- •Министерство общего и профессионального образования
- •Занятие 1
- •Правила работы в микробиологической лаборатории.
- •Организация микробиологических лабораторий.
- •Оборудование микробиологических лабораторий.
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 2
- •Вопросы для рассмотрения
- •Материалы для исследования и техника взятия культуры для приготовления препарата.
- •Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.
- •Приготовление мазков и их фиксация
- •Методы окраски мазков и красители, используемые в микробиологии.
- •Красители основной природы
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 3
- •Вопросы для рассмотрения:
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 4
- •Вопросы для рассмотрения
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 5
- •Вопросы для рассмотрения
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 6
- •Вопросы для рассмотрения
- •Задание для выполнения лабораторной работы
- •II. Термическая стерилизация:
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 7
- •Вопросы для рассмотрения:
- •Приготовление почвенной суспензии для посева и техника посева.
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 8
- •Вопросы для рассмотрения:
- •Определение количества клеток микроорганизмов
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 9
- •Вопросы для рассмотрения.
- •Контрольные вопросы.
- •Занятие 10
- •Вопросы для рассмотрения.
- •I.Методы разрушения клеток микроорганизмов.
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 11
- •Вопросы для рассмотрения.
- •Меры предосторожности при работе с мутагенами.
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 12
- •Вопросы для рассмотрения
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 13
- •Вопросы для рассмотрения:
- •Контрольные вопросы.
- •Занятие 14
- •Вопросы для рассмотрения.
- •1.Исследование молочнокислых бактерий
- •2.Микроскопирование маслянокислых бактерий.
- •3.Микроскопирование микроорганизмов, окисляющих жир.
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 15
- •Вопросы для рассмотрения.
- •1.Исследование возбудителей гнилостного распада белковых веществ.
- •2.Микроскопирование азотфиксирующих бактерий свободноживущих в почве.
- •3.Исследование тионовых бактерий.
- •Вопросы для рассмотрения
- •Некоторые таксономические признаки представителей важнейших семейств вирусов человека и животных
- •Контрольные вопросы
- •Методы культивирования вирусов
- •0,2 Х разведение
- •Контрольные вопросы
- •Занятие 18
- •Вопросы для рассмотрения.
- •Контрольные вопросы
Занятие 2
ТЕМА: Приготовление микроскопических препаратов и их окраска.
Вопросы для рассмотрения
Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.
Приготовление мазков и их фиксация.
Красители, используемые в микробиологии.
Простые и сложные методы окраски.
Задание для выполнения лабораторной работы
Приготовить фиксированный препарат из молодой культуры дрожжей, окрасить его в течение 2-3 мин метиленовым синим и микроскопировать без иммерсии.
Приготовить фиксированный препарат из почвенной суспензии, окрасить по методу Грама, микроскопировать его и зарисовать.
Выполнить схематическое изображение клеточной стенки грамотрицательных и грамположительных прокариот.
Материалы для исследования и техника взятия культуры для приготовления препарата.
Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри бактериологической петлей, обоженной в пламени спиртовки или стерильной пипеткой.
Пробирку с бактериальной культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель в правую. Правой рукой вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность стекла, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и ватную пробирку и закрывают пробирку. После приготовления препарата петлю обязательно прожигают (стерилизуют) в пламени спиртовки.
Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.
Для исследования живых клеток микроорганизмов применяют методы «раздавленной и висячей капли». В обоих случаях возможно окрашивание объекта “прижизненными” красителями – “витальная” окраска.
Метод раздавленной капли.
На чистое предметное стекло наносят каплю воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному. Капля должна быть небольшой, не выходящей за края покровного стекла, но если суспензия попала за край - удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. Метод удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также просмотра крупных объектов - плесневых грибов, дрожжей. Применяют при изучении запасных веществ клетки. Метод “висячей” капли – используются для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь её дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают иммерсионный объектив.
Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микроорганизмов вносят в каплю раствора метиленового синего или нейтрального красного в концентрациях от 0,001 до 0,00001%. Затем готовят препарат по одному из выше указанных методов и микроскопируют. После микроскопии препараты, «раздавленной» или «висячей» капли опускают в дезинфицирующий раствор.