3 курс / Фармакология / Диссертация_Ромодановский_Д_П_Разработка_требований_для_оценки_фармакокинетики

Таблица 40. 90 % доверительные интервалы для отношения геометрических средних исследуемого и

референтного препаратов розувастатина у мужчин и женщин.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в плазме крови, AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови, М – мужчины, Ж - женщины, L – нижняя граница 90% доверительного интервала, U – верхняя граница 90% доверительного интервала, * – значения, не укладывающиеся в диапазон 80,00-125,00%.

У мужчин не эквивалентные результаты были получены в 7 исследованиях (39%), у

женщин в 5 исследованиях (28%). Изучение ассоциации между принадлежностью к определённому полу и выявлением неэквивалентных результатов исследований БЭ розувастатина, выполнили, используя критерий χ2 для чего построена таблица сопряженности

(см. таблицу 41). Анализ влияния фактора гендерной принадлежности на частоту результатов выявления доверительных интервалов, не укладывающихся в диапазон 80,00-125,00 %, показал отсутствие статистически значимой взаимосвязи (χ2=0,125; р>0,05).

Таблица 41. Ассоциация между полом субъектов и частотой выявления не биоэквивалентных

результатов исследований розувастатина.

Примечание: n – количество наблюдений.

Стоит также отметить, что проведенные теоретические расчеты 90% доверительных интервалов лишь косвенно отражают влияние гендерных различий взаимодействия «пол – готовая ЛФ» и внутрииндивидуальной вариабельности, т.к. для получения точных оценок

131

требуется, чтобы полученные значения отношений средних (T/R), CVintra и доверительные интервалы коррелировали с количеством субъектов, включенных в анализ. В нашем анализе количество субъектов было искусственно масштабировано.

Препараты розувастатина не являются высоковариабельными. При планировании и оценке результатов исследований БЭ следует руководствоваться принципами, описанными в Приложении №2.

Симвастатин

Симвастатин – синтетическое гиполипидемическое средство – ингибитор ГМГ-КоА-

редуктазы, является пролекарством, которое после приема внутрь быстро гидролизуется,

превращаясь в активный метаболит β-гидроксикислоту симвастатина. Максимальная концентрация исходного соединения в крови низкая (менее 5% от дозы), максимальная концентрация метаболита достигается через 1,3-2,4 часа после приема19. Период полувыведения активного метаболита составляет около 1,9 часов после внутривенного введения, однако метаболит обнаруживается в моче и кале до 96 часов после приема внутрь20.

Проведен анализ 19 исследований БЭ симвастатина. Во всех исследованиях был стандартный простой перекрёстный дизайн в двух периодах с двумя последовательностями приема препаратов натощак. Препаратом сравнения во всех исследованиях был оригинальный препарат Зокор®, изучались дозы симвастатина от 20 до 80 мг. Период отмывки более чем в половине исследований составил 7 дней, длительность отбора и количество временных точек отбора значительно варьировало в различных исследованиях. Количество субъектов,

включённых в статистический анализ параметров ФК, варьировало от 12 до 63 добровольцев

(Приложение №1). По 18 и 24 субъекта включалось в основном в исследования отечественных препаратов и препаратов из Индии. Более 30 субъектов включались в исследования препаратов из стран ЕС, Турции и Кореи.

В большинстве исследований в крови определяли метаболит симвастатина β-

гидроксикислоту (16 из 19 исследований). Исходное соединение определяли в 13 исследованиях. В качестве биоаналитического метода определения аналитов в большинстве исследований использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию с масс-спектрометрической или тандемной масс-спектрометрической детекцией аналитов, НПКО варьировал в диапазоне 0,1 – 10 нг/мл (Приложение №1).

19Зокор®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001444420/%D0%9F_N013094_01[2019]_0.pdf (дата обращения: 11.05.2020).

