41.Забарвлення зрізу залізним гематоксиліном по гейденгайну

При цьому методі тканини спочатку протравлюють у розчині залізних галунів. В залежності від властивостей тканин вони сприймають галун з різною інтенсивністю. При подальшому дії гематоксилінового розчину утворюється чорний залізно-гематеіновий лак, який при наступній за цим екстракцією різною мірою утримується окремими елементами тканин. Готують два розчини.

А. Протрава: готують 3% водний розчин залізних квасцов (синоніми: железноамміачние галун, сірчанокислий окисно-залізний аміак, ферріамміачний сульфат). Придатні тільки світло-фіолетові кристали; розклалися буро-жовті кришаться кристали вживати не варто. Кристали, покриті буро-жовтим порошком, слід обмити дистильованою водою.

Б. Барвник: 0,5 г гематоксилін розчиняють в 10мл 96%-спирту і розбавляють 90 мл дистильованої води. Розчин повинен дозрівати протягом 4-5 тижнів при доступі повітря. Перед вживанням його розбавляють рівною кількістю дистильованої води. Після фарбування розчин профільтровиують і повторно вживають; з часом його фарбувальні якості поліпшуються.

Можна користуватися свіжоприготованим розчином. Тоді барвник дає блакитно-сірі відтінки. Чим розчин старіше, тим більш темні тони він дає, і препарат повільніше диференціюється. Нарешті, найбільш старі і окислені розчини викликають рудий тон забарвлення і практично стають непридатними. Якщо в запасі немає зрілого розчину, можна за допомогою NaJO3 викликати штучне дозрівання (на 0,5 г гематоксилін точно 0,1 г NaJO3).Можна використовувати наступний спосіб швидкого отримання "дозрілого" розчину гематоксилін; при кип'ятінні розчиняють 1 г гематоксилін в 95 мл дистильованої води, після чого додають 5 мл карболової кислоти.

Для тих же цілей Г.В.Епштейн рекомендує до кожним 100 мл свіжоприготованого барвника додавати 1 краплю 2,5%-розчину квасцов. Розчин довго зберігає свої фарбувальні властивості. При появі осаду рідину слід фільтрувати [8].

Фарбування препаратів методом Гейденгайна.

1.Зрізи протравлюють в 3%-залізних квасцах 12-24 години.

2Споліскують дистильованою водою.

3Забарвлюють розчином гематоксилін 12-24 години.

4Споліскують дистильованою водою.

5Диференціюють 3%-залізними галуном (краще 1%-розчином), контролюючи під мікроскопом

6Промивають проточною водою 15-60 хвилин.

7Зневоднюють в спиртах і, провівши через ксилол, укладають в бальзам або попередньо дофарбовували протягом 3-10 хвилин 0,1%-водним розчином еозину і потім зневоднюють.

Процес протравлення і фарбування можна прискорити (1-2 години), якщо проводити його в термостаті при температурі 45-50 ° С. В результаті зерна хроматину, ядерця, різні гранули, центросоми, фібрили забарвлюються в чорний колір. Так як розфарбовування різних елементів йде з різною швидкістю, можливо за бажанням дослідника виявити потрібні структури. Швидкість розфарбовування значною мірою обумовлюється товщиною зрізів, характером фіксації, фізико-хімічними властивостями клітин і т.д. Однак слід пам'ятати, що самі різнорідні елементи клітин і тканин при забарвленні гематоксиліном можуть забарвлюватися однаковим чином.