Измерение концентрации гормонов

Данные о концентрации прогестерона в сыворотке крови могут служить ориентиром для определения фертильного периода у сук. Механизмы и динамика изменения концентрации прогестерона описаны в предыдущем разделе (фиг. 1.2).

В конце анэструса концентрация прогестерона в сыворотке крови находится на базальном уровне (и практически не определяется), к окончанию проэструса она повышается до низкой, но поддающейся определению отметки (около 3 нмоль/л или 1 нг/мл). И продолжает повышаться, достигая уровня 3–6 нмоль/л (1–2 нг/мл) к моменту овуляторного пика ЛГ; 2 дня спустя (в день овуляции) показатели достигают 6–12 нмоль/л (2–4 нг/мл), а к 4 дню (т. е. к началу фертильного периода) — 18–30 нмоль/л (6–10 нг/мл) (фиг. 1.1). Концентрацию прогестерона определяют в плазме крови, поскольку анализ других жидкостей (слюны и мочи) в настоящее время не дает точных результатов. Исследование проводят после появления первых признаков проэструса и повторяют по меньшей мере каждые 2–3 дня до окончания проэструса или начала поведенческого эструса. Такая методика позволяет выявлять стремительное нарастание концентрации прогестерона перед овуляцией и соответственно рассчитать дату возможной вязки. В случаях очень короткого проэструса исследование начинают раньше.

В зависимости от метода исследования (радиоиммунный или иммуноферментный) возможны некоторые расхождения в показателях концентрации прогестерона; при этом следует учитывать, что иммуноферментный метод дает завышенные, но в остальном надежные результаты. Большая часть опубликованных данных (включая данные, приведенные в настоящей главе) получены с помощью радиоиммунного метода. Готовые иммуноферментные тест-системы, предназначенные для определения концентрации прогестерона в плазме крови на различных стадиях эстрального цикла, дают результаты, почти вдвое превосходящие данные радиоимунного анализа (РИА), но в той же степени отражающие характерные циклические изменения. С помощью готовых наборов нельзя получить абсолютные показатели концентрации прогестерона, но можно проследить относительные изменения его концентрации от начала проэструса и до конца цикла.

Фиг. 1.3.

^{Эндоскопическое исследование слизистой влагалища. Динамика изменений на протяжении цикла: (а) проэтрус — розовая окраска и отечность; (b) начало эструса — слизистая бледнеет, отек начинает уменьшаться (обычно перед пиком ЛГ); (c) середина эструса — слизистая бледная, уменьшение отека (сморщивание) явно выражено, что соответствует середине фертильного периода; (d) начало метэструса — видны закругленные складки, при прикосновении слизистая смыкается, образуя розетку (е) (см. Приложение)}

Прогестерон является единственным гормоном, концентрацию которого используют как ориентир при вычислении фертильного периода. Хотя ЛГ и эстрадиол в этом отношении даже более информативны, их определение не практикуется.

Другие аспекты определения фертильного периода

Последние рентгенографические исследования влагалища с применением контрастного вещества выявили устойчивую связь между концентрациями эстрадиола и прогестерона в крови и раскрытием шейки матки. Результаты этих исследований имеют решающее значение для определения фертильного периода у собак, поскольку шейка матки остается закрытой (непроницаемой для контрастного вещества и, вероятно, сперматозоидов) до тех пор, пока не произойдет снижение концентрации эстрадиола и не вырастет соотношение прогестерон/эстрадиол во время преовуляторного периода. После пика ЛГ шейка матки остается открытой в течение приблизительно 6 дней (т. е. она закрывается примерно за 2 дня до начала цитологического метэструса), и в этот период концентрация прогестерона остается высокой, а эстрадиол практически не определяется. Приведенные данные свидетельствуют о том, что сперматозоиды имеют доступ в шейку матки только в ограниченное время эструса вопреки общепринятому мнению, согласно которому вязку можно проводить как до, так и после раскрытия шейки матки. Изменения состояния шейки матки объясняются утолщением слизистой оболочки под воздействием эстрогена на стадии проэструса, что приводит к закрытию шейки матки. Последующее раскрытие шейки матки сопровождается снижением отечности слизистой оболочки и обусловлено увеличением соотношения прогестерон/эстрадиол.

Интересно, что период, когда шейка матки раскрыта, соответствует оптимальным срокам вязки, рассчитанным на основании результатов эндоскопического исследования слизистой влагалища. Данные рентгенографических исследований с применением контрастного вещества удобны для интерпретации, однако не объясняют, каким образом на стадии проэструса кровь и маточный секрет проникают через отечную шейку матки. Вероятно, сказывается влияние других активаторов, например, эстрогенов, способных расслаблять гладкую мускулатуру, а также простагландинов, содержащихся в сперме.

Необходимость повышения концентрации прогестерона для наступления эструса и индукции овуляторного пика ЛГ указывает на то, что устойчивые проявления течки наблюдаются лишь непосредственно перед началом фертильного периода. Хотя начало течки по отношению к пику ЛГ — индивидуальная характеристика особи (табл. 1.1), указанные проявления могут служить ориентиром для вычисления фертильного периода.