Сборник статей 2014

начала моделирования. Активность АДФР-циклазы определяли в гомогенате ткани по методу R. M. Graeff и соавт. (Graeff R.M, 1994). Статистический анализ проводился с использованием критерия Манна-Уитни.

Результаты. АДФР-циклазная активность клеток среднего мозга при пренатальном воздействии ротенона значимо (p=0,034) двукратно увеличивалась в экспериментальной (0,79±0,19 ед/мин*мг белка) группе в сравнении с контрольной (0,31±0,04 ед/мин*мг белка). В ротеноновой модели болезни Паркинсона также выявлено значимое (p=0,011) 2- кратное усиление АДФ-рибозилциклазной активности (0,04±0,01 ед/мин*мг белка), в отличие от контроля (0,02±0,01 ед/мин*мг белка).

Выводы. Токсическое воздействие ротенона на клетки среднего мозга как в пренатальном периоде, так и во взрослом состоянии при хронической нейродегенерации приводит к повышению активности данного фермента, что позволит рассматривать этот фермент как потенциальный маркер хронической нейродегенерации.

ВЛИЯНИЕ БОС-ТРЕНИНГА ПО КАПНОГРАФИИ НА СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА С ОЦЕНКОЙ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ СЕРДЕЧНОГО РИТМА И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА ЭЭГ

Е.М. Вабищевич, Г.А. Тазрашева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра медицинской и биологической кибернетики

Актуальность. Человеческий организм не может обходиться без кислорода. Снижение его поступления приводит к нарушениям деятельности отдельных клеток и организма в целом, вызывая усталость, плохое самочувствие. Правильное дыхание необычайно важно для здоровья. Известны так называемые целебные дыхательные методики (по Стрельниковой, Фролову, Ниши, «Бодифлекс» и др.), которые помогают укрепить здоровье. Необходимо понимать как принципы положенные в разные методики способны влиять на состояние организма, т.к дыхание является основной функцией организма, обеспечивающей гомеостаз газов крови. Изменение функционального состояния организма приводит к изменению состава газов в крови, которое меняет и тип дыхания. Полагаем, что существует обратный процесс позволяющий изменять функциональное состояние организма по изменению дыхательных движений, в частности сохраняя газовый состав выдыхаемого воздуха изменять частоту дыхательных движений по отношению к спокойному дыханию.

В работе предполагается исследовать влияние БОС-тренинга по капнографии на изменение функционального состояния организма с применением метода оценки вариабельности сердечного ритма и проведение анализа ЭЭГ, для понимания влияния состава газовой смеси на процессы, протекающие в ЦНС.

Цель. Провести исследование вариабельности сердечного ритма и анализ ритмов ЭЭГ в условиях БОС-тренинга по капнографии.

Материалы и методы. В исследовании приняли участие студенты СибГМУ, возраст 17-23 г., женского пола.

Протокол исследования: психологическое тестирование; фоновая запись (ЗГ1,ОГ1) не менее 40 сек. до БОС-тренинга; БОС1 снижение частоты дыхания с сохранением состава выдыхаемого воздуха; БОС2 увеличение частоты дыхания с сохранением состава выдыхаемого воздуха; фоновая запись (ЗГ2, ОГ2) не менее 40 сек. после БОС-тренинга. Запись ЭКГ выполнялась в I стандартном отведении, запись ЭЭГ выполнялась в соответствии со стандартной схемой 10-20% на энцефалографе-анализаторе «ЭНЦЕФАЛАН-131.09», также для оценки дыхательного ритма регистрировали кривую дыхания с помощью датчика ДГ-1. Статистический анализ выполняли с помощью пакета R-3.0.2, подготовку данных и математическую обработку выполняли с помощью пакета

219

MatLab 7.14 и Excel. Данные представлены в виде среднее ± стандартное отклонение (М±m).

