6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Краткий_курс_клинической_лабораторной_цитологии_Басинский_В_А_и

центрифугируют, верхний слой сливают, а из осадка делают мазки, которые подвергают цитологическому исследованию.

Г. Фиксация

Если это специально не оговорено методикой, то, как правило, фиксируют высушенные мазки. В качестве фиксатора используют красители Май-Грюнвальда, Лейшмана, метанол, этиловый спирт, смесь Никифорова.

Д. Традиционные методы окраски цитологических препаратов

Чаще всего в цитологической диагностике используют следующие методы окраски:

окраска гематоксилин-эозином; окраска по Паппенгейму; окраска по Папаниколау; по методу Романовского-Гимза.

Все объекты слизистого характера или с примесью слизи (мокрота, смыв бронхов, отделяемое шейки матки, пищевода) красят гематоксилин-эозином. Смывную жидкость с желудка, прямой кишки тоже красят гематоксилин-эозином, так как присутствие физиологического раствора в жидкости ухудшает результат окраски при употреблении азур-эозиновых смесей и часто делает невозможным цитологическое исследование.

Материал, полученный при пункции, следует красить по Паппенгейму или Папаниколау, и только в случае, если пунктат имеет слизевидный характер, для него следует сделать исключение и окрасить гематоксилин-эозином. Кроме того, материал, полученный из очагов некроза, должен быть распределен по стеклам с таким расчетом, чтобы иметь возможность 1–2 препарата окрасить и гематоксилин-эозином.

Если получен обильный пунктат, следует приготовить запасные препараты для окраски другими способами и, в частности, для дополнительного бактериоскопического исследования. Когда имеется мало материала и приготовлен только один препарат, окрашенный по Паппенгейму, а требуется дополнить данные цитологического исследования поиском туберкулезных бацилл, проводят обесцвечивание этого препарата в 2% спиртовом растворе соляной кислоты и далее красят по ЦильНильсену.

~21~

III этап – соблюдение диагностического алгоритма подразумевает порядок оценки, обеспечивающий тщательность анализа цитологической картины:

1.Активный поиск (по существу, наблюдение) диагностически значимых признаков, т.е. признаков, характерных для того или иного патологического очага.

2.Группировка выявленных признаков.

3.Интерпретация сути выявленных изменений.

Ж. Формулировка цитологического заключения

Установление и формулировка цитологического заключения проводится с учетом полноты имеющейся информации, возможностей и пределов метода.

Основные типы цитологических заключений:

1. Уверенное заключение

-о наличии злокачественного новообразования дается при обнаружении значительного числа клеток, обладающих всеми признаками злокачественности. Это заключение может быть дано вне зависимости от того, будут ли клетки обнаружены разобщенными или в комплексе. Если возможно, добавляется суждение о гистологической форме злокачественного новообразования. Если гистологическая форма не распознается или нет полной уверенности в правильности ее распознавания, эта часть ответа может быть выражена в предположительной форме при определенной форме ответа в его основной части, например: обнаружены элементы, принадлежащие злокачественному новообразованию – саркоме (полиморфноклеточной);

-если исследование дает возможность исключить злокачественное новообразование, цитолог дает соответствующее заключение.

2. Предположительное заключение о наличии злокачественного новообразования дается при небольшом числе обнаруженных атипичных клеток, которые обладают всеми или ведущими признаками злокачественности; также, когда имеются какие-либо сомнения в правильности учета признаков злокачественности, предположительный ответ может сопровождаться уточнением гистологической формы новообразования, например: обнаружены клетки, подозрительные по принадлежности к

~23~

злокачественному новообразованию. Можно указывать на два возможных диагноза, при этом на первом месте пишется тот из них, который представляется наиболее вероятным.

3.Ответ носит описательный характер

З. Регистрация цитологического заключения и выдача результата исследования.

ОБЪЕКТИМЕТОДЫ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

В современной клинической практике в комплексе диагностических мероприятий цитологическое исследование позволяет осуществить морфологическую верификацию поражения (в частности опухоли), необходимую для своевременного начала адекватного лечения.

Получение материала для цитологического исследования осуществляет специалист по эндоскопии, хирург, онколог, рентгенолог, значительно реже – врач, занимающийся цитологическими исследованиями. Тем не менее, участие цитолога в выборе рациональной тактики получения материала не только правомочно, но и необходимо.

Непосредственный контакт врача цитологической диагностики с лечащим врачом взаимно обогащает и повышает уровень как морфологической диагностики опухолей, так и помогает в выборе места и способа забора материала на исследование, тактики ведения онкологического пациента.

Традиционно способы получения материала делят на

эксфолиативные и пункционные.

Термином «эксфолиативный способ» обозначают самопроизвольное слущивание или принудительное инструментальное соскабливание клеток с поверхности исследуемой ткани.

Эксфолиативный материал:

секрет и экскрет из разных органов (мокрота, бронхиолоальвеолярный лаваж, выделения из соска молочной железы, моча и т.д.);

~24~

соскобы и отпечатки с поверхности образований на коже и слизистой оболочке, язв, эрозий, ран, с поверхности разреза хирургически удаленной, биопсированной, аутопсированной ткани, включая интраоперационные соскобы и отпечатки;

аспираты из эндоцервикального канала и полости матки;

жидкость серозных полостей, содержимое кист (своеобразие способа состоит в том, что для получения жидкости необходимо применить пункцию тонкой иглой);

материал, полученный во время эндоскопического исследования (ларинго-, трахеобронхо-, эзофагогастро-, дуодено-, колоно-, ректоромано-, лапаро-, гистероскопии и т.п.). В современных эндоскопах для получения морфологического материала имеются специальные приспособления (щетки, петли). При этом используют:

1)браш-биопсию (соскоб нейлоновой щеткой, подведенной к исследуемому участку), этот способ получения материала является наиболее результативным, особенно из более глубоких участков в зоне предполагаемого поражения;

2)прямые отпечатки с поверхности патологического очага ватным тупфером, смоченным теплым физиологическим раствором;

3)отпечатки кусочком ткани, биопсированным для гистологического исследования;

4)аспират, полученный шприцем или электроотсосом;

5)промывные воды, результативность исследования промывных вод достаточно низкая, поэтому способ используют лишь как метод выбора при отрицательном результате применения других способов получения материала.

Пункционные способы получения материала

Материал для цитологического исследования получают с

помощью прокола иглой органа или полости. Пунктируют «вслепую» или целенаправленно с помощью «визуализирующей» аппаратуры.

~25~

В настоящее время различают:

-аспирационную пункцию тонкой иглой;

-пункцию с помощью высокоскоростной дрели с иглой для трепанации;

-аспирационную биопсию толстой иглой.

Применение толстых игл, включая троакар, для пункции внутренних органов, в принципе, ограничено возможностью частых серьезных осложнений. Этот метод может быть рекомендован для исследования в основном мышечной и костной ткани.

Достоинствами метода является возможность диагностики различных поражений, даже небольшого размера (<1см), независимо от их локализации, в частности, в участках, недоступных применению эксфолиативных методов.

ЦИТОХИМИЧЕСКИЕИИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ

МЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЯВДИАГНОСТИКЕ ПАТОЛОГИИЧЕЛОВЕКА

Цитохимия – раздел цитологии, который изучает химическое происхождение и свойства клеточных структур, распределение химических веществ внутри клетки и их дальнейшее превращение, связанное с прямыми функциями клетки и ее компонентов в отдельности. Говоря проще, цитохимия является наукой по изучению строения и функционирования клеток, их взаимосвязей и отношений как в тканях, так и в органах.

Впервые о цитохимии упомянул французский ботаник Ф. В Распая в 19-м веке. Знаменитый ученый написал целую книгу, посвященную цитохимии, в которой объединил все полученные знания. Намного позже были разработаны методы цитохимического окрашивания, которые позволяли проследить за происходящими процессами под микроскопом. Особенно интенсивно цитохимия развивалась с 40-х годов 20-го века. Основной принцип метода цитохимии — связывание определенного химического компонента клетки с красителем или

~26~

образование окраски в процессе реакции.

Цитохимия представляет большой интерес для медицины, так как лишь с ее помощью возможно изучение профилактики, лечения и прогноза самых разных болезней. С помощью цитохимического метода доказаны постоянство количества ДНК в хромосомном наборе, участие макромолекул (нуклеиновых кислот и белков) в специфической функциональной активности клетки, миграция макромолекул внутри клетки (из ядра в цитоплазму, из тела клетки в отростки и обратно и т. д.). Разработаны методы цитохимического окрашивания (для наблюдения под микроскопом) гликогена, липидов, белков,

аминокислот, минеральных соединений.

За основу цитохимических прогнозов стоит в первую очередь принять тот факт, что каким бы ни было заболевание, оно однозначно приведет к изменению строения клетки и биохимических процессов, протекающих в ней. Для того чтобы изучить работу клеток, проводят цитохимический анализ, который является своеобразным исследованием функциональной активности ферментов. Чтобы провести цитохимическое исследование, достаточно лишь сдать кровь из пальца. Это исследование позволяет также обнаружить скрытые заболевания, оперативно назначить необходимое лечение в том случае, если цитохимия клеток изменилась. Например, с помощью данного анализа можно узнать, насколько быстро прогрессирует заболевание и какова вероятность его дальнейшего развития. Помимо этого, путем цитохимического анализа можно узнать, как работают психические функции в том или ином организме, какими творческими способностями обладает человек, насколько высок показатель жизнестойкости.

Перспективным направлением цитохимии является иммуноцитохимия.

Иммуноцитохимия – выявление расположения определенного антигена внутри клетки путем получения комплексов между антителами, конъюгированными с красителями и анализируемыми антигенами.

Идея локализации антигенов в тканях с помощью антител впервые была реализована в начале 40-х годов. Впоследствии иммуноцитохимические методы стали широко применяться в

~27~

молекулярной клинической диагностике. Они позволяют локализовать и идентифицировать клеточные и тканевые компоненты (антигены), основываясь на их связывании с антителами. Место связывания определяют с помощью меченых антител или методом вторичного мечения. Использование такого подхода для выявления патологии позволяет детально исследовать функции и химический состав клеток и сопоставить полученные результаты с известными морфологическими данными, что дает возможность глубже проникнуть в суть патологического процесса.

Достижения в области молекулярного анализа вселяют надежду на более полное понимание этиологии и патогенеза болезней человека и, в частности, на возможность разработки тестов, предназначенных для своевременной диагностики злокачественных новообразований, а именно, на определении уровня опухолевых маркеров.

В настоящее время измерение уровней опухолевых маркеров широко используется в диагностике, лечении и при наблюдении за состоянием онкологических больных. Опухолевыми маркерами называются соединения, которые продуцируются опухолевыми клетками или организмом в ответ на развитие опухоли. От соединений, продуцируемых нормальными клетками, они отличаются или качественно (опухолеспецифичные), или количественно (ассоциированные с опухолью, присутствующие также и в нормальных клетках). Речь может идти об антигенах, локализованных на поверхности мембран, метаболических ферментах или фрагментах цитоплазматических структур, которые освобождаются при гибели клеток. После этого их можно определить в кровяном русле или других тканевых жидкостях.

Опухолевые маркеры открывают новые возможности в лечении онкологических заболеваний, они позволяют

дифференцировать злокачественные и доброкачественные опухоли, определять стадию заболевания и, главное, своевременно выявлять и диагностировать рецидив. Поэтому измерение уровня соответствующего маркера может решающим образом повлиять на эффективность лечения.

Как следует из определения, опухолевые маркеры могут

~28~