- •Курск – 2014
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию
- •План практических занятий по микробиологии, вирусологии
- •Литература
- •Периодические издания (журналы)
- •Электронное информационное обеспечение и
- •Интернет-ресурсы
- •Электронная библиотечная система медицинского вуза «консультант студента» www.Studmedlib.Ru.
- •Занятие 1
- •Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Обязанности дежурного
- •Дополнительный материал к занятию Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды
- •Мероприятия при возникновении аварии
- •Порядок действий при возникновении аварийной ситуации
- •Порядок проведения дезинфекционных мероприятий
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов
- •Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
- •Занятие 2
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 3
- •Структура бактериальной клетки
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 4
- •Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 5
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 7
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 8
- •Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Оценка степени эпидемической опасности почвы
- •Определение общего числа микроорганизмов
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды (согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
- •Метод мембранных фильтров
- •Бродильный метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 9
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в лпу
- •Режимы обеззараживания различных объектов, заражённых патогенными микроорганизмами
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 10
- •Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия
- •Цель самоподготовки
- •Метод серийных разведений
- •Количественные методы или методы титрования бактериофагов
- •Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
- •Фаготипирование бактерий
- •Применение бактериофагов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 11
- •Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология
- •Цель самоподготовки
- •Техника пцр
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие № 12
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «физиология микробов.»
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Заражение лабораторных животных проводят для:
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 14
- •Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 15
- •Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 16
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Иммуноблоттинг
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 17
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Лечебно-профилактические препараты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 18
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «Учение об инфекции. Иммунологические основыдиагностики лечения и профилактики заболеваний»
- •Контрольные вопросы
- •Частная микробиология
- •Занятие 19 общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 20
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 22
- •Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 23
- •Итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»
- •План изучения темы
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студентов на практическом занятии
- •Занятие 25
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
- •Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 26 микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 27
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 29 микробиологический диагноз зоонозных инфекций – чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 30 микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов
- •Цель самоподготовки
- •Дополнительный материал к занятию Методы диагностики сифилиса Выявление возбудителя
- •Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 31 микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 32 итог по разделу «микробиологическая диагностика зоонозных инфекций, спирохетозов микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов»
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 33 морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Вирусы – возбудители острых респираторных вирусных инфекций (орви), герпетической инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Серологический метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 35 возбудители вич-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.
- •Цель самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 36 итог по разделу «медицинская вирусология».
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 37
- •Работа студента на практическом занятии
- •Экзаменационные вопросы по микробиологии, вирусологии
- •I раздел
- •II раздел
- •III раздел
Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг – (от англ. «blot» – пятно) – метод идентификации антигенов (или антител) с помощью известных сывороток (или антигенов). Представляет собой сочетание гель-электрофореза с ИФА. Первоначально бактериальные клетки или вирионы разрушают при помощи ультразвука, а затем методом электрофореза разделяют все антигены вируса или бактериальных клеток и получают коммерческий реагент на специальной нитроцеллюлозной плёнке. При постановке иммуноблоттинга на плёнку с известными антигенами наносится исследуемая сыворотка пациента. После инкубации и отмывания несвязавшихся антител, приступают к ИФА – на плёнку наносят антисыворотку к иммуноглобулинам человека, меченную ферментом, и хромогенный субстрат, изменяющий окраску при взаимодействии с ферментом. При наличии комплексов антиген-антитело-антисыворотка к иммуноглобулину-фермент на носителе появляются окрашенные пятна. Метод иммуноблоттинга позволяет отдельно обнаружить антитела на различные антигены возбудителя (например, при ВИЧ-инфекции иммуноблоттинг выявляет антитела на gp120, gp24 и другие антигены вируса).
Радиоиммунный анализ (риа)
В основе метода лежит реакция антиген-антитело с применением метки антигена или антитела радионуклидом. В качестве метки используются 125I, 14C, 3H, 51Cr и другие радионуклиды. Образующиеся иммунные комплексы выделяют из системы и определяют их радиоактивность на счётчиках (β-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Широко распространён твёрдофазный вариант РИА с использованием меченых антител или антигенов, сорбированных в лунках полистироловых панелей.
РИА применяют для выявления антигенов микробов, вирусов, различных гормонов, ферментов, лекарственных веществ, иммуноглобулинов, а также других веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях 10-12–10-15 г/л.
Контрольные вопросы
Реакция иммунного бактериолиза: что это за реакция; что является антигеном, что – антителами, механизм реакции, методы постановки, практическое применение. Реакция иммунного гемолиза: необходимые ингредиенты, методика постановки; контроли, практическое применение. Реакция локального гемолиза в геле (реакция Йерне): принцип реакции, методика постановки, практическое применение. Реакция связывания комплемента: принцип реакции; что образуется при взаимодействии иммунной сыворотки со специфическим антигеном; что происходит с комплементом, если он присутствует при этом взаимодействии? Какова судьба комплемента в том случае, если между антигеном и антителами нет специфического сродства? С помощью какой реакции можно определить, что произошло с комплементом; почему используется именно эта реакция; каков видимый положительный результат РСК? Почему? Какое свойство комплемента используется в первой фазе РСК? Во второй фазе? Если конечным результатом РСК является гемолиз, что это означает – положительный или отрицательный результат? Объясните результаты: РСК+ + + +, РСК+ + +, РСК+ +, РСК+. Назовите ингредиенты первой системы РСК и ингредиенты второй системы РСК. Почему исследуемую сыворотку необходимо инактивировать? Как титруют комплемент? Гемолитическая сыворотка: что она содержит, как её получают, что такое титр и как его определяют? Какие животные используются для получения компонентов РСК? Методика постановки РСК на холоде. При постановке каких из перечисленных реакций необходимо участие комплемента: преципитации, флоккуляции, агглютинации, выявления неполных антител, иммунного бактериолиза, иммунного гемолиза, Йерне, РСК? Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – укажите последовательность событий при прямой реакции Кунса; необходимые ингредиенты. Что является антигеном, что – антителами, чем помечены антитела, как учитывается результат реакции, как выглядит положительный результат? Практическое применение – что можно определить с помощью этой реакции? Непрямая реакция иммунофлюоресценции – укажите последовательность событий при этой реакции, необходимые ингредиенты, что является антигеном, какие иммунные сыворотки применяются; практическое применение; преимущество непрямой РИФ по сравнению с прямой реакцией. Иммуноферментный анализ (ИФА) – принцип реакции; необходимые ингредиенты; укажите последовательность событий при постановке реакции с целью обнаружения антигена в исследуемом материале; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате, как он выглядит? Укажите последовательность действий при постановке ИФА с целью обнаружения антител в исследуемой сыворотке; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате? Иммуноблоттинг – принцип реакции; основные этапы; необходимые ингредиенты; как учитывается результат; преимущества реакции. Радиоиммунный анализ (РИА) – из каких основных этапов складывается реакция; чем помечены антитела или антигены, как учитывается результат? Иммунная-электронная микроскопия – принцип метода; основные этапы; необходимые ингредиенты; чем помечены антитела; как учитывается результат реакции.