Результаты. В ходе проведенной работы получили снижение индекса ИВР (125±50) и ИН (45±25) в состоянии БОС-1 и увеличение в БОС-2 ИВР (325±50) и ИН (110±25) по сравнению с состоянием спокойного бодрствования. Пульс в процессе исследования практически не меняется (54-58). Индекс вегетативного равновесия – отражает повышение активности симпатической нервной системы над парасимпатической вегетативной нервной системой, индекс напряжения – отражает повышенную степень централизации управления ритмом сердца за счет симпатической нервной системы. Анализ ЭЭГ показал, что до БОС-тренинга среднее значение альфа-ритма в левом полушарии (ЛП) 33±7,2 и в правом полушарии (ПП) 31±7,4, тета-ритма (11±5,4; 14±5,7), бета2-ритма (2±1,8; 1±1,2). В процессе БОС-1 тренинга в ЛП и в ПП альфа-ритм снижается (5±3,3; 9±4,7) и тета-ритм снижается (6±4,2; 8±4,6), бета2-ритм повышается(4±2,1; 3±2,3) по сравнению с фоном до БОС. В процессе БОС-2 тренинга в ЛП и в ПП альфа-ритм снижается (8±4,1; 12±4,7) и тета-ритм повышается (16±4,6; 19±4,9), бета2-ритм повышается (5±2,1; 4±3,4) по сравнению с фоном до БОС. В фоне после БОС-тренинга показатели принимают такие же значения как до БОС тренинга, но показатели бета2-ритма увеличились и составили в ЛП 6±2,3 и в ПП 7±2,7. В ходе исследования ритмов головного мозга получили, что БОС1тренинг активирует низкочастотные ритмы, которые можно рассматривать как релаксирующее, БОС-2 активирует высокочастотную активность мозга, характерную для состояния активного бодрствования. Таким образом, предложенная методика БОСтренинга позволяет изменять уровни функционирования головного мозга.

Выводы. Обнаруженные изменения в распределении индексов указывают на преобладание парасимпатической системы в ходе БОС-1 тренинга и расцениваются как тренинг с расслаблением, а применение БОС-2 тренинга увеличивает индексы практически до уровней преобладания симпатической системы, что отражает механизм напряжения.

Таким образом, БОС-тренинг позволяет, управляя системой дыхания, изменять уровень функционального состояния организма и воздействовать на активность головного мозга.

ЭКСПРЕССИЯ ТРАНСКРИПЦИОННЫХ ФАКТОРОВ RORC2 И FOXP3 В ЛИМФОЦИТАХ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

М.В. Винс

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра патофизиологии

Актуальность. К настоящему времени установлено, что в основе дифференцировки различных субпопуляций Т-лимфоцитов лежат процессы, связанные с регуляцией экспрессии генов. Главная роль здесь принадлежит транскрипционным факторам, которые являются конечными белковыми продуктами процесса сигнальной трансдукции – последовательных внутриклеточных сигнальных каскадов [Ярилин А.А., 2010]. При этом дифференцировка Т-лимфоцитов-хелперов (Th) типа 17, участвующих в формировании противотуберкулезного иммунитета, определяется транскрипционным фактором RORC2, регуляторных Т-лимфоцитов (Treg), приводящих к развитию иммуносупрессии, – Foxp3 [Noma T., 2010; Донецкова А.Д. и соавт., 2011]. Несмотря на предположение, что дифференцировка и пролиферация этих клеток осуществляется в результате скоординированной активности цитокинов и транскрипционных факторов, регуляция этих процессов в целом остается неясной, а при развитии инфекционных заболеваний человека, в частности туберкулеза легких, не изучена вовсе.

Цель. Оценить экспрессию транскрипционных факторов RORC2 и Foxp3 в лимфоцитах при различных клинических формах туберкулезной инфекции.

220

Материалы и методы. В программу исследования вошли 27 пациентов с распространенными деструктивными формами впервые выявленного туберкулеза легких (ТЛ) (19 мужчин и 8 женщин в возрасте от 20 до 55 лет, средний возраст 38,5±1,4 года). Контрольную группу составили 15 здоровых доноров. Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из венозной крови проводили методом центрифугирования на градиенте плотности фиколла (ρ=1,077 г/см3). Выделение тотальной РНК из мононуклеарных лейкоцитов осуществляли сорбентно-колоночным методом согласно инструкции производителя («QIAGEN», Германия). Используя обратную транскриптазу MMLV-RT («Синтол», Россия), проводили синтез кДНК на РНК-матрице. Полученный фрагмент кДНК амплифицировали методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РТ) с использованием интеркалирующего флуоресцентного красителя SYBR Green I («Синтол», Россия) на амплификаторе «DTprime (ДТ-96)» («ДНК-технология», Россия). Результаты выражали в относительных единицах (отношение числа циклов амплификации исследуемого гена к количеству циклов амплификации гена «домашнего хозяйства» (β-актина)). Статистический анализ полученных результатов осуществляли с помощью пакета прикладных программ «Statistica for Windows» Version 8.0 («StatSoft Inc.», США).

