Приложение № 2. Формирование новых понятий, умений и навыков.

2.1. Вводное слово преподавателя.

Альфа-амилаза (диастаза) – фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов (крахмала, гликогена, амилозы и других продуктов, содержащих три и более остатков глюкозы) до декстринов и мальтозы. Наиболее богаты этим ферментом поджелудочная и слюнные железы. Альфа-амилаза секретируется в кровь из этих органов. Кроме того, фермент содержится в фаллопиевых трубах, кишечнике, печени, почках, легких, жировой ткани. Плазма крови человека содержит альфа-амилазу панкреатическую (Р) и слюнную (S). В каждом из этих типов амилаз имеется несколько изоформ. С мочой выделяется в основном Р-амилаза, что обусловливает большую информативность определения активности альфа-амилазы в моче как теста оценки функционального состояния поджелудочной железы. Полагают, что 65% амилазной активности мочи обусловлено панкреатической амилазой; в то время, как 60% амилолитической активности сыворотки обеспечивается амилазой слюнных желез. Этим объясняется то обстоятельство, что при остром панкреатите именно Р-амилаза увеличивает свою активность в сыворотке крови (до 89%) и особенно в моче (92%) без изменения показателей активности амилазы слюнных желез в этих биологических жидкостях.

Количественное определение диастазы мочи применяется в клинике в качестве вспомогательного средства для диагностики поражений поджелудочной железы. О количестве фермента судят по производимому им действию. За единицу любого фермента принимают то его количество, которое обеспечивает превращение 1 мкмоль субстрата (уменьшение его количества) или образование 1 мкмоль продукта реакции в 1 минуту при заданных условиях.

2. Изучение инструкции к выполнению практической работы.

2. Приготовление рабочих растворов (см. Инструкцию приложение № 3).

Приложение № 3.

Инструкция по выполнению практической работы № 27 по теме

«Ферменты. Количественное определение активности амилазы

в биологических жидкостях».

Цели занятия:

1. Закрепить теоретические знания по теме «Ферменты».

2. Закрепить навыки и умения в приготовлении растворов и реактивов.

3. Провести биохимическое исследование – количественное определение активности α-амилазы в сыворотке крови и моче.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Организацию молекул ферментов, их биохимическая роль.

2. Особенности протекания ферментативного катализа.

3. Ферментативные методы исследования биохимических показателей.

4. Классы ферментов.

5. Технику приготовления растворов и реактивов.

6. Технику дозирования и пипетирования растворов и реактивов для исследования.

7. Технику и меры предосторожности в работе на спектрофотометре, ФЭКе.

8. Технику инкубирования проб.

Учащийся должен уметь:

1. Работать с химической посудой, пипетками, дозатором.

2. Работать с термостатом, спектрофотометром, ФЭКом.

3. Приготовить необходимые рабочие растворы из набора реактивов.

4. Приготовить опытные и контрольные пробы для определения активности α-амилазы в биологических жидкостях.