0,2 Х разведение

Для индикации вирусов используют реакции гемадсобции и гемагглютинации.

Реакция гемадсорбции (ГА) – это способность вирусов адсорбировать эритроциты на поверхности клеток, в которых они репродуцируются. Для постановки ГА в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов. Через 40-60 мин клетки промывают раствором хлорида натрия. На поверхности клеток, пораженных вирусами, остаются прилипшие эритроциты, а те клетки, которые не поражены -- остаются «чистыми», то есть без эритроцитов на своей поверхности.

Реакция гемагглютинации (РГА) -- способность вирусов осаждать эритроциты с образованием глыб; при этом происходит скучивание эритроцитов. РГА способны вызывать вирусы, содержащие в своей оболочке гемагглютинин.

Для постановки РГА используют пластмассовые пластинки с лункой. В лунках готовят серию разведений вируса. К каждому разведению в лунке добавляют по 0,5 мл 1%-ной суспензии эритроцитов кур. В тех лунках, где титр или количество вируса достаточно для полной агглютинации добавленных эритроцитов, наблюдается их осаждение: дно лунки равномерно покрыто розовой пленкой – агглютинировавшими эритроцитами. Для появления реакции требуется не менее

10⁵ –10⁶ вирусных частиц в 1 мл. В отсутствие вируса эритроциты оседают на дно в виде компактного осадка («пуговицы»).

Записываются результаты проведенной РГА по схеме:

+ + + + выраженная или полная гемагглютинация; тонкая пленка склеившихся эритроцитов на дне пробирки, имеющая вид зонтика;

+ + + наличие небольших просветов в пленке;

+ + наличие пленки с фестончатыи краем из склеившихся эритроцитов;

+ хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный зоной комочков агглютинировавших эритроцитов;

-- резко очерченный осадок, неотличимый от контроля, вид «пуговицы».

РГА также используют для количественного определения вирусных частиц. Конечной точкой титрования считается такое разведение вируса, при котором наблюдается агглютинация половины добавленных эритроцитов. Количество гемагглютинировавших частиц, внесенных в эту лунку, принимают за единицу. Титром вируса в РГА считают число единиц гемагглютинации в 1 мл исходного препарата:

1

Титр вируса (един.РГА / мл) == -----------------------

0,5 х разведение

Контрольные вопросы

1. Правила работы с вируссодержащим материалом.

2. Какие методы используют для культивирования вирусов?

3. Как готовиться первичная культура клеток?

4. Какую культуру клеток называют «полуперевиваемой», «перевиваемой»?

5. Строение куриного эмбриона.

6. Как проводят заражение куриного эмбриона вирусным материалом?

7. Какие методы используют для индикации вирусов?

8. Чем сопровождается ЦПД вирусов?

9. Суть метода негативных колоний.

10. Объяснить понятия «гемадробция», «гемагглютинация».

11. Постановка реакции гемагглютинации.

12. Титр вируса по БОЕ.

Рекомендованный материал

1. Шлегель Г. Общая микробиология. «Мир», М. 1972. Стр. 117-136.

2. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Борисов Л.Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. «Медицина», М. 1993. Стр. 48-54.

3. Практикум по общей вирусологии. Атабеков И.Г. МГУ, М. 1981. Стр.5-26.

4. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. «Медицина», М. 1983. Стр.83-87.