З. Окраска на гликоген с контролем амилазой

Промыть препарат проточной водой в течение 15 мин. Затем на несколько секунд погрузить в эфир. Инкубируют с 0,1% раствором амилазы (1 мг — амилазы, 1 мл — дистиллированная вода, рН 7,0) при 37°С 15-30 мин. Промывают в дистиллированной воде 20 мин. Переносят в йодную кислоту (200 мг иодной кислоты и 40 мл дистиллированной воды, готовят перед работой) на 3 мин. Промывают в дистиллированной воде 3 раза по 3 мин. Помещают в реактив Шиффа (фуксин 1 г, до 200 мл дистиллированной воды, прокипятить несколько мин, остудить раствор до 50°С; профильтровать; добавить 20 мл 1N HCl; остудить; добавить 1 г Na₂S₂O₅; добавить активированный уголь.) на 40 мин, в темном месте. Промывают в сернистой воде (1 г Na₂S₂O₅; 200 мл — дистиллированной воды; 10 мл — 1N HCl, готовят непосредственно перед работой) 3 раза по 3 мин. Промывают в дистиллированной воде 3 мин. Докрашивают гематоксилином 20 мин. Промывают в водопроводной воде. Высушивают.

И. Выявление липидов суданом черным

Препарат фиксируют в парах 10% формалина 3 мин. Затем ополаскивают дистиллированной водой 5 с. Окрашивают суданом черным В (70⁰ C₂H₅OH — 100 мл, судан черный B в избытке, краску растворяют в этиловом спирте при нагревании до состояния перенасыщения, при этом на дне колбы должны выпасть кристаллы судана) при 37 °С  - 1 ч. После этого ополаскивают в спиртах нисходящей концентрации (70%, 50% и 40%). Потом ополаскивают в дистиллированной воде. Докрашивают ядра кармином 1 сут. И еще раз ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

К. Реакция на пероксидазу с бензидином

Фиксация в спиртово-формалиновой смеси (9 частей 96° C₂H₅OH и 1 часть 40% формалина) — 30 сек. Опустить мазок на несколько секунд в эфир. Инкубация 10-15 мин в темном месте при температуре 22°C . Инкубационная среда (готовится перед работой): 5-7 мл 40% C₂H₅OH + 2 капли 3% H₂O₂ + несколько кристаллов бензидина. Смешать, профильтровать. Смыть водопроводной водой. Высушить.

Л. Неспецифическая эстераза по Хейхо

Мазок фиксируют в парах 10% формалина 3 мин. Переносят в эфир на несколько секунд. Инкубируют при 22 °С в темном месте в течение 2 ч. Инкубационную среду готовят перед работой. В ее состав входят 5 мг альфа-нафтилацетата, 2 капли ацетона, 20 мл 0,1 М трис-НС1-буфера (трис — 121 мг; дистиллированная вода — 34 мл; 0,1 HCl — 5 мл, pH 7,8) и 25 мг синего прочного В, или РР, или прочного красного, которые растворяют и фильтруют.

М. Выявление щелочной фосфатазы по Хейхо

Мазок фиксируют в парах 10 % формалина 3 мин. Опускают на несколько секунд в эфир. Инкубируют при 22 °С (в темном месте) 3 ч. Инкубационную среду готовят перед работой. В ее состав входят 1 мг фосфата нафтола AS-TR (предварительно растворенного в 2 каплях диметилформамида) и 1 мл 0,08 М трис-НС1-буфера (рН 9,2), которые смешивают и фильтруют. Промывают в водопроводной, а затем в дистиллированной воде. Докрашивают 1% водным раствором метилового Зеленого несколько секунд. Промывают в водопроводной воде и высушивают.

 

Н. Кислая фосфатаза по Барку

Мазок фиксируют в парах 10% нейтрального формалина (40% формалин — 1 часть, дистиллированная вода — 3 части) 3 мин. Переносят в эфир на несколько секунд. Инкубация в термостате при 37°C 4,5—5 часов. Инкубационная среда готовится перед работой. Раствор «А»: Нафтол — AS-В7 (или ASTP, AS-MX- фосфат). В 10 мг нафтилфосфата растворить 2 капли диметилформамида, смешать с 25 мл 0,05 М раствора ацетатного буфера (pH 5,5). Раствор «Б»: 4 капли 4 % раствора нитрита натрия (NaNO₂₎ смешивают с 4 каплями 4% гексазотированного парарозанилина (1 г фуксина, 25 мл 2 N HCl, для гексоазотирования встряхивают до оранжево-желтого цвета). Встряхивать 30 сек. до оранжево-желтого цвета. Растворы слить и профильтровать. Промыть проточной водой. Промыть дистиллированной водой. Докрасить ядра метиленовым зеленым — несколько секунд. Промыть проточной водой. Высушить.

2