- •Курск – 2014
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию
- •План практических занятий по микробиологии, вирусологии
- •Литература
- •Периодические издания (журналы)
- •Электронное информационное обеспечение и
- •Интернет-ресурсы
- •Электронная библиотечная система медицинского вуза «консультант студента» www.Studmedlib.Ru.
- •Занятие 1
- •Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Обязанности дежурного
- •Дополнительный материал к занятию Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды
- •Мероприятия при возникновении аварии
- •Порядок действий при возникновении аварийной ситуации
- •Порядок проведения дезинфекционных мероприятий
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов
- •Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
- •Занятие 2
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 3
- •Структура бактериальной клетки
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 4
- •Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 5
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 7
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 8
- •Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Оценка степени эпидемической опасности почвы
- •Определение общего числа микроорганизмов
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды (согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
- •Метод мембранных фильтров
- •Бродильный метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 9
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в лпу
- •Режимы обеззараживания различных объектов, заражённых патогенными микроорганизмами
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 10
- •Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия
- •Цель самоподготовки
- •Метод серийных разведений
- •Количественные методы или методы титрования бактериофагов
- •Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
- •Фаготипирование бактерий
- •Применение бактериофагов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 11
- •Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология
- •Цель самоподготовки
- •Техника пцр
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие № 12
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «физиология микробов.»
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Заражение лабораторных животных проводят для:
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 14
- •Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 15
- •Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 16
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Иммуноблоттинг
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 17
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Лечебно-профилактические препараты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 18
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «Учение об инфекции. Иммунологические основыдиагностики лечения и профилактики заболеваний»
- •Контрольные вопросы
- •Частная микробиология
- •Занятие 19 общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 20
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 22
- •Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 23
- •Итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»
- •План изучения темы
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студентов на практическом занятии
- •Занятие 25
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
- •Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 26 микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 27
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 29 микробиологический диагноз зоонозных инфекций – чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 30 микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов
- •Цель самоподготовки
- •Дополнительный материал к занятию Методы диагностики сифилиса Выявление возбудителя
- •Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 31 микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 32 итог по разделу «микробиологическая диагностика зоонозных инфекций, спирохетозов микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов»
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 33 морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Вирусы – возбудители острых респираторных вирусных инфекций (орви), герпетической инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Серологический метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 35 возбудители вич-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.
- •Цель самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 36 итог по разделу «медицинская вирусология».
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 37
- •Работа студента на практическом занятии
- •Экзаменационные вопросы по микробиологии, вирусологии
- •I раздел
- •II раздел
- •III раздел
Техника пцр
Исследуемым материалом для ПЦР могут быть: культура бактерий, нуклеиновые кислоты, выделенные из клеток, биологические жидкости (кровь, моча), материал из внешней среды – вода, почва, пищевые продукты и т.д., содержащие ДНК или РНК.
На I этапе молекула ДНК разделяется нагреванием до 950С на 2 комплементарные нити.
На II этапе в реакционную смесь добавляют искусственно синтезированные ДНК-олигонуклеотидные праймеры двух типов. Одни из них комплементарны началу одной цепи ДНК, другие – концу второй. Одновременно вводится смесь 4 типов ddNTP. Праймеры соединяются с цепями ДНК.
На III этапе смесь нагревают до 70°С и добавляют фермент ДНК-полимеразу (термостабильную), выделенную в 1980 году Калединым из бактерий Thermus aquaticus, живущих в горячих источниках. Этот фермент достраивает вслед за каждым праймером вторую цепь. Процесс удвоения повторяется 20-30 раз до получения миллиона копий исходной молекулы ДНК. Для проведения ПЦР применяются специальные термостаты – термальные циклеры, позволяющие многократно и быстро проводить нагревание и охлаждение исследуемых проб.
На IV этапе проводится оценка результатов ПЦР с помощью электрофореза в 1% геле с окраской фракций ДНК бромидом этидия, ярко светящимся в ультрафиолетовых лучах. Полученные электрофореграммы затем анализируются.
ПЦР наиболее эффективна для обнаружения микроорганизмов, трудно культивируемых в лабораторных условиях. Как правило, эти возбудители – внутриклеточные паразиты, длительно персистирующие в организме хозяина.
Контрольные вопросы
Дайте определение понятий «наследственность» и «изменчивость». Основные этапы развития учения о наследственности и изменчивости у микроорганизмов. Что такое генотип, фенотип? Особенности структуры генома прокариотов. Структурная модель ДНК по Уотсону и Крику. Что такое генетический код? Какими символами обозначается генотип и фенотип бактерий? Перечислите внехромосомные факторы наследственности. Перечислите бактериальные плазмиды; какие свойства они кодируют? Что такое трансмиссивные, нетрансмиссивные плазмиды? Что такое транспозоны, Is-последовательности? Формы изменчивости микроорганизмов: генотипическая и фенотипическая. Механизмы наследственной изменчивости бактерий: мутации и рекомбинации, виды рекомбинаций. Укажите фамилию учёного, опыты которого с пневмококками наметили пути для поиска материальной основы наследственности. Опишите механизм трансформации, трансдукции, конъюгации. Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний.
ЗАДАЧА. У больного К. с диагнозом бактериальная дизентерия в первый день заболевания выделен возбудитель дизентерии с типичными для этого вида биохимическими и другими свойствами (не ферментировал лактозу). Через два дня у этого же больного был выделен микроб, у которого все свойства были типичными для возбудителя дизентерии: у него появилась способность ферментировать лактозу. Какой генетический механизм возникновения у возбудителя дизентерии нового свойства можно предположить? Как доказать наличие предполагаемого вами механизма изменчивости?
Дайте определение понятий: молекулярная биология, биотехнология, генетическая инженерия. Опишите последовательность этапов генной инженерии. Укажите способы получения чистых генов для генетической инженерии; векторы (проводники) с помощью которых рекомбинантную ДНК можно ввести в клетку. Ферменты, с помощью которых можно расщеплять молекулу ДНК на отдельные фрагменты, «сшивать» отдельные фрагменты ДНК. Достижения генетической инженерии и биотехнологии: перечислите основные продукты, применяемые в медицине. Геномная инженерия: методы, достижения. Значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины.