционирования ни по одному из использованных протоколов. Таким образом, общепринятой модели ИП на сегодня не существует.

248