Результаты. В результате проведенного исследования у пациентов с инфильтративным и диссеминированным лекарственно-чувствительным ТЛ установлено повышение экспрессии в лимфоцитах транскрипционного фактора RORC2 (маркера Th17-клеток) по сравнению с таковым у здоровых доноров в 2,1 (р=0,01) и 1,9 (р=0,05) раза соответственно. Уровень экспрессии мРНК транскрипционного фактора Foxр3, ответственного за дифференцировку Treg, у пациентов с лекарственно-устойчивым ТЛ (вне зависимости от клинической формы заболевания) составил в среднем 0,51 отн. ед., что достоверно превышало данный показатель в группе здоровых лиц.

Выводы. У больных с инфильтративным и диссеминированным туберкулезом легких регистрируется повышение экспрессии мРНК транскрипционного фактора RORC2 при лекарственно-чувствительном варианте заболевания и мРНК транскрипционного фактора Foxр3 – в случае лекарственной устойчивости возбудителя.

УЧАСТИЕ HSP27 И HSP70 В ПОДДЕРЖАНИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ ЛИНИИ JURKAT

В.С. Гулая. А.И. Наумова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра молекулярной медицины и клинической лабораторной диагностики Кафедра биохимии и молекулярной биологии Научно-образовательный центр молекулярной медицины

Актуальность. В настоящее время одно из первых мест среди социально-значимых патологий занимают злокачественные новообразования, патогенез которых, кроме нарушения регуляции клеточной гибели, сопряжен с формированием окислительного стресса. Наряду с наличием окислительного стресса при опухолевой прогрессии установлена гиперэкспрессия белка теплового шока 27 (Нsp). Белки теплового шока участвуют не только в восстановлении нативной конформации белковых молекул и активности ферментов, но и регулируют процесс программированной гибели. В условиях окислительного стресса ферменты системы глутатиона нуждаются в своевременном рефолдинге для поддержания их активности, поэтому состояние редокс-баланса опухолевой клетки напрямую зависит от функциональных свойств белков теплового шока. Белки семейства Hsp70, обладают свойствами ферментов, исправляющими конформационные изменения белков за счет энергии АТФ, способствуют

221

трансмембранной транслокации белков и одни из первых реагируют на окислительный стресс. Процесс рефолдинга с помощью Hsp70 протекает более эффективно после ассоциации протеиновых агрегатов с белками теплового шока малой молекулярной массы, в частности с Hsp27.

Цель. Оценить роль белков теплового шока Hsp27 и Hsp70 в поддержании функциональной активности глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы опухолевых клеток линии Jurkat.

Материалы и методы. Материалом для исследования служили опухолевые клетки линии Jurkat, полученные из Российской коллекции клеточных культур Института цитологии РАН (г. Санкт-Петербург). Для дальнейшего анализа клетки были поделены на две группы: интактная культура клеток и культура клеток с добавлением селективного ингибитора Hsp27 – KRIBB3. Определение содержания фосфорилированной формы Hsp27 и Hsp70 проводили с помощью вестерн-блоттинг анализа согласно протоколу производителя. Содержание восстановленного и окисленного глутатиона (GSH и GSSG) определяли методом, предложенным M.E. Anderson (1985) в модификации S. Kojima и соавт. (2004). Активность глутатионредуктазы определяли, основываясь на ее способности восстанавливать GSSG до 2 GSH в присутствии НАДФH2. Активность глутатионпероксидазы определяли с помощью метода, в основе которого лежит способность фермента катализировать реакцию взаимодействия глутатиона с гидроперекисью трет-бутила. Статистическую обработку полученных результатов проводили при помощи программы SPSS 13.0.

Результаты. При добавлении к культуре опухолевых клеток линии Jurkat специфического ингибитора Hsp27 KRIBB3 наблюдалось достоверно значимое увеличение содержания окисленной формы глутатиона в 4,0 раза при относительно неизменной концентрации его восстановленной формы. Увеличение концентрации GSSG возможно связан с тем, что Hsp27, защищая глутатионпероксидазу от инактивации окислителями, приводило к увеличению уровня глутатиона в восстановленной форме. Соответственно при добавлении селективного ингибитора защитная функция Hsp27 утрачивалась, что приводило к нарастанию окислительного стресса в клетке. Повышение активности глутатионредуктазы в 3,5 раза связано с возрастанием субстрата для ферментативного катализа – окисленного глутатиона, который являясь более реакционоспособной молекулой, способен модифицировать тиоловые группы различных белков изменяя их функциональную активность. Активность глутатионпероксидазы при этом значимо не изменялась. Снижение концентрации не только Hsp27 (в 3,5 раза), но и Hsp70 (почти в 2 раза) при добавлении KRIBB3 связано с тесным функциональным взаимодействием между различными системами молекулярных шаперонов, которые поддерживают белки опухолевых клеток линии Jurkat в функционально активном состоянии.