20Zocor®. Summary of product characterists [Электронный ресурс] // United States Food and Drug Administration. URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/referral/zocord-article-30-referral-annex-i-ii-iii_en.pdf (дата обращения 11.05.2020).

132

В результате анализа значений концентраций симвастатина и его метаболита были рассчитаны фармакокинетические параметры Cmax, AUC0-t и tmax (таблицы 42 и 43) и построены усредненные фармакокинетические профили (рисунки 23 и 24).

Таблица 42.

Усредненные фармакокинетические параметры симвастатина.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение.

Рисунок 23.

Усредненные фармакокинетические профили симвастатина.

а

133

б

Примечание: а) фармакокинетические профили воспроизведенных препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т19 и R1-R19 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Полученные результаты позволяют судить о том, что tmax симвастатина находиться в районе 1,4-2,2 часов после приема внутрь. Средние значения Cmax находились на уровне 8 (±4)

нг/мл, в зависимости от принимаемой дозировки (20-80 мг) и аналитической методики.

Аналитическую методику определения симвастатина следует планировать с учетом ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования – например, НПКО при ВЭЖХ исходя из полученных максимальных концентраций должен быть менее 0,4 (±0,2) нг/мл.

В проанализированных исследованиях НПКО варьировал в диапазоне 0,1 – 10 нг/мл, таким образом, правило 5% от Cmax было соблюдено не во всех исследованиях.

Период полувыведения симвастатина по результатам исследований БЭ составил 2,4-4,8

часа (данные о периоде полувыведения исходного соединения у референтного препарата не приведены), поэтому при выборе точек забора образцов крови для фармакокинетического анализа препаратов с немедленным высвобождением следует учитывать общую длительность около 24 ч. Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах около 2,4-4,8 часа. Период отмывки с учетом длительности периода полувыведения должен быть 7 дней (общепринятый минимальный период отмывки в исследованиях БЭ).

Таблица 43. Усредненные фармакокинетические параметры β-гидроксикислоты симвастатина.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение.

Рисунок 24. Усредненные фармакокинетические профили β-гидроксикислоты симвастатина.

а

б

Примечание: а) фармакокинетические профили воспроизведенных препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т2-Т18 и R2-R18 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Полученные результаты позволяют судить о том, что tmax β-гидроксикислоты симвастатина находиться в диапазоне 1,7-4,5 часов после приема, средние значения Cmax

135

находились на уровне 4 (±2) нг/мл для дозировок 20-40 мг и 18 (±4,5) нг/мл для дозировки 80 мг. Аналитическую методику определения β-гидроксикислоты симвастатина следует планировать с учетом ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования – например, НПКО при ВЭЖХ исходя из полученных максимальных концентраций должен быть менее 0,2 (±0,1) нг/мл или 0,9 (±0,2) нг/мл. В проанализированных исследованиях НПКО варьировал в диапазоне 0,1 – 10 нг/мл, таким образом, правило 5% от Cmax было соблюдено не во

всех исследованиях.

Период полувыведения β-гидроксикислоты симвастатина, по данным литературы, 5 ч

[319, 421] поэтому при выборе точек забора образцов крови для ФК анализа препаратов с немедленным высвобождением следует учитывать общую длительность около 24 ч. Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах около

1,7-4,5 часа. Период отмывки с учетом длительности периода полувыведения должен быть 7 дней (общепринятый минимальный период отмывки в исследованиях биоэквивалентности).

Усреднённые ФК профили демонстрируют очень близкие графики для исследований №8 и №9, что обусловлено тем, что исследования проведены для различных дозировок одного препарата. Выполнены они в одном и том же клиническом центре по идентичным протоколам и с использованием идентичных аналитических методик и оборудования.

Внутрииндивидуальная вариабельность Cmax и AUC0-t представлена в таблице 44 [59].

