Анализ спермы

При проведении анализа определяют цвет семенной жидкости. Нормальным считают оттенки от молочного до слабо-кремового в зависимости от плотности; желтый оттенок недопустим и указывает на попадание мочи или на воспалительный процесс; красный свидетельствует о присутствии крови. Причину отклонения цвета эякулята от нормы выявляют в ходе микроскопического исследования. Эякулят, содержащий лейкоциты, эритроциты или мочу, центрифугируют при 300–1000 об/мин в течение 5 минут в разбавителе TRIS (табл. 9.1) или растворе с добавлением антибиотиков, супернатант удаляют, а осадок снова разводят в свежем разбавителе, содержащем антибиотики, и используют для искусственного осеменения.

Табл. 9.1. Состав раствора TRIS без глицерина, предназначенный для транспортировки охлажденной спермы

Буферная база содержит антибиотики

Трисгидроксиметиламинометан — 6,056 г;

Лимонная кислота — 3,400 г;

Фруктоза — 2,500 г;

Дистиллированная вода двойной очистки — 200 мл;

Кристаллический пенициллин — 200 000 ЕД;

Дигидрострептомицин — 0,2 г;

Яичный желток вводят непосредственно перед добавлением воды (20 % объема) 2 мл желтка на 8 мл TRIS базы + антибиотики.

Оценку плотности спермы, т. е. концентрации сперматозоидов на единицу объема проводят с использованием счетной камеры и микроскопа или фотометрического счетчика для спермы (фиг. 9.5). Количество сперматозоидов в эякуляте вычисляют исходя из их числа в единице объема и полного объема. Общее количество сперматозоидов в сперме собак варьирует от 200 до 1200 х 10⁶, содержание во второй фракции 100–700 х 10⁶/мл.

Фиг. 9.5.

^{Фотометрический калибратор Spermacue™ для измерения плотности (количества сперматозоидов в мл) свежеполученной неразведеннои спермы собак и лисиц}

Прогрессивную подвижность (ПП) оценивают визуально под микроскопом со 100-кратным увеличением. Показатель прогрессивной подвижности (количество сперматозоидов с выраженным поступательным движением) минимально может составлять до 5 % при норме 75–90 % в неразбавленном свежесобранном эякуляте. В замороженной сперме, если ее предполагается использовать для искусственного осеменения, подвижность сперматозоидов после размораживания должна составлять не менее 50 %. Активность сперматозоидов (скорость поступательного движения) также является важным показателем, которому субъективно присваивается значение от 0 до 5, где 0 означает отсутствие прогрессивного движения (некроспермия), а 5 является наивысшим показателем. Нормальная фертильная сперма обычно имеет показатель 3–5; сперма, предназначенная для замораживания, перед заморозкой должна иметь высокие показатели, предпочтительно 5. Низкая температура снижает подвижность сперматозоидов, поэтому для анализа рекомендуется подогревать предметное стекло, в особенности при работе с размороженной спермой. Физиологические растворы, особенно содержащие глицерин, также временно снижают активность сперматозоидов, однако на подогретом предметном стекле она обычно восстанавливается через 2–3 минуты.

В последнее время достаточно широко применяют тест на целостность мембраны и жизнеспособность спермы (гипоосмотический тест). Тест включает инкубацию спермы в гипоосмотической среде, вызывающей набухание хвоста сперматозоида. Этот тест имеет хорошую корреляцию с подвижностью и жизнеспособностью спермы, но не с ее концентрацией.

Морфологический анализ (МА) служит для определения процента сперматозоидов с нормальным внешним видом либо с помощью фазово-контрастной микроскопии при 200-кратном увеличении, либо с использованием менее мощного микроскопа, но тогда с окрашиванием нигрозин-эозином (см. гл. 8). Морфологические показатели считают нормальными, если процентное соотношение морфологически неизмененных сперматозоидов колеблется в пределах от 65 до 90 %. Минимальный процент морфологически нормальных сперматозоидов, при котором сохраняется нормальная фертильность, для собак не установлен, однако показатель ниже 60 % обычно указывает на нарушения функции тестикул или эпидидимиса. У кобелей в период полового созревания до 40 % сперматозоидов могут иметь проксимальные цитоплазматические включения. Сперма, предназначенная для замораживания, должна содержать не менее 75 % морфологически нормальных сперматозоидов.

Показатель целостности акросом особенно важен для морфологической оценки спермы после размораживания. Для подсчета сперматозоидов с неповрежденной акросомой в лаборатории автора применяют окрашивание раствором Spermac™.