Выводы. Ингибирование Hsp27 приводит к дисбалансу функционирования системы глутатиона и снижению содержания Hsp70 в опухолевых клетках линии Jurkat, что в дальнейшем может быть использовано для редокс-регуляции апоптотической гибели этих клеток в сторону ее активации.

ВЛИЯНИЕ АНТИПИЧНЫХ НЕЙРОЛЕПТИКОВ НА УРОВЕНЬ ЦИТОКИНОВ И ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ

А.В. Драница

ФГБУ "НИИПЗ" СО РАМН, г. Томск Лаборатория клинической психонейроиммунологии и нейробиологии

Актуальность. Важная роль в патогенезе шизофрении отводится иммунным механизмам. При шизофрении выявляется дисфункция иммунокомпетентных клеток и нарушения в системе цитокинов, что приводит к дисбалансу в системе Th1/Th2 (переключению

222

иммунного ответа с клеточного пути на гуморальный). Цитокины играют ключевую роль в передаче сигналов между нервной и иммунной системами. Психотропные препараты, мишенью которых являются различные рецепторы клеток головного мозга, через сложные механизмы изменения активности нейротрансмиттерных систем способны оказывать иммуномодулирующий эффект. Антипсихотические эффекты нейролептиков, в том числе и атипичных, опосредованы не только воздействием на дофаминэргические, но и на другие нейромедиаторные системы. Влияние этих препаратов на иммунитет изучено недостаточно, и данные литературы весьма противоречивы. Между тем, исследование влияния отдельных препаратов из группы атипичных антипсихотиков на показатели иммунитета пациентов является актуальным.

Цель. Изучение влияния атипичных нейролептиков кветиапина и оланзапина на уровень цитокинов и показатели иммунитета больных шизофренией.

Материалы и методы. В исследование были включены 21 человек с диагнозом шизофрения в возрасте от 20 до 63 лет (средний возраст пациентов составил 32,19±2,23 лет), 9 мужчин и 12 женщин. В процессе поддерживающей терапии и стационарного лечения 10 пациентов принимали атипичный нейролептик кветиапин (Кетилепт, Egis Pharmaceuticals, Plc, Венгрия) – 1-я группа, 11 пациентов – атипичный нейролептик оланзапин (Зипрекса, Eli Lilly and Company Ltd, Великобритания/Испания) – 2-я группа. Статистическая обработка данных проводилась методами вариационной статистики с использованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», версия 7, «SPSS» версия 11.5. Различия между показателями считали значимыми при p<0,05. Для сравнения показателей в двух группах были использованы методы непараметрической статистики: критерий Манна-Уитни для независимых выборок и критерий Вилкоксона для сравнения данных до (1-я точка) и после лечения (2-я точка).

Иммунологическое исследование включало: фенотипирование иммунокомпетентных клеток по кластерам дифференцировки CD методом проточной цитометрии (цитофлюориметр FacsCalibur, Becton Dickinson, USA); спонтанную и митогениндуцированную продукцию (ФГА для IFN-γ, IL-2, IL-4, ЛПС для TNFα) мононуклеарными лейкоцитами и их сывороточную концентрацию определяли методом ИФА с помощью стандартных наборов реактивов. Исследование проводилось в двух точках: при поступлении в стационар и в период обострения и через 4-6 недель адекватной психофармакотерапии.

Результаты. В результате проведенного исследования обнаружено, что больные шизофренией 1-й группы по сравнению с пациентами 2-й группы, характеризовались более низкими значениями количества зрелых Т-лимфоцитов СD3 (p=0,049), более высокими значениями спонтанной продукции IFN-γ (p=0,01), митогениндуцированной продукции IL-2 и IL-4, не достигающими, однако, уровня достоверности (p=0,093 и p=0,141). У всех обследованных по отношению к контролю выявлен низкий уровень митогениндуцированной продукции IFN-γ (p=0,0001) и TNFα (p=0,002; p=0,0001), а также высокий уровень спонтанной продукции TNFα (p=0,001).

Выводы. В результате проведенного предварительного исследования у больных шизофренией, длительно получавших антипсихотическую терапию атипичным нейролептиком кветиапином, при поступлении в стационар в период обострения выявлены более выраженные иммунные нарушения по сравнению с пациентами, длительно получавшими атипичный нейролептик оланзапин. Выявленные различия, очевидно, связаны с особенностями механизма действия атипичных антипсихотиков. Выявлены выраженные нарушения в системе цитокинов, которые свидетельствуют о дисбалансе Th1/Th2 иммунного ответа.

223

ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ МАКРОФАГОВ БАЗАЛЬНОЙ ДЕЦИДУАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ В ПЕРВОМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ ПРИ УРЕАПЛАЗМЕННОМ ИНФИЦИРОВАНИИ

А.Д. Журавлева

Сибирский государственный медицинский университет, г.Томск Кафедра гистологии, эмбриологии, цитологии

Актуальность. Уреаплазмы могут присутствовать среди естественной урогенитальной микрофлоры здоровой женщины, но становиться провокаторами патологических процессов при определенных обстоятельствах. Во время беременности высеваемость уреаплазм увеличивается в 1,5-2 раза, что объясняется изменением иммунного и гормонального статуса женщины. Частота выделения Ureaplasma urealyticum у беременных составляет 50-75 %. Важная роль в противоинфекционной защите и патогенезе воспалительного процесса принадлежит механизмам местного иммунитета. Характерными воспалительными изменениями при уреаплазмозе являются поражения экстраплацентарных оболочек и базальной пластины. Важна оценка параметров локальной иммунной системы в области непосредственного контакта организма матери и плода, а именно в базальной децидуальной оболочке (БДО) при уреаплазменной инфекции. Согласно данным различным исследователей, содержание макрофагов в БДО достаточно велико (около 20 %) и остается таковым на протяжении всей беременности. Доминирование данного вида клеток согласуется с концепцией, согласно которой подавление специфического иммунного ответа матери сопровождается активацией врожденной иммунной системы. В связи с этим является актуальной оценка параметров врожденной иммунной системы, в частности, активности макрофагов в БДО при уреаплазменном инфицировании.

Цель. Оценить изменения активности макрофагов БДО при помощи экспрессии Толлподобных рецепторов (TLR2) в первом триместре беременности при уреаплазменном инфицировании Материалы и методы. Материалом для исследования являлись БДО, полученные от

женщин (n=18) с контаминацией нижних половых путей Ureaplasma urealyticum в высоком микробном числе (˃104 КОЕ) и без уреаплазменной инфекции (n=66), которые пожелали прервать беременность по немедицинским показаниям в гестационном сроке 6-8 недель. Полученные объекты фиксировали в 10%-м растворе нейтрального формалина и по общепринятой методике заливали в парафин. Иммуногистохимическое окрашивание срезов проводили при помощи моноклональных антител СD68 и TLR2. Для подсчета численной плотности клеток в 1 мм2 БДО использовали окулярную вставку с известной площадью (ок. 10 и об. 90). Просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли на микроскопе Axiostar plus (Carl Zeiss, Германия). Анализ полученных данных осуществляли методами описательной статистики с вычислением медианы (Ме) и интерквартильного интервала (Q1-Q3). Для оценки различий использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.

Результаты. При гистологическом исследовании преобладающим типом клеток, присутствующих в БДО в 6-8 недель беременности и отвечающих за локальный иммунный ответ, являлись моноцитарно-макрофагальные клетки. Выраженная экспрессия CD68 наблюдалась в цитоплазме макрофагов. При подсчете их численная плотность в БДО при уреаплазменной инфекции составила – 2612,05 (2267,06-3351,31) клеток в 1 мм2 среза, что достоверно не отличалось от такового в контрольной группе – 2217,78 (1774,222858,47) клеток в 1 мм2. Оценку активности фагоцитарных клеток в БДО проводили с помощью иммуногистохимического исследования экспрессии TLR2, выявляемой на мембранах макрофагов. Так, при контаминации Ureaplasma urealyticum, численная плотность ТLR2-позитивных макрофагов БДО составила 1889,22 (1478,52-2329,79) клеток

224

в 1 мм2, что было статистически значимо и в 1,5 раза превышало показатели группы контроля – 1284,37 (1026,75-1548,93) клеток в 1 мм2 (р=0,009).

Выводы. Таким образом, оценка активности макрофагов помощью экспрессии TLR2 выявила статистически значимое увеличение численной плотности активированных клеток в группе с уреаплазменной инфекцией, что в дальнейшем может являться причиной прерывания беременности.

ВЗАИМОСВЯЗЬ ЛОКАЛЬНЫХ И ВНЕШНИХ РЕАКЦИЙ ПРИ НЕВЫНАШИВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ

И.А. Законова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии

Актуальность. Хронический эндометрит в настоящее время является весьма актуальной проблемой, которая имеет не только медицинское, но и социальное значение. При хроническом воспалении нарушается рецепторный аппарат и нормальное питание эндометрия, пораженные ткани матки не могут создать благоприятные для развития плодного яйца условия, что приводит к нарушению процессов трансплантации, роста и развития эмбриона. Все это приводит к привычному невынашиванию беременности. По данным статистики, частота самопроизвольного прерывания беременности составляет около 15-20 % от общего числа всех выявленных беременностей. Хронический эндометрит является частью системного воспалительного ответа, в ходе которого наблюдается привлечение в очаг хронического воспаления различных клеток, синтезирующих провоспалительные цитокины, повышается уровень С-реактивного белка, ревматоидного фактора. Это препятствует нормальной имплантации бластоцисты.

Цель исследования. Выявить взаимосвязь между иммунохимическими и иммуногистохимическими показателями иммунитета у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе.

Материалы и методы исследования. Объектами исследования служили биоптаты эндометрия, полученные в результате диагностического выскабливания полости матки. Биологический материал был распределен на следующие группы: 1-я – биоптаты эндометрия, полученные от женщин с единичным эпизодом невынашивания (n=9), 2-я – биоптаты эндометрия, полученные от женщин с двумя и более эпизодами невынашивания беременности (n=9). Биоптаты фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина, заливали в парафин и после приготовления срезов толщиной 4-6 мкм, окрашивали моноклональными антителами к рецепторам эстрогена (ER) и прогестерона (PR). Оценку иммунопозитивных клеток стромы и желез эндометрия производили при помощи гистосчета, согласно которому 0-10 соответствовало отрицательному результату, 10-100 – слабоположительному, 100-300 – положительному. Подсчет, просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли на микроскопе «Axiostar plus», ок. х10, об. х40. Уровень естественных аутоантител оценивали в сыворотке крови с помощью ИФА тест-системы ЭЛИ-П-комплекс для детекции антител к Fc-фрагменту Ig (Ревматоидный фактор). В зависимости от показателей теста результаты оценивали как нормореактивные (-20 … +10), гипоили гиперреактивные. Анализ полученных данных осуществляли методами описательной статистики с вычислением медианы (Ме) и интерквартильного интервала (Q1-Q3). Для оценки различий использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Корреляционный анализ проводили при помощи ранговой корреляции Спирмена.

Результаты исследования. В морфологической картине эндометрия во всех случаях невынашивания наблюдались характерные признаки хронического эндометрита: склероз стромы, деформация окружающих желез, лимфо-плазмоцитарная инфильтрация. При

225

иммуногистохимическом исследовании экспрессия рецепторов к эстрогену и прогестерону выявлялась в ядрах эпителия желез и в ядрах клеток стромы. Количественный анализ установил снижение экспрессии к рецепторам эстрогена и прогестерона, как в эпителиальных клетках, так и в клетках стромы эндометрия. При этом более выраженное снижение показателей наблюдалось в группе с одним эпизодом невынашивания беременности, где положительная экспрессия к ER в строме встречалась у 66,7 %, в железах у 77,8 % пациенток; к PR в строме – у 77,8 %, в железах – у 33,3 %. В группе пациенток с привычным невынашиванием беременности показатели распределились следующим образом: положительная экспрессия к ER в строме – у 77,8 %, в железах у 66,7 %, к PR в строме – у 44 % (р˂0,05), в железах – у 22,2 % (р˂0,05) пациенток.

При оценке иммунореактивности женщин путем определения уровня регуляторных

аутоантител ревматоидному фактору (Fc-фрагменту Ig) был выявлен патологически высокий уровень аутоантител, который отмечался у 44 % женщин с первым эпизодом невынашивания и у 33 % пациенток с привычным невынашиванием.