Выявлено, что в 7 исследованиях (54%) из 13, в которых определялось исходное вещество, была обнаружена высокая внутрииндивидуальная вариабельность хотя бы одного из ФК параметров симвастатина. В 4 исследованиях (25%) из 16, в которых определялись концентрации метаболита симвастатина, также выявлена высокая внутрииндивидуальная вариабельность. Таким образом,

можно сделать предположение о том, что исходное вещество симвастатин обладает более высокой вариабельностью ФК. Это, по-видимому, связано с пресистемным метаболизмом (эффект «первичного прохождения» через печень) симвастатина [98].

Стоит отметить, что из 7 исследований с определением симвастатина и 4 исследований с определением метаболита, продемонстрировавших высокую вариабельность, ни в одном не изучался препарат, произведённый в России. Также в исследованиях препаратов, произведенных

вРоссии, определяли в основном только метаболит симвастатина (в 6 из 7 исследованиях), что не согласуется с рекомендациями ведущих регуляторов, которые требуют определения исходного соединения.

В8 исследованиях (с высокой внутрииндивидуальной вариабельностью симвастатина и его метаболита) в статистический анализ было включено 287 субъектов. В то время как в остальных 11 исследованиях (из которых 7 исследований препаратов, произведенных в России)

ванализ было включено 229 субъектов. Т.е. усреднённое значение количества субъектов в 8

136

исследованиях составило 36, в остальных исследованиях - 21. Выявленная диспропорция подтверждает наши предположения о наличии различных подходов к проведению исследований БЭ в разных странах, в частности исследований препаратов симвастатина. Так за рубежом,

препараты симвастатина считают высоковариабельными и включают большее количество субъектов. Согласно нашему анализу, препараты симвастатина могут быть отнесены к высоковариабельным ЛП.

Таблица 44. Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности симвастатина и β-

гидроксикислоты симвастатина.

(верхняя граница ДИ)

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; CVpooled - усредненное («пулированное») значение коэффициента внутрииндивидуальной вариабельности; ДИ – доверительный интервал; НД – нет данных (метаболит аторвастатина не определялся); * - значения превышающие 30%.

По аналогии с аторвастатином мы «пулировали» значения коэффициентов внутрииндивидуальной вариабельности симвастатина и метаболита симвастатина.

Результаты «пулирования» данных всех исследований показали, что значения CVpooled Cmax

иAUC0-t исходного соединения более 30% (31%; верхняя граница доверительного интервала 32%,

и28%; верхняя граница доверительного интервала 29%, соответственно), для метаболита CVpooled

были меньше 30% (см. таблицу 44).

Таким образом, для расчета размера выборки в дальнейшие исследования, мы считаем

137

необходимо руководствоваться данными о CVintra Cmax и AUC0-t около 32%. Однако стоит иметь ввиду что всегда имеется риск не доказать БЭ из-за недостаточного количества субъектов исследования.

Всего в исследованиях симвастатина в статический анализ были включены данные от 516

субъектов, из которых 349 было мужского пола и соответственно 167 женского. Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности симвастатина и его метаболита для отдельных популяций субъектов мужского и женского пола представлены в таблице 45.

Таким образом, во всех исследованиях симвастатина участвовало 68% субъектов мужского пола. Из 13 исследований симвастатина, в которых определяли исходное вещество,

только в 5 исследованиях участвовали субъекты обоего пола. В 4 исследованиях были получены значения CVintra ФК параметров более 30% у мужчин. У женщин высокие значения CVintra были выявлены в 3 исследованиях.

Таблица 45. Сведения о поле субъектов исследования и внутрииндивидуальной вариабельности

симвастатина у мужчин и женщин.

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; М – мужчины; Ж – женщины; НД – нет данных (субъекты женского пола не участвовали в исследовании); * - значения превышающие 30%. Показаны данные исследований, в которых определялось исходное соединение симвастатин, нумерация исследований сохранена.

Данные по внутрииндивидуальной вариабельности β-гидроксикислоты симвастатина у мужчин и женщин приведены в таблице 46. Из 16 исследований с определением метаболита симвастатина, в 10 исследованиях участвовали субъекты обоего пола. Высокая вариабельность

138

CVintra у мужчин наблюдалась в 3 исследованиях из 10 исследований, в которых определяли метаболит симвастатина. У женщин высокая вариабельность была выявлена в 1 исследовании,

из 10 исследований, в которых определяли метаболит симвастатина и участвовали субъекты женского пола.

Таблица 46. Внутрииндивидуальная вариабельность β-гидроксикислоты симвастатина у мужчин и

женщин.

Примечание: AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; Cmax – максимальная концентрация в крови; CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности; М – мужчины; Ж – женщины; НД – нет данных (субъекты женского пола не участвовали в исследовании); * - значения превышающие 30%. Показаны данные исследований, в которых определялась β- гидроксикислота симвастатина, нумерация исследований сохранена.

Таким образом, высокая внутрииндивидуальная вариабельность ФК симвастатина и его метаболита наблюдалась и у мужчин и женщин. Частота выявления высокой внутрииндивидуальной вариабельности активного метаболита симвастатина у мужчин и женщин была высокой (10% и 10%). В связи с этим анализ гендерных различий активного метаболита симвастатина не проводился.

В случае симвастатина, более высокая частота случаев (80% vs 60%) была выявлена у мужчин (4 исследований из 5) в сравнении с женщинами (3 исследований из 5), однако полученные данные не позволяют утверждать о более высокой вариабельности симвастатина у

139

мужчин. Согласно данным литературы, вариабельность ФК лекарственных средств чаще наблюдается у женщин в силу анатомо-физиологических различий в сравнении с мужчинами [50, 231]. Поэтому можно рекомендовать дальнейшие исследования симвастатина проводить с включением субъектов обоего пола в равных соотношениях.

В 80% исследований у мужчин и 60% у женщин наблюдались высокие значения внутрииндивидуальной вариабельности Cmax и AUC. Изучение ассоциации между принадлежностью к определённому полу и выявлением высокой частоты внутрииндивидуальной вариабельности ФК параметров, изученных в исследованиях БЭ симвастатина, мы выполнили,

используя точный критерий Фишера, для чего построена таблица сопряженности (см. таблицу

47). Анализ влияния фактора гендерной принадлежности на частоту выявления высокой внутрииндивидуальной вариабельности не выявил различий (F=0,583; p>0,05).

Таблица 47. Ассоциация между полом субъектов и частотой выявления высокой

внутрииндивидуальной вариабельности в исследованиях симвастатина.

Примечание: n – количество наблюдений.

Средние значения внутрииндивидуальной вариабельности Cmax были выше у женщин чем у мужчин (30,57±15,73 и 29,16±14,25, соответственно). Значения отношений внутрииндивидуальной вариабельности между женщинами и мужчинами во всех исследованиях составило – 1,08. Анализ сравнения внутрииндивидуальной вариабельности параметров Cmax у

мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=-0,148; p=0,886).

В отношении параметра AUC0-t средние значения внутрииндивидуальной вариабельности были сопоставимы у мужчин и женщин (25,92±11,65 и 24,51±14,34, соответственно). Отношение значений вариабельности между женщинами и мужчинами составило 1,27. Анализ сравнения внутрииндивидуальной вариабельности параметров AUC0-t у мужчин и женщин не выявил статистически значимых различий (t=-0,171; p=0,869).

Можно судить о том, что внутрииндивидуальная вариабельность параметров ФК у женщин сопоставима (AUC0-t) или незначительно выше (Cmax), чем у мужчин, однако, различия статистически не значимы.

Сравнительный анализ средних логарифмированных значений ФК параметров Cmax и

AUC0-t у мужчин и женщин показал, что в 4 из 10 исследований, в которых участвовали субъекта обоего пола, были обнаружены статистически значимые различия, по крайней мере, для одного

140