80. Характеристика возбудителей риккетсиозов. Особенности отбора и подготовки патматериала для бакдиагностики.

Риккетсиозы - группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемые внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами, послеродовыми эндометритами, поражением лимфатической системы и форменных элементов крови.

Термин «риккетсиозы» объединяет 6 групп различных заболеваний: группу сыпного тифа (эпидемический и эндемический сыпной тиф), группу клещевых лихорадок (пятнистая лихорадка Скалистых гор, марсельская лихорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии и др.), лихорадку цуцугамуши и Ку-лихорадку, группу пароксизмальных риккетсиозов (окопная лихорадка и клещевой пароксизмальный риккетсиоз) и риккетсиозы животных.

Все заболевания делятся на:

1. Антропонозы (сыпной тиф, окопная лихорадка), источником инфекции является больной человек или носитель. Инфекция передается через платяную и головную вошь. Исключение Ку-лихорадка, возбудитель которой может передаваться контактным и алиментарным путем.

2. Зоонозы - источник инфекции - мелкие грызуны, МРС, КРС и др. Передается через сосущих членистоногих (клещи).

Эпидемический сыпной тиф (Typhus exanthematicus) — инфекционная болезнь, вызываемая Rickettsia prowazekii. Характеризуется лихорадкой, интоксикацией, специфической розе- олезно-петехиальной сыпью, поражением сосудистой и ЦНС. Возбудитель — абсолютный внутриклеточный паразит, размножающийся в цитоплазме клеток.

Инкубационный период 10— 14 дней

Попадая в кровь, проникают в клетки эндотелия кровеносных сосудов, размножаются в них, освобождая эндотоксин. Эндотелиальные клетки разрушаются, живые риккетсии вновь поступают в кровь. Поражаются мелкие сосуды, капилляры, что ведет к нарушению микроциркуляции в головном мозге, миокарде, почках и других органах и возникновению менингоэнцефалита, миокардита, гломерулонефрита. В организме больных риккетсии могут длительно персистировать (переживать), что после выздоровления служит причиной появления рецидива сыпного тифа — болезни Брилля.

Культуральный метод - выделение риккетсий Провачека из крови больных или от насекомых-переносчиков - вшей путем заражения куриного эмбриона в желточный мешок, вшей или культур клеток. Риккетсии обнаруживают в ядре или цитоплазме инфицированных клеток микроскопическим методом при окраске по методу Романовского—Гимзе в виде полиморфных мелких микроорганизмов, окрашенных в пурпурно-фиолетовый цвет, при окраске по Здродовскому — в ярко-красный. Обнаружить можно также с помощью РИФ (реакция иммунофлюоресценции) и ПЦР.

Серологический метод используют для определения уровня сыпнотифозных антител и динамики их нарастания в сыворотке крови больных. Применяется РСК (реакция связывания комплемента) (диагностический титр 1:20), РА (реакция агглютинации) с диагностикумами из риккетсий Провачека (диагностический титр 1:160), РНГА (реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации), непрямая РИФ.

Рецидивный сыпной тиф проявляется через многие годы после болезни. Клиническая картина сходна, болезнь протекает быстрее (7—10 нед), прогноз благоприятный.

Эндемический (или крысиный) блошиный сыпной тиф — остролихорадочная зоонозная инфекция, встречающаяся у крыс. Возбудитель Rickettsia typhi близок по свойствам к риккетсиям Провачека. Переносчики возбудителей — блохи.

Серологический метод. Применяются РСК и РА с антигенами из Rickettsia prowazekii и Rickettsia typhi.

Биопроба. При отсутствии культуры ткани проводят внутрибрюшинное заражение кровью больных морских свинок-самцов. Появление скротальной реакции (периорхит), лихорадки и выявление риккетсий во влагалищных оболочках яичек подтверждает диагноз.

Ку-лихорадка — зоонозная инфекционная болезнь, вызываемая Coxiella burnetii, характеризуется полиморфной клинической картиной с поражением легких. Это грамотрицательные, неподвижные, мелкие кокковидные или палочковидные бактерии. Культивируются в желточном мешке куриного эмбриона или в культуре клеток. Устойчивы к высушиванию, действию формалина, фенола, нагревание до 90 °С выдерживают больше 1 ч.

Серологические реакции (РА и РСК) ставят с антигенами I фазы и II фазы возбудителя. Диагностический титр 1:4.

Аллергодиагностика. Кожную аллергическую пробу проводят (0,1 мл аллергена внутрикожно), используя в качестве аллергена растворимый антиген из риккетсий Бернета I фазы, автоклавированную культуру коксиелл или ЛПС I фазы. Результаты пробы учитывают через 24-48 ч по наличию и размерам инфильтрата, гиперемии, отека. У переболевших она остается положительной в течение 10 лет.

Биопроба - внутрибрюшинное или интратестикулярное заражение исследуемым материалом морских свинок самцов, куриных эмбрионов в желточный мешок. Обнаруживается в мазках-отпечатках внутренних органов, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Здродовскому.

Марсельская лихорадка — инфекционная болезнь, вызываемая Rickettsia conori. Характеризуется доброкачественным течением, наличием первичного очага на коже, распространенной сыпью, поражением регионарных лимфатических узлов. Основным резервуаром и переносчиком служат клещи. Механизм передачи трансмиссивный. Инкубационный период 3—10 дней.

Клещевой риккетсиоз — природно-очаговая болезнь, вызываемая Rickettsia sibirica (обитатели иксодовых клещей, которые являются переносчиками болезни). Характеризуется лихорадкой, первичным очагом, увеличением регионарных лимфатических узлов, сыпью. R.sibirica — гр- бактерия, имеющая палочковидную форму.

Биопроба – внутрибрюшинное заражение материалом от больного морских свинок самцов или белых мышей. Риккетсии вызывают у морских свинок через 6-14 дней после заражения - некроз мошонки, у белых мышей - перитонит.

Серологический метод. Для обнаружения антител в сыворотках крови больных со 2 недели заболевания в динамике (исследование парных сывороток) используют непрямую РИФ (реакция иммунофлюоресценции), ИФА (иммуноферментный анализ), РСК, РНГА. Нарастание титра антител подтверждает диагноз риккетсиоза.

Цуцугамуши — инфекционная природно-очаговая болезнь, вызываемая Rickettsia tsutsugamushi. Характеризуется первичным воспалительным очагом на коже, поражением лимфатических узлов, сыпью, интоксикацией, лихорадкой. Источником являются мышевидные грызуны, переносчиком — краснотелковые клещи. Возбудитель, попав в организм после укуса инфицированным клещом, размножается в эндотелии кровеносных сосудов, где образует узелки.

Материалом для исследования служат кровь, взятая в период лихорадки, для выделения возбудителя, сыворотка крови для серологической диагностики.

Культуральный метод. Возбудитель выделяют путем заражения перевиваемой культуры клеток L и на клетках первично-трипсинизированных фибробластов куриного эмбриона.

Серологический метод. Проводится со второй недели болезни. Для определения специфических антител в крови больных используют ИФА (иммуноферментный анализ), РА (с антигеном из культуры Proteus mirabilis), непрямую РИФ, РСК.

Биопроба. Кровью больного внутрибрюшинно заражают белых мышей, которые через 6-14 дней погибают. Риккетсии выявляют в мазках-отпечатках внутренних органов животного, окрашенных по Романовскому— Гимзе, Здродовскому или люминесцирующими сыворотками против Orientia tsutsugamushi.

Эрлихии (Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia phagocytophilа и др.) поражают фагоциты (тканевые макрофаги, моноциты - Е. chаffeensis, гранулоциты - Е. phagocytophila) животных и человека. Возбудитель — R. ehrlichia сходен с другими риккетсиями, размножается в лейкоцитах. Проявляется лихорадкой, нарушением самочувствия, сыпью, изменением лейкоцитарной формулы. Прогноз благоприятный.

Микроскопический метод берут мазки из крови больного, в которых при окраске по Романовскому—Гимзе компактные пурпурные скопления эрлихий (морулы) находятся в цитоплазме лейкоцитов в виде тутовой ягоды или малины.

Культуральный метод. Возбудитель выделяют из крови путем длительного культивирования (до 4 недель) на перевиваемых культурах ткани, которые систематически (2 раза в неделю) проверяются на присутствие эрлихий в мазках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, с помощью ИФМ или ПЦР.

Генодиагностика заключается в постановке ПЦР.

Серологический метод применяется непрямая РИФ и иммуноблотинг.