Корреляционный анализ выявил положительную связь между уровнем аутоантител к ревматоидному фактору и экспрессией рецепторов в клетках стромы эндометрия к эстрогену (r = 0,52; p = 0,014) и прогестерону (r = 0,41; p = 0,048).

Заключение. Таким образом, у женщин с невынашиванием в анамнезе выявлены морфологические и иммунохимические изменения, характерные для хронического эндометрита, установленная взаимосвязь между которыми может являться препятствием для нормальной имплантации бластоциты.

ВЛИЯНИЕ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА НА СОКРАТИТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ГЛАДКОМЫШЕЧНЫХ КЛЕТОК ЛЕГОЧНОЙ АРТЕРИИ КРЫСЫ

А.М. Кеденова, Т.А. Кироненко

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра биофизики и функциональной диагностики

Актуальность. Перекись водорода является клеточным метаболитом и относится к группе веществ, объединяемым общим названием «активные формы кислорода» (АФК). Особенностью АФК является высокая реакционная способность, что определяет широкий спектр их биологических эффектов, который может оказывать как регуляторное, так и токсическое действие. В настоящее время участие АФК показано в патогенезе более 100 заболеваний и патологических состояний. В возникновении патологических процессов человека основную роль играет повышение концентрации АФК, что может быть следствием стимуляции системы, продуцирующей АФК, или снижением уровня антиоксидантной защиты. В высоких концентрациях АФК индуцируют процессы перекисного окисления липидов в биологических мембранах, повреждение мембраносвязанных белков и ДНК клетки, инактивацию ферментов.

Выяснение механизмов, используемых клетками с участием АФК, является актуальной задачей современной биологии и медицины. Все это может стать основой для разработки молекулярных подходов к управлению функциональными свойствами гладких мышц внутренних органов и кровеносных сосудов при физиологических и патологических

Материалы и методы. Экспериментальное исследование выполнено на 12 половозрелых крысах-самсах породы «Wistar» массой 180-240 г. Материалом исследования служили кольцевые сегменты легочной артерии с сохраненным эндотелием и деэндотелизированные сегменты. Сократительную активность изучали методом

226

механографии. Сегменты помещали в камеру с раствором Кребса, после чего изучали действие H2О2 в диапазоне концентраций от 1мкМ до 1мМ.

Результаты. В первой серии экспериментов было изучено влияние перекиси водорода в концентрациях 1мкМ до 1мМ на механическое напряжение с сохраненным и удаленным эндотелием предсокращенные гиперкалиевым раствором Кребса. Перекись водорода вызывала дозозависимое сокращение сегментов легочной артерии. При этом максимальная амплитуда сокращения сегментов с сохраненным эндотелием составила 48,7 ± 12,9% (при концентрации 1мМ), а деэндотелизированные сегменты максимальное сокращение составляла до 21,9±10,1%.

Во второй серии экспериментов было изучено влияние перекиси водорода на механическое напряжение гладкомышечных сегментов на базальный тонус в концентрациях 1мкМ до 1мМ. При этом наблюдали максимальный сократительный ответ сегментов с сохраненным эндотелием до 143±13,6%, а при действии на деэндотелизированные сегменты максимальное сокращение составило до 137±7,5%.

Выводы. Перекись водорода в высоких концентрациях оказывает констрикторное действие на изолированные гладкомышечные сегменты легочной артерии крысы, как интактные, так и предсокращенные гиперкалиевой деполяризацией мембраны.

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА НА ИЗОЛИРОВАННЫЕ ИНТАКТНЫЕ СЕГМЕНТЫ ЛЕГОЧНОЙ АРТЕРИИ МОРСКИХ СВИНОК И СЕГМЕНТЫ, ПРЕДСОКРАЩЕННЫЕ ГИПЕРКАЛИЕВЫМ РАСТВОРОМ КРЕБСА

Т.А. Кироненко, А.М. Кеденова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра биофизики и функциональной диагностики

Актуальность. Активные формы кислорода (АФК), как стало понятно в последнее время, составляют отдельную систему в организме, участвующую как в ряде физиологических функций, так и во многих патологических процессах.

Система АФК организована за счет положительных и отрицательных связей: имеется множество механизмов контроля — уровня генерации АФК в митохондриях и микросомах, контроля активности оксидаз и антиоксидантных ферментов тканей, суммарного уровня антиоксидантной активности (АО) крови. В ходе естественного старения организма (эволюции всего организма как более высокой надсистемы) изменяются различные элементы АФК; изменяется состояние АФК и в ходе различных патологических процессов. Знание системы самоорганизации АФК и основных закономерностей ее функционирования важно как для понимания закономерностей физиологического функционирования тканей организма в норме, так и особенностей течения многих патологических процессов и выбора способов активного влияния на них.

Цель. Исследовать действие перекиси водорода на сократительную активность гладкомышечных сегментов легочной артерии морских свинок.

Материалы и методы. В работе использовались беспородные половозрелые морские свинки-самцы весом 200400 г. в количестве 7 особей. Для изучения сократительной активности готовили кольцевые сегменты длиной 1-2 мм. Эффект тестирующего препарата оценивали в процентах от амплитуды контрольного сокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (40 мМ KCl), последнюю принимали за 100%. Сократительную активность (механическое напряжение) гладкомышечных сегментов изучали методом механографии в условиях, близких к изометрическим.

Результаты. В серии экспериментов было изучено влияние перекиси водорода в концентрациях 1 нМ – 1000 мкМ на механическое напряжение сегментов легочной артерии. При действии перекиси водорода на интактные сегменты в концентрации от 10 мкМ до 1мМ происходило увеличение механического напряжения до 8,6±1,2%. В случае

227

предсокращения гиперполяризованным раствором Кребса сегментов легочной артерии пероксид водорода вызывал сокращение в диапазоне концентраций 1 мкМ - 1 мМ до 176,9±60,4%.

Таким образом, сократительный эффект перекиси водорода на гладкие мышцы интактных и предсокращенных сегментов легочной артерии может объяснить одно из звеньев патогенеза таких заболеваний как, например, легочная гипертензия, ишемическая болезнь сердца и др.

Выводы. Действие перекиси водорода на изолированные сегменты ЛА морских свинок приводило к их сокращению.Перекись водорода вызывала увеличение механического напряжения интактных сегментов легочной артерии на 8,6%, и на 176,9% на фоне гиперкалиевой деполяризации.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ СЕРОВОДОРОДА НА ИЗОЛИРОВАННЫЕ СЕГМЕНТЫ ЛЕГОЧНОЙ АРТЕРИИ КРЫСЫ С СОХРАНЕННЫМ И УДАЛЕННЫМ ЭНДОТЕЛИЕМ.

Т.А. Кироненко, А.М. Кеденова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра биофизики и функциональной диагностики

Актуальность. Изучение H2S в последнее время приобрело широкие масштабы. На сегодняшний день известно, что H2S является газотрансмиттером, который образуется в организме в результате ферментативных реакций. Известно, что сероводород обладает сосудорасширяющим действием, имеет противовоспалительный, антипролиферативный эффекты, но в некоторых случаях может стимулировать воспаление. Взаимодействуя с активными формами кислорода, защищает организм от их повреждающего действия.

Цель. Изучить действие сероводорода на сократительную активность гладкомышечных сегментов легочной артерии крысы.

Материалы и методы. В работе использовались крысы самцы в количестве 12 штук. Материалом исследования служили кольцевые сегменты легочной артерии с сохраненным и удаленным эндотелием. Для изучения сократительной активности готовили кольцевые сегменты длиной 1-2 мм. Сегменты помещали в камеру с раствором Кребса, после чего изучали действие H2S в диапазоне концентраций от 1мкМ до 1мМ. Эффект тестирующего препарата оценивали в процентах от амплитуды контрольного сокращения на гиперкалиевый раствор Кребса (40 мМ KCl), последнюю принимали за 100%. Сократительную активность (механическое напряжение) гладкомышечных сегментов изучали методом механографии в условиях, близких к изометрическим.

Результаты. В серии экспериментов было изучено влияние сероводорода в концентрациях от 1мкМ до 1мМ на механическое напряжение сегментов легочной артерии. В ходе работы было выявлено, что H2S вызывал расслабление сегментов ЛА с сохраненным эндотелием до 86,3±5,3% (при концентрации 1мМ), а деэндотелизированные - до 65,2±5,1%.

Выводы. В заключении можно сказать, что на степень расслабления сегментов ЛА при добавлении сероводорода, играет важную роль эндотелий. Расслабляющее действие сероводорода с сохраненным эндотелием усиливается на 20% по сравнению с деэндотелизированными сегментами.

228