- •Выписка из учебной программы.
- •Раздел 2: обмен веществ.
- •Тема 2.1. Ферменты.
- •Практическое занятие № 27 – 4 часа.
- •Карта внутри- и межпредметных связей.
- •Учебно-методическое обеспечение занятия. Оборудование и реактивы. Биологическая жидкость.
- •Учебно-методическое обоснование темы.
- •Цели и результаты обучения по уровням усвоения учебного материала (выписка из рабочей учебной программы)
- •Приложение № 1. Материалы контроля исходного уровня знаний по теме: «Ферменты».
- •Фронтальный опрос.
- •1.2. Тестовый контроль знаний.
- •1.2. Тестовый контроль знаний (э т а л о н)
- •Приложение № 2. Формирование новых понятий, умений и навыков.
- •2.1. Вводное слово преподавателя.
- •Приготовление рабочих растворов (см. Инструкцию приложение № 3).
- •Закрепить теоретические знания по теме «Ферменты».
- •Структура занятия.
- •Теоретическая часть:
- •Вводное слово преподавателя.
- •2. Указания к занятию:
- •3. Практическая часть.
- •1. Буфер – субстрат.
- •Осаждающий раствор (реактив № 3) – готов к использованию.
- •Проведение анализа.
- •4.1. Выполнение лабораторной работы.
- •4.2. Учет результатов.
- •5.2. Фронтальный опрос.
- •Для преподавателя:
- •Приложение № 8.
- •8.1. Методические указания. Рекомендации.
- •Приложение № 10. Критерии оценки знаний, умений учащихся.
- •Закрепить теоретические знания по теме «Ферменты».
- •Структура занятия.
- •1. Теоретическая часть:
- •Вводное слово преподавателя.
- •2. Указания к занятию:
- •3. Практическая часть.
- •1. Буфер – субстрат.
- •Осаждающий раствор (реактив № 3) – готов к использованию.
- •Проведение анализа.
- •4. Закрепление знаний, умений и навыков.
- •4.1. Выполнение лабораторной работы.
- •4.2. Учет результатов.
- •5. Контроль конечного уровня знаний, умений.
- •5.2. Фронтальный опрос.
-
Осаждающий раствор (реактив № 3) – готов к использованию.
Примечание: Буфер-субстрат перед каждым дозированием необходимо сильно встряхивать несколько секунд. Использование расслоившейся суспензии не допускается, так как приводит к искажению результатов.
-
Лабораторная работа № 1. Определение общей активности α-амилазы в сыворотке крови методом «конечной точки».
ПРИНЦИП: α-амилаза разрушает нерастворимый цветной крахмальный субстрат с образованием синего, растворимого в воде красителя. Количество красителя в растворе после остановки реакции прямо пропорционально активности фермента. Активность амилазы выражена в международных единицах активности, где 1 ЕД – это количество амилазы, которое гидролизует 1 мкмоль субстрата за 1 минуту при 37°С совместно с бактериальной α-глюкозидазой.
Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, центрифужные пробирки, дозаторы на 100 мкл и 50 мкл, пипетки градуировочные 1 мл и 2мл, стаканы, секундомер, термостат водный, спектрофотометр, центрифуга, фильтровальная бумага, воронки, вата; набор реактивов «Лахема» Россия.
Материал для исследования: сыворотка крови, моча.
Проведение анализа.
Длина волны 590 нм, кювета 1 см.
|
Реактивы
|
Опытная проба |
Холостая проба |
|
|
В центрифужные пробирки внести: |
|
|
1. Буфер – субстрат |
1 мл |
1 мл |
|
|
Инкубировать 5 минут при температуре 37°С. |
|
|
2. Сыворотка крови (моча) |
100 мкл или 50 мкл мочи |
– |
|
3. Дистиллированная вода |
– |
100 мкл или 50 мкл (для исследования мочи) |
|
|
Включить секундомер! Перемешать в течение 5 секунд и поставить в термостат на 15 минут. |
|
|
4. Осаждающий раствор (реактив № 3) |
2 мл |
2 мл |
|
|
Перемешать! Выдержать пробирки при комнатной температуре 15 минут. При срочном анализе этот этап можно исключить. Центрифугировать 5 минут при 1500-3000 об/мин. Перенести надосадочную жидкость с помощью чистой пипетки в кювету. |
|
Измерить оптическую плотность при длине волны 590 нм против холостой пробы.
-
Учет результатов при использовании сыворотки крови.
Исходя из полученного поглощения найти по приложенной калибровочной таблице активность α-амилазы в ЕД/л.
Учет результатов при использовании мочи.
При определении в моче найденную по таблице активность необходимо умножить на 2.
-
Референтные величины: сыворотка – 30 – 110 ЕД/л
моча – < 600 ЕД/л.
Приложение № 4.
Закрепление знаний, умений и навыков.