- •Курск – 2014
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию
- •План практических занятий по микробиологии, вирусологии
- •Литература
- •Периодические издания (журналы)
- •Электронное информационное обеспечение и
- •Интернет-ресурсы
- •Электронная библиотечная система медицинского вуза «консультант студента» www.Studmedlib.Ru.
- •Занятие 1
- •Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Обязанности дежурного
- •Дополнительный материал к занятию Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды
- •Мероприятия при возникновении аварии
- •Порядок действий при возникновении аварийной ситуации
- •Порядок проведения дезинфекционных мероприятий
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов
- •Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
- •Занятие 2
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 3
- •Структура бактериальной клетки
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 4
- •Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 5
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 7
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 8
- •Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Оценка степени эпидемической опасности почвы
- •Определение общего числа микроорганизмов
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды (согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
- •Метод мембранных фильтров
- •Бродильный метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 9
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в лпу
- •Режимы обеззараживания различных объектов, заражённых патогенными микроорганизмами
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 10
- •Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия
- •Цель самоподготовки
- •Метод серийных разведений
- •Количественные методы или методы титрования бактериофагов
- •Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
- •Фаготипирование бактерий
- •Применение бактериофагов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 11
- •Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология
- •Цель самоподготовки
- •Техника пцр
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие № 12
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «физиология микробов.»
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Заражение лабораторных животных проводят для:
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 14
- •Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 15
- •Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 16
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Иммуноблоттинг
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 17
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Лечебно-профилактические препараты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 18
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «Учение об инфекции. Иммунологические основыдиагностики лечения и профилактики заболеваний»
- •Контрольные вопросы
- •Частная микробиология
- •Занятие 19 общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 20
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 22
- •Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 23
- •Итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»
- •План изучения темы
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студентов на практическом занятии
- •Занятие 25
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
- •Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 26 микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 27
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 29 микробиологический диагноз зоонозных инфекций – чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 30 микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов
- •Цель самоподготовки
- •Дополнительный материал к занятию Методы диагностики сифилиса Выявление возбудителя
- •Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 31 микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 32 итог по разделу «микробиологическая диагностика зоонозных инфекций, спирохетозов микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов»
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 33 морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Вирусы – возбудители острых респираторных вирусных инфекций (орви), герпетической инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Серологический метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 35 возбудители вич-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.
- •Цель самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 36 итог по разделу «медицинская вирусология».
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 37
- •Работа студента на практическом занятии
- •Экзаменационные вопросы по микробиологии, вирусологии
- •I раздел
- •II раздел
- •III раздел
План изучения темы
1. Реакция иммунного бактериолиза.
2. Реакция иммунного гемолиза.
3. Реакция связывания комплемента.
4. Реакция с мечеными компонентами: РИФ, ИФА, РИА. ИЭМ, иммуноблоттинг.
5. Реакции иммобилизации.
После изучения темы студент должен уметь
Поставить РСК с готовыми ингредиентами по схеме, учесть и интерпретировать её результат.
Учесть и оценить результаты РИФ.
Учесть и оценить результаты ИФА.
Учесть и оценить результаты иммуноблоттинга.
Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
Реакция предложена Н. Йерне в 1963 г., её применяют для подсчёта клеток-антителопродуцентов. Клетки, продуцирующие антитела (например, плазмоциты селезёнки, после иммунизации животного эритроцитами барана), вносят вместе с эритроцитами барана в гель (агар). Затем в реакционную систему вносят комплемент (наслаивая его на агар) и наблюдают образование зон гемолиза вокруг каждой клетки, образующей антитела к эритроцитам барана. Метод получил распространение во многих областях экспериментальной иммунологии, так как даёт возможность оценить образование антител на уровне отдельных тканей и органов и клеточных популяций иммунной системы после различных воздействий.
Иммуноферментный анализ (ифа)
ИФА – это выявление антигенов (или антител) с помощью соответствующих им антител (антигенов), конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, β-галактозидазой или щелочной фосфатазой).
Наиболее распространён твердофазный ИФА, когда один из компонентов иммунной реакции (антигены или антитела) сорбирован на твёрдом носителе, например, в лунках пластиковой микропланшетки из полистирола. Для определения антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют:
сыворотку крови больного,
антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом,
смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.
Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путём тщательного промывания. При положительном результате изменяется окраска раствора хромогена в жёлто-коричневый цвет (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).
Если необходимо определить в исследуемом материале антиген, тогда в лунку с сорбированными антителами вносят исследуемый материал, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, и смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.
Для постановки ИФА выпускаются специальные тест-системы с набором всех необходимых ингредиентов.
К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики ИФА.
Конкурентные методы ИФА: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Этот тест используется для определения количества антигена в исследуемом материале.
Сэндвич-ИФА (метод двойных антител для определения антигена): фиксированные на твёрдой фазе антитела инкубируют с анализируемым антигеном. После отмывания добавляют избыток меченых антител, специфичных к тому же антигену. Несвязавшиеся антитела отмывают. Продукт ферментативной реакции образуется в количествах, пропорциональных количеству связанного антигена. Можно использовать немеченые вторые антитела; о реакции в данном случае судят по связыванию энзим-меченых антител, специфичных по отношению к IgG (вторые антитела). В любом случае первые и вторые антитела должны принадлежать животным разных видов.
Измерение количества продуктов реакции ИФА проводят в автоматизированном варианте в приборах-ридерах с помощью спектрофотометра, по оптической плотности растворов в лунках при определённой длине волны.