II. Термическая стерилизация:

1) прокаливание на пламени (фламбирование);

2) стерилизация сухим жаром;

4. стерилизация текучим паром – тиндализация;

5) пастеризация;

6)стерилизация насыщенным паром под давлением – автоклавирование.

Приготовление мясопептонного агара (МПА).

Наиболее распространенной средой, на которой растет большинство микроорганизмов, использующих органические формы азота, является МПА.

Для приготовления 1 л среды необходимо сделать следующее:

1) в термостойкую колбу на 1500-2000 мл положить 2 мясных кубика, высыпать 5 г глюкоза (0,5%), 5 г сахара (0,5%), 10г пептона (1%);

2) добавить 1000 мл дистиллированной воды;

3) колбу с ингредиентами поставить на водяную баню для расплавления агар – агара, которого добавляем 20г (2%); (температура плавления агара 100⁰С, застывания - 40⁰С);

4) установить слабо щелочную реакцию среды (большинство микроорганизмов развивается лучше на средах с рН 7,0-7,2), для чего использовать 20%-й раствор Na₂Co₃; реакцию среды проверить лакмусовой бумажкой, смоченной дистиллированной водой. Более удобно использовать индикатор бромтимолблау, имеющей в нейтральной среде бутылочно-синий, в кислой – желтый цвет. 1-2 капли индикатора внести в фарфорную чашечку и стеклянной палочкой добавить 1-2 капли расплавленного МПА;

5) разлить среду по пробиркам и колбам, закрыть ватными пробками, завернуть плотной бумагой. Посуду со средой поместить в автоклав и стерилизовать 30 мин при давление в 1атм. После стерилизации пробирки с еще не застывшей средой раскладывают на ровной поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки, косые или скошенные среды. Плотная среда, застывая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком.

Контрольные вопросы

1. Подразделение питательных сред по: а) составу; б) назначению; в) физическому состоянию.

2. Термическая стерилизация:

способы и характеристика.

3. Холодная стерилизация:

способы и характеристика.

4. Подготовка сред к стерилизации и их стерилизация.

5. Подготовка посуды к стерилизации. Какими способами ее стерилизуют?

Рекомендованный материал

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под редакцией Егорова Н.С. МГУ, М. 1995г Стр. 29-55, 202-208.

4. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. !972. Стр.56-68.

5. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец.литература», С-Петербург. 1998. Стр. 78-79

Занятие 7

ТЕМА: Техника микробиологических исследований.

Вопросы для рассмотрения:

1.Приготовление почвенной суспензии для микробиологического анализа.

2. Техника посева петлей, иглой шпателем, пипеткой.

Задание для выполнения лабораторной работы:

1. Посев на питательные среды микрофлоры воздуха, почвы, воды.

Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посева на чашках Петри – металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки.

Выращивание микроорганизмов на питательных средах называется культивированием (лат. cultivire - выращивание); развивавшиеся микроорганизмы – культурой. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензии, осадок или пленку; при развитии в плотной среде – колонии. Культуры могут быть чистыми (содержат потомство клеток одного вида микроорганизма). Внесение клеток микроорганизмов или какого – либо исследуемого материала (образца почвы, пробы воды) в стерильную питательную среду для получения чистой или накопительной культуры называется посевом. Перенесение уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называется пересевом или пассированием.

Обычно микроорганизмы выращивают при определенной температуре в термостатах или термостатных комнатах. Культивирование при заданной температуре называется инкубацией, или инкубированием (лат. incubabion – выращивание при искусственно созданной температуре).