Вопрос 2. Carbutamide — карбутамид (Букарбан)
Ы-(п-аминобензолсульфонил)-Н-бутилмочевина
Белый кристаллический порошок, практически нерастворим в воде, растворим в этаноле. Ввиду наличия в молекулах сульфамидной группы, растворы в этаноле и диметилформамиде проявляют кислотные свойства. Растворим в растворах щелочей.
Подлинность производных сульфонилмочевины можно установить методом спектрофотометрии в УФ-области по расположению максимумов поглощения и по удельному показателю поглощения. Раствор карбутамида в этаноле имеет максимум при 269 нм, в 0,1 М растворе хлороводородной кислоты — при 266 и 272 нм, а в 0,1 М растворе гидроксида натрия — при 255 нм.
ПОДЛИННОСТЬ производных сульфонилмочевины устанавливают также с помощью химических реакций.
При нагревании карбутамида в растворе гидроксида калия происходит гидролиз с образованием аммиака, который можно обнаружить по запаху или по изменению окраски лакмусовой бумаги:
Реакция гидролиза происходит также при кипячении производных сульфонилмочевины с разбавленной серной кислотой. Последующее добавление 30%-пого раствора гидроксида2. Измельчение
3. Экстрагирование
4. Очистка вытяжки от белкрв
5. Очистка от жиров
6. Стандартизация
7. Получение лек.формы
Свежие или замороженные ткани железы измельчают на мясорубке-волчке и экстрагируют способом бисмацерации в эмалированном реакторе с мешалкой. В качестве экстрагента для первой мацерации используют 80—85 % этанол, для второй — 57 % этанол, подкисленный кислотой ортофосфорной (серной, хлороводородной) до значения рН 2,8— 3,0. Экстракцию проводят 1.5—4 ч при перемешивании. Экстракты отделяют фильтрованием или центрифугированием, объединяют и проводят очистку.
Предварительная, грубая очистка экстракта одинакова по всем технологиям, она сводится к удалению анионов кислот. Так, анион кислоты ортофосфорной (РОГ3) удаляют раствором кальция хлорида при значении рН 3,3—-3,8. Затем осуществляют депротеинизацию — последовательное отделение балластных белковых веществ при значении рН 4,5—5,1 и 3,5 при температуре 0 °С. Выпадающие осадки отделяют центрифугированием. Прозрачный экстракт концентрируют выпариванием на вакуум-дистилляционной установке пленочного типа при температуре не выше 30 °С до содержания этанола 10—25% в возможно более короткий срок, при строгом соблюдении температурного режима, так как длительное нагревание приводит к инактивации инсулина. Концентрированный остаток очищают от липидов и балластных белков отстаиванием на холоду (0—4 °С) при значении рН 3,0—3,3. От всплывшего слоя липидов и осадка балластных белков экстракт отделяют фильтрованием. Из сгущенного, очищенного экстракта инсулин-сырец выделяют двукратным высаливанием 25 % раствором натрия хлорида или 40 % раствором аммония сульфата. Этот способ используется на некоторых заводах с 1928 г. по настоящее время.
Наиболее прогрессивным является способ выделения инсулина ионообменной хроматографией. По этому способу операцию упаривания исключают, а осуществляют сорбцию Для удаления жира катионит промывают 65—67 % этанолом, а для отделения балластных белков —- 0,3 М раствором ацетатного буфера (рН 5,3). Десорбцию инсулина проводят 0.01—0,05 М раствором аммонийного буфера (рН 9,8—10,0). Инсулин неустойчив в щелочной среде, поэтому десорбируют его быстро, элюат немедленно подкисляют кислотой хлороводородной до значения рН 4,1—4Г5 и добавляют ацетон. Осадок балластных веществ удаляют. Инсулин осаждают в виде цинк-инсулина раствором цинка ацетата (рН 6,1—6,2), очищают кристаллизацией. Цинк-инсулин растворяют в воде, подкисленной кислотой лимонной до значения рН 2,6—2,8. Раствор отстаивают в течение 1 ч и выпавший осадок балластных белков удаляют фильтрованием через кизельгур. Фильтрат смешивают с ацетоном, добавляют цинк хлористый и фенол, охлаждают до температуры 0 °С, создавая условия для медленной кристаллизации инсулина. Раствор подщелачивают до значения рН 8,0—8,5; оставляют на 2—3 мин, затем создают значение рН 6,7—6,8 н перемешивают 1 ч;натрия приводит к выделению жирных капель аминов, имеющих характерный запах. После более продолжительного нагревания (10-30 мин) в присутствии 50%-ной серной кислоты (с обратным холодильником), последующего охлаждения и нейтрализации выделяется осадок сульфамида.
Наличие серы устанавливают после спекания со смесью карбоната и нитрата калия. Затем плав растворяют в хлороводородной кислоте и в фильтрате открывают сульфат-ион.
Сульфамидную группу в глибенкламиде обнаруживают по образованию комплексного соединения с ионом меди (II), выпадающего в виде осадка зеленовато-голубого цвета.
Карбутамид дает ряд других реакций, подтверждающих его подлинность. При пиролизе его кристаллов выделяется аммиак, а плав приобретает фиолетово-красный цвет. После обработки плава этанолом раствор окрашивается в красновато-фиолетовый цвет. При нагревании кристаллов карбутамида и резорцина с 1 мл серной кислоты смесь окрашивается в темно-красный цвет, после разбавления водой и добавления щелочи появляется желто-зеленая флуоресценция.
Карбутамид отличается от других производных сульфонилмочевины наличием первичной ароматической аминогруппы в молекуле.
Реакцию диазотирования и азосочетания с в-нафтолом в щелочной среде. Появляется красное окрашивание.
Реакция образования оснований Шиффа.
Количественное определение карбутамида выполняют по первичной ароматическойаминогруппе нитритометрическиы методом, устанавливая точку эквивалентности с помощью потенциометра, внешнего или внутренних индикаторов.
Хранят букарбан в сухом, защищенном от света месте, при температуре до 25 °С во избежании процессов гидролиза, окисления препарата. Список Б.
Производные сульфонилмочевины стимулируют образование инсулина в-клетками поджелудочной железы, понижая при этом содержание сахара в крови. Назначают при различных формах сахарного диабета в виде таблеток; карбутамид по 0,5 г, 